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柯萨奇病毒b组5型减毒及抗肿瘤作用研究

柯萨奇病毒B组5型减毒及抗肿瘤作用研究

作者：宋丽芳中国食品药品检定研究院

学位级别：硕士

【目的】通过低温传代筛选CV-b5减毒株,采用反向遗传学方法研究毒力位点,获得一株保持原毒株CV-b5/Faulkner溶瘤效果的CV-b5减毒株,为进一步开发CV-b5溶瘤疗法提供基础。【方法】将原毒株CV-b5/Faulkner进行低温传代(33℃)至第40代,比较... 详细信息

【目的】通过低温传代筛选CV-b5减毒株,采用反向遗传学方法研究毒力位点,获得一株保持原毒株CV-b5/Faulkner溶瘤效果的CV-b5减毒株,为进一步开发CV-b5溶瘤疗法提供基础。【方法】将原毒株CV-b5/Faulkner进行低温传代(33℃)至第40代,比较CV-b5/Faulkner与第30及40代次毒株的毒力与溶瘤作用。通过全基因组测序分析第10、20、30和40代次毒株的核苷酸序列差异。应用反向遗传学方法获得单位点与联合位点共7个突变株,通过致细胞病变效应(CPE)、生长动力学、病毒滴度(CCID)测定以及乳鼠攻毒等方法研究各突变株的生物学特性,确定关键减毒位点。进一步通过腹腔攻毒方式研究乳鼠不同组织器官病毒载量和病理变化。比较发现的关键减毒位点N725K突变株和CV-b5/Faulkner对肺癌和结肠癌细胞系的杀伤作用。利用稳转柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)的鼠源肺癌细胞和结肠癌细胞验证N725K突变株是否通过CAR感染细胞。此外,研究CV-b5突变减毒株的免疫原性和攻毒保护效果。【结果】乳鼠攻毒结果显示,低温传代获得的第30、40代病毒毒力较CV-b5/Faulkner显著降低(Pb5/Faulkner相近。全基因组测序结果显示第20代起出现3个稳定的氨基酸变化位点,分别是G4L、H650Y、N725K。利用反向遗传学方法获得了以上三个氨基酸位点单独及/或联合改变的7个毒株,分别为G4L、H650Y、N725K、G4L+H650Y、G4L+N725K、H650Y+N725K、G4L+H650K+N725K突变株,7个毒株的CPE、生长动力学、CCID均与CV-b5/Faulkner类似。单位点突变毒株乳鼠攻毒实验结果显示,G4L、H650Y和N725K突变株的LD分别为3.372×10、1.896×10、>1.896×10 CCID(原毒株LD为5.996×10 CCID),提示G4L和N725K突变株毒力均明显降低,且N725K毒力低于G4L。联合位点突变株攻毒结果显示,G4L+N725K、H650Y+N725K、G4L+H650K+N725K突变株的LD分别为5.996×10、>1.896×10、>1.896×10CCID,也表明N725K为CV-b5/Faulkner的关键减毒位点。N725K突变株攻毒组在感染4 d后胰腺、脑、脊柱和后腿等部位的病毒载量均显著低于CV-b5/Faulkner组,而且脑、脊柱的病变程度和免疫组化阳性反应均低于CV-b5/Faulkner组,表明N725K减毒株的神经致病力较弱。N725K减毒株对肺癌细胞系(NCI-H1299、A549、NCI-H460)和结肠癌细胞系(SW620、SW480、HCT116、Lo Vo)的杀伤作用与CV-b5/Faulkner相比均无显著性差异,且均呈剂量依赖关系。N725K减毒株和CV-b5/Faulkner对低表达CAR的鼠Lewis肺癌(LLC)和鼠结肠癌细胞***不具有感染能力,而稳转CAR的以上两个细胞系(LLC-CAR,***-CAR)均对N725K减毒株和CV-b5/Faulkner敏感,提示这两个毒株感染细胞所依赖的受体相同。体内抗肿瘤实验结果提示,相同剂量的N725K减毒株和CV-b5/Faulkner对NCI-H1299、LLC-CAR、***-CAR荷瘤动物模型的治疗效果较一致。N725K减毒株一针免疫小鼠可诱导较高的中和抗体水平,并对CV-b5/Faulkner和CV-b5/JS417(GⅠ.D3亚型)具有交叉中和能力,加强免疫可显著提升中和不同毒株的抗体滴度,N725K减毒株、CV-b5/Faulkner和CV-b5/JS417株中和抗体分别提升16.1、7.0和11.7倍。N725K减毒株免疫血清对致死剂量的CV-b5/Faulkner和CV-b5/JS417攻击乳鼠的ED分别为1:3.7和1:256.1;不同剂量N725K减毒株一针或二针免疫产生的母传抗体均能有效保护乳鼠免受致死剂量的CV-b5/Faulkner和CV-b5/JS417的攻击。【结论】本研究通过低温传代获得了保持溶瘤效果的CV-b5减毒株,应用反向遗传学方法确定CV-b5/Faulkner的G4L和N725K两个毒力位点,并发现N725K减毒株对肺癌和结肠癌具备较好的溶瘤作用,为CV-b5用于溶瘤治疗提供了基础。

