柯萨奇病毒B组5型VP1蛋白的外源表达及多克隆抗体的制备

作     者：金维维 陈伟 庞冉 张同禹 井申荣 JIN Wei-Wei;CHEN Wei;PANG Ran;ZHANG Tong-Yu;JING Shen-Rong

作者机构：昆明理工大学医学院昆明650500 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2019年第35卷第4期

页      面：463-466页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：病毒学国家重点实验室开放研究基金资助项目(2018KF006) 昆明理工大学2018年学生课外学术科技创新基金课题(2018BA311) 

主　　题：柯萨奇病毒B组5型 VP1蛋白 多克隆抗体 免疫组化 

摘      要：目的:原核表达柯萨奇病毒B组5型的VP1蛋白,并制备其多克隆抗体及检测。方法:提取在Vero细胞中柯萨奇病毒B组5型的RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增获取VP1基因序列,构建原核表达载体,大量诱导表达重组VP1蛋白。用His Trap HP亲和层析柱纯化重组蛋白,以纯化的目的蛋白为抗原,免疫雄性SD大鼠获得VP1蛋白多克隆抗体血清,ELISA测定该抗体的效价,微量中和实验测定抗体的中和活性,Western blot检测抗体的特异性,免疫组化检测抗体对组织中抗原的识别。结果:成功构建了VP1-pET-28a重组载体,并且在BL21细胞中成功诱导表达,亲和层析柱纯化后蛋白纯度大于90%。ELISA测得抗体的效价为1∶128 000,微量中和实验显示抗体没有中和活性,Western blot分析显示抗体能与CVA16和EV71交叉反应,免疫组化实验表明抗体能够识别组织中的CVB5抗原。结论:本研究成功制备了CVB5 VP1蛋白的高效价的多克隆抗体,为CVB5病毒疫苗和病毒诊断的研发提供了有效的工具。