关键词：柯萨奇病毒b组5型毒力位点反向遗传学溶瘤病毒免疫原性

柯萨奇病毒b组5型感染的人恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞系lncRNA表达谱分析

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基础医学与临床 2022年第1期42卷 68-74页

作者：滕培英李静师玉露杨帆欧霞陈伟昆明理工大学医学院云南昆明650500

目的探索柯萨奇病毒b组5型(CVb5)感染人恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞系(RD)中差异长链非编码RNA(lncRNA)表达谱,为研究CVb5与宿主之间相互作用分子机制提供参考。方法CVb5按感染复数(MOI)为1接种RD细胞24 h后提取总RNA。采用转录组测序技术... 详细信息

目的探索柯萨奇病毒b组5型(CVb5)感染人恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞系(RD)中差异长链非编码RNA(lncRNA)表达谱,为研究CVb5与宿主之间相互作用分子机制提供参考。方法CVb5按感染复数(MOI)为1接种RD细胞24 h后提取总RNA。采用转录组测序技术获取细胞中lncRNA差异表达谱;通过聚类分析、GO分析和KEGG通路富集对差异表达转录本进行了生物信息学分析。同时,利用RNAfold软件对lncRNA进行了二级结构预测。结果与对照组相比,CVb5感染RD细胞后,共有1754个mRNAs和508个lncRNA呈上调表达,3106个mRNAs和760个lncRNA呈下调表达。差异表达lncRNA的共表达基因主要富集在分子结构活性、蛋白质分子结合和体液免疫反应等生物过程;lncRNA靶基因主要参与嗅觉传导途径、细胞因子受体相互作用和神经活性配体受体相互作用等通路。此外,实时荧光定量PCR验证的7个差异表达lncRNA与测序结果一致。结论CVb5感染RD细胞后,差异显著性lncRNA主要参与了免疫相关过程,为充分理解lncRNA在CVb5感染中的调控作用奠定了基础。

关键词：转录组测序技术柯萨奇病毒b组5型长链非编码RNA RD细胞表达谱

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柯萨奇病毒b组5型基因分型标准的研究

国际病毒学杂志 2022年第6期29卷 455-460页

作者：何云杨倩严冬梅祝双利冀天娇卫海燕魏雷雷樊欢路环环肖金波赵鹤鹤王雯慧郭琴邢薇佳张勇山东第一医科大学山东省医学科学院济南250117 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、国家脊髓灰质炎实验室、国家卫生健康委员会生物安全重点实验室、国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京102206 河南省疾病控制预防中心郑州450016 吉林省疾病预防控制中心、吉林省公共卫生研究院长春130062 江苏疾病控制预防中心南京210009

目的依据肠道病毒分子分型的基本原则(基于VP1区全长核苷酸序列差异界值15%~25%),科学建立柯萨奇病毒b组5型(coxsackievirus b5,CVb5)的分子分型标准。方法本研究依托中国手足口病实验室网络,将来自中国大陆2001—2021年间分离出的69株C... 详细信息

目的依据肠道病毒分子分型的基本原则(基于VP1区全长核苷酸序列差异界值15%~25%),科学建立柯萨奇病毒b组5型(coxsackievirus b5,CVb5)的分子分型标准。方法本研究依托中国手足口病实验室网络,将来自中国大陆2001—2021年间分离出的69株CVb5采用逆转录-聚合酶链反应扩增全长VP1编码区,并进行核苷酸序列测定和分析;同时下载并筛选Genbank中截至2022年2月16日的742条CVb5全长VP1编码区核苷酸序列(849个核苷酸)。使用MEGA 7.0软件进行序列比对及构建基于最大似然法的基因进化树,自展值设定为1000,进行CVb5分子分型标准的研究。结果69株中国大陆CVb5分离株与CVb5原型株(Faulkner株)核苷酸和氨基酸的相似性分别为77.3%~81.6%和93.2%~95.3%。系统进化树显示,全球CVb5可分为4个不同分支,分支内核苷酸的平均差异范围在7.3%~13.4%,氨基酸的平均差异范围在1.9%~3.3%,分支间核苷酸的平均差异范围在17.0%~22.3%,氨基酸的平均差异范围为4.2%~4.9%。根据上述分子分型标准,将全球CVb5划分为A、b、C、D四个基因型。A基因型和C基因型CVb5可能在进化过程中已消失,不再流行,而b基因型和D基因型CVb5目前在全球呈现共流行趋势。中国大陆流行的CVb5主要为D基因型,少部分为b基因型。结论本研究建立了CVb5的分子分型的标准,并根据该标准将全球CVb5划分为4个基因型,对进一步了解CVb5的遗传变异变迁规律和进行分子溯源具有重要意义。

关键词：柯萨奇病毒b组5型分子分型 VP1区分型标准手足口病

柯萨奇病毒b组5型VP1蛋白的外源表达及多克隆抗体的制备

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中国免疫学杂志 2019年第4期35卷 463-466页

作者：金维维陈伟庞冉张同禹井申荣昆明理工大学医学院昆明650500

目的:原核表达柯萨奇病毒b组5型的VP1蛋白,并制备其多克隆抗体及检测。方法:提取在Vero细胞中柯萨奇病毒b组5型的RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增获取VP1基因序列,构建原核表达载体,大量诱导表达重组VP1蛋白。用His Trap HP亲和层析柱纯... 详细信息

目的:原核表达柯萨奇病毒b组5型的VP1蛋白,并制备其多克隆抗体及检测。方法:提取在Vero细胞中柯萨奇病毒b组5型的RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增获取VP1基因序列,构建原核表达载体,大量诱导表达重组VP1蛋白。用His Trap HP亲和层析柱纯化重组蛋白,以纯化的目的蛋白为抗原,免疫雄性SD大鼠获得VP1蛋白多克隆抗体血清,ELISA测定该抗体的效价,微量中和实验测定抗体的中和活性,Western blot检测抗体的特异性,免疫组化检测抗体对组织中抗原的识别。结果:成功构建了VP1-pET-28a重组载体,并且在bL21细胞中成功诱导表达,亲和层析柱纯化后蛋白纯度大于90%。ELISA测得抗体的效价为1∶128 000,微量中和实验显示抗体没有中和活性,Western blot分析显示抗体能与CVA16和EV71交叉反应,免疫组化实验表明抗体能够识别组织中的CVb5抗原。结论:本研究成功制备了CVb5 VP1蛋白的高效价的多克隆抗体,为CVb5病毒疫苗和病毒诊断的研发提供了有效的工具。

关键词：柯萨奇病毒b组5型 VP1蛋白多克隆抗体免疫组化

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柯萨奇病毒b组5型的研究进展

中国生物制品学杂志 2017年第4期30卷 433-437页

作者：郝晓甜高帆毛群颖梁争论中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

柯萨奇病毒b组5型(Coxsakievirus b5,CV-b5)引起的轻症包括上呼吸道感染、腹泻及手足口病(hand-footmouth disease,HFMD),也可引起病毒性脑炎、无菌性脑膜炎、胰腺炎、弛缓性麻痹、扩张性心肌炎等多种重症疾病,其中无菌性脑膜炎及病毒... 详细信息

柯萨奇病毒b组5型(Coxsakievirus b5,CV-b5)引起的轻症包括上呼吸道感染、腹泻及手足口病(hand-footmouth disease,HFMD),也可引起病毒性脑炎、无菌性脑膜炎、胰腺炎、弛缓性麻痹、扩张性心肌炎等多种重症疾病,其中无菌性脑膜炎及病毒性脑炎呈全球范围分布,发病年龄主要集中于18岁以下的青少年人群,多发于夏秋季节。另外,CV-b5感染也是导致胰岛素依赖型(Ⅰ型)糖尿病的主要诱发因素之一,还可引起短暂性失语症和小儿急性横贯型脊髓炎等罕见临床症状。本文就CV-b5的病原学、流行病学、实验室诊断及动物模型等方面的研究进展作一综述。

关键词：柯萨奇病毒b组5型病原学流行病学实验室诊断动物模型

柯萨奇病毒b组5型病毒样颗粒疫苗的构建及其免疫原性和保护性初步评价

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柯萨奇病毒B组5型病毒样颗粒疫苗的构建及其免疫原性和保护性初步...

作者：章宁桂林医学院

学位级别：硕士

目的:本课题通过昆虫杆状病毒系统构建柯萨奇病毒b组5型(Coxsackiecirus,Cb5)病毒样颗粒疫苗。方法:1.将优化合成后的Cb5 P1(前体蛋白)和3CD(编码病毒蛋白酶)基因插入质粒pOET5,获得重组质粒pOET5-P1-3CD,通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统... 详细信息

目的:本课题通过昆虫杆状病毒系统构建柯萨奇病毒b组5型(Coxsackiecirus,Cb5)病毒样颗粒疫苗。方法:1.将优化合成后的Cb5 P1(前体蛋白)和3CD(编码病毒蛋白酶)基因插入质粒pOET5,获得重组质粒pOET5-P1-3CD,通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统(flash bAC)表达含有Cb5 P1和3CD基因的重组杆状病毒,并感染sf9昆虫细胞,表达Cb5病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs),以Western blot鉴定衣壳蛋白的表达,通过聚乙二醇沉淀法浓缩释放到细胞培养上清的Cb5 VLPs,采用蔗糖梯度离心的方法纯化该浓缩液,以透射电镜观察VLPs的形态。2.6周龄bALb/c雌性小鼠每组6只,共4组;Cb5 VLPs疫苗为实验组,Cb5灭活疫苗为阳性对照,野生型杆状病毒为阴性对照,PbS为空白对照;辅以完全/不完全弗氏佐剂;分别对每只小鼠以10μg/次的剂量进行腹腔接种,Week0、Week2和Week4分别免疫一次,每次免疫前采集血清,分别于Week6和Week12从尾部取血,ELISA测定各组小鼠血清特异性IgG抗体水平,微量中和实验检测小鼠血清中针对Cb5的中和抗体效价。3.6周龄ICR雌性小鼠每组2只,共4组;分组及免疫接种途径和剂量同方法2。分别对每只小鼠以10μg/0.1 ml的剂量进行皮下接种,Week0、Week2和Week4分别免疫一次。于Week3使母鼠交配,约Week6～7时分娩新生乳鼠,以10只1日龄乳鼠为一组;各组分别以50倍LD50的Cb5鼠适应株颅内感染,持续观察15天并记录乳鼠存活率以及临床症状。结果:1.以灭活Cb5全病毒免疫小鼠抗血清作为一抗,HRP标记羊抗小鼠IgG抗体为二抗,通过Western blot对sf9昆虫细胞的蛋白表达进行验证,在36 k Da和28 k Da处均出现目的带,分别为VP1和VP3;透射电子显微镜下可观察到纯化的Cb5 VLPs颗粒的形态与灭活Cb5病毒颗粒的相似,其直径约为30 nm。***结果显示,Cb5 VLPs疫苗和Cb5灭活疫苗免疫小鼠血清中均可检测到特异性IgG抗体,且其变化趋势相同:在第二次加强免疫后第2周,IgG抗体水平明显升高且达到高峰,之后抗体尽管有轻微下降,但仍持续较高水平。Cb5 VLPs疫苗和Cb5灭活疫苗免疫小鼠血清中IgG抗体水平明显增高(p5)。微量中和实验结果显示,Cb5 VLPs疫苗组小鼠血清针对Cb5的平均中和抗体效价为1∶160,Cb5灭活疫苗组小鼠血清针对Cb5的平均中和抗体效价为1∶128,相对于阴性对照组和PbS组,Cb5VLPs疫苗和Cb5灭活疫苗免疫小鼠血清的中和作用明显增强(p5)。3.小鼠攻毒保护实验结果显示,Cb5 VLPs免疫的母鼠所生小鼠被完全保护,Cb5灭活病毒免疫的母鼠所生小鼠被部分保护,其最终生存率分别为100%和80%。结论:本研究使用昆虫杆状病毒系统成功构建表达Cb5 VLPs作为候选疫苗,该候选疫苗可诱导小鼠产生特异性IgG抗体,且能在体外赋予RD细胞针对Cb5病毒的保护作用,在体内赋予新生小鼠针对Cb5病毒的有效保护力,为研发Cb5疫苗奠定理论基础和应用基础。

关键词：柯萨奇病毒b组5型病毒样颗粒手足口病疫苗

柯萨奇病毒b组5型野生型及假病毒小鼠模型的建立和初步应用

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柯萨奇病毒B组5型野生型及假病毒小鼠模型的建立和初步应用

作者：郝晓甜中国食品药品检定研究院

学位级别：硕士

柯萨奇病毒b组5型(Coxsackievirus b5,CV-b5)属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus),是引起病毒性脑炎和无菌性脑膜炎的主要病原体之一。此外,CV-b5还可引起上呼吸道感染、手足口病、急性肝炎、扩张性心肌炎、... 详细信息

柯萨奇病毒b组5型(Coxsackievirus b5,CV-b5)属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus),是引起病毒性脑炎和无菌性脑膜炎的主要病原体之一。此外,CV-b5还可引起上呼吸道感染、手足口病、急性肝炎、扩张性心肌炎、胰腺炎、弛缓性麻痹、胰岛素依赖型(I型)糖尿病等多种疾病。然而,目前针对CV-b5感染引起的疾病尚无特异性治疗药物,也未见CV-b5疫苗及动物模型相关研究的报道。本研究应用CV-b5野生型毒株CV-b5/JS417建立了乳鼠模型。通过攻毒实验确定攻毒对象为3日龄bALb/c乳鼠,攻毒方式为腹腔注射,攻毒剂量为26LD。取攻毒后濒死乳鼠的不同组织进行病理和免疫组化研究,结果显示肝脏、脑、脊髓、心肌以及后肢骨骼肌出现明显病变。应用建立的模型进行了疫苗主动免疫和被动保护效果研究。CV-b5灭活疫苗免疫母鼠后对其3日龄乳鼠腹腔攻毒,获得母传抗体的保护效果,结果显示疫苗的ED50为3.05×10CCID。应用CV-b5抗血清与CV-b5/JS417活病毒体外中和后腹腔注射乳鼠,结果显示抗血清体外中和可阻断CV-b5/JS417引起的乳鼠发病,抗血清含量和保护率呈现剂量效应关系。应用野生型CV-b5/JS417毒株构建CV-b5感染性克隆并进行病毒拯救。CV-b5/JS417感染Hela细胞后提取病毒RNA,逆转录合成cDNA,扩增全长序列后将PCR产物与pSVA载体连接,转化后提质粒获得CV-b5全长克隆质粒pSVA-CV-b5。pSVA-CV-b5与表达T7聚合酶的质粒共转染到Hela细胞中,细胞病变后收获,得到病毒滴度为4.22×10CCID/m L的拯救病毒,乳鼠攻毒实验表明病毒可致3日龄bALb/c乳鼠死亡。此外,在pSVA-CV-b5的基础上构建了CV-b5假病毒pCV-b5-Luc。利用荧光素酶标记的pCV-b5-Luc假病毒建立小鼠模型。确定攻毒对象为4周龄雌性bALb/c小鼠,攻毒方式为尾静脉注射,检测时间为攻毒后16h,攻毒后小鼠肝脏器官可检测到荧光信号。应用该模型进行疫苗主动免疫和被动保护效果研究,结果显示,将pCV-b5-Luc尾静脉攻击CV-b5灭活疫苗免疫后的小鼠,或采用CV-b5抗血清腹腔注射小鼠后尾静脉攻击pCV-b5-Luc,均可有效保护小鼠抑制假病毒感染。综上所述,本研究应用CV-b5野生型毒株建立了首个乳鼠模型,并应用该乳鼠模型对CV-b5灭活疫苗的主动和被动保护效果进行评价。同时构建了CV-b5感染性克隆及荧光素酶标记的假病毒,并基于该假病毒建立小鼠模型,通过活体成像技术观察CV-b5假病毒在小鼠体内的分布情况,与野生型毒株乳鼠模型比较。研究成果为CV-b5疫苗的研发及致病机理的研究奠定了基础。

关键词：柯萨奇病毒b组5型小鼠模型感染性克隆假病毒

云南省一株柯萨奇病毒b组5型分离株的全基因组解析

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国际病毒学杂志 2023年第6期30卷 487-492页

作者：张美玲伏晓庆刘照生国列周洁楠云南省疾病预防控制中心急性传染病防制所昆明650022

目的对云南省2022年一例流感样病例的咽拭子分离得到的柯萨奇病毒b组5型(coxsackievirus b5,CVb5)病毒株进行全基因组测序,并分析其遗传进化、基因突变和重组特征。方法通过人宫颈癌细胞培养获得病毒分离株,应用全基因组测序技术对分离... 详细信息

目的对云南省2022年一例流感样病例的咽拭子分离得到的柯萨奇病毒b组5型(coxsackievirus b5,CVb5)病毒株进行全基因组测序,并分析其遗传进化、基因突变和重组特征。方法通过人宫颈癌细胞培养获得病毒分离株,应用全基因组测序技术对分离株进行病毒基因序列测定,采用MEGA、RDP4及SimPlot软件,解析病毒基因组学特征。结果分离株YN-01/CHN/2022与2株广东CVb5流行株核苷酸同源性为96.6%,属GⅠ.C1分支,与国内大多其他CVb5流行株相似度低(≤90.3%),揭示国内CVb5流行株间基因组差异较大。该分离株VP1序列存在2个特有的氨基酸突变(T246A和T275A),但其95位氨基酸未发生改变。基因重组分析显示YN-01/CHN/2022可能为重组株,重组位点发生在P1区VP4(940)和P2区2A(3540)。结论本研究分离株YN-01/CHN/2022属于CVb5 GⅠ.C1基因型,存在特异的核苷酸分歧,也证实了CVb5基因组有重组现象发生。该数据提示增强CVb5分子流行病学研究工作,持续追踪病毒进化规律,不断提高相关疾病防控工作的精准性。

关键词：柯萨奇病毒b组5型全基因组进化基因突变重组

中国部分地区柯萨奇病毒b组5型分子流行病学研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2019年第6期33卷 663-666页

作者：姚学君张雪峰管书慧刘秀兰姜仁杰盐城市疾病预防控制中心急传科 224100 江苏省疾病预防控制中心南京221000

目的研究中国部分地区柯萨奇病毒b组5型(coxsackievirus b5, CV-b5)分离毒株基因特征和遗传进化规律。方法利用MEGA6.0软件对Genbank核苷酸数据库收录的分离于中国11个省市CV-b5分离毒株全长VP1区基因序列进行分析,绘制系统进化树,测... 详细信息

目的研究中国部分地区柯萨奇病毒b组5型(coxsackievirus b5, CV-b5)分离毒株基因特征和遗传进化规律。方法利用MEGA6.0软件对Genbank核苷酸数据库收录的分离于中国11个省市CV-b5分离毒株全长VP1区基因序列进行分析,绘制系统进化树,测算分离毒株核苷酸和氨基酸同源性,并计算核苷酸分子进化速率。结果纳入中国11个省市CV-b5分离毒株合计189株,主要为基因型C,占分离毒株总数的90.5%。与基因型A相比,中国11个省市CV-b5分离毒株VP1区核苷酸和氨基酸同源性为79.8%~82.8%和92.6%~97.9%,收录中国地区CV-b5分离毒株间核苷酸和氨基酸同源性为80.3%~100.0%和91.5%~100.0%。基因型C分离毒株核苷酸进化速率为4×10-3/(位点/年)。结论中国部分地区CV-b5分离毒株潜在优势流行株为基因型C,又以基因亚型C1和C2共循环流行。

关键词：柯萨奇病毒b组5型 VP1 分子流行病学