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时间分辨免疫荧光分析检测细胞角蛋白19片段抗原试剂的研制

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中华检验医学杂志 2007年第7期30卷 783-784页

作者：吴英松董志宁汤永平徐伟文李明南方医科大学生物技术学院广州510515

1993年Stieber等首先采用ELISA法检测血清中细胞角蛋白19片段抗原（CYFRA21—1），发现其对非小细胞肺癌有早期诊断价值，随后其作为一种肿瘤标志被用于肿瘤诊断、疗效评估、复发检测和判断预后。时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）法灵敏... 详细信息

1993年Stieber等首先采用ELISA法检测血清中细胞角蛋白19片段抗原（CYFRA21—1），发现其对非小细胞肺癌有早期诊断价值，随后其作为一种肿瘤标志被用于肿瘤诊断、疗效评估、复发检测和判断预后。时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）法灵敏度高，特异性强，无放射性污染，被誉为最有前途的免疫学诊断方法之一。

关键词：时间分辨免疫荧光分析细胞角蛋白19片段 ELISA法检测抗原试剂免疫学诊断方法研制早期诊断价值非小细胞肺癌

犬细小病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2021年第2期43卷 165-170页

作者：陈翠翠梁焕坤赖宏锐钟树海黎杰星李来庆广州优迪生物科技股份有限公司广东广州510663

为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒。并评价了其灵敏度、准确度、特... 详细信息

为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒。并评价了其灵敏度、准确度、特异性、重复性和稳定性。利用该试剂盒与RT-PCR方法同时检测了疑似患病犬的临床粪便、呕吐物、血液样品(各60份)和CPV阴性犬这3种临床样品各10份,比较并计算二者的符合率。优化结果显示,最佳的TRFIA反应条件为:MAb 7D5的包被浓度为15μg/mL;Eu^(3+)标记试剂与标记MAb 2F7(2.5 mg/mL)最佳体积分别为70μL和30μL;反应体系为25μL CPV标准品或待测样品+200μL分析缓冲液+200μL Eu^(3+)-检测抗体+200μL增强液。灵敏度试验显示TRFIA方法对CPV灭活病毒检测灵敏度为0.83 ng/mL。准确度试验结果显示,不同浓度CPV标准品稀释(1:2、1:4、1:8)后的稀释回收率在89.25%~100.8%;特异性试验结果显示,该方法除对不同亚型CPV的检测结果均为阳性外,对犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒I型、犬冠状病毒、猫细小病毒、水貂肠炎病毒等检测均为阴性,无明显交叉反应;对高、中、低3种不同浓度CPV的重复性试验结果显示,批内变异系数为2.34%~4.76%,批间变异系数为2.38%~5.10%;稳定性试验结果显示,该试剂盒至少可在4℃稳定保存6个月,37℃保存7 d;临床样品的检测结果显示,利用该方法从大部分疑似患病犬的粪便、血液以及呕吐物中均检测到了CPV,而CPV阴性犬这3类样品的检测结果均为阴性。本研究建立的TRFIA法和RT-PCR法检测结果一致,符合率达到100%。上述结果表明,本研究制备的CPV TRFIA试剂盒灵敏度准确度高、特异性强、重复性、稳定性好,且可检测的临床样品种类多,为临床样品的检测提供有效技术手段。

关键词：犬细小病毒双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析

犬瘟热病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 258-262页

作者：陈翠翠赖宏锐梁焕坤钟树海黎杰星李来庆广州优迪生物科技股份有限公司广东广州510663

为建立犬瘟热病毒(CDV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法,本研究将抗CDV的3H7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体,Eu3+标记2G4 MAb作为检测抗体,建立了检测CDV抗原的双抗体夹心TRFIA分析法,并初步制备成试剂盒。通过灵敏度、准确度(稀释回收... 详细信息

为建立犬瘟热病毒(CDV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法,本研究将抗CDV的3H7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体,Eu3+标记2G4 MAb作为检测抗体,建立了检测CDV抗原的双抗体夹心TRFIA分析法,并初步制备成试剂盒。通过灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性、临床样本检测等实验评价其检测性能。结果显示,该双抗体夹心TRFIA分析法对CDV的检测灵敏度为0.58 ng/mL,线性范围在2.5 ng/mL^640 ng/mL,与荧光值有较强的剂量-反应关系;平均稀释回收率为100.48%,与其它常见病毒无明显交叉反应,特异性较强;批内CV值为5.60%~7.58%,批间CV值为5.67%~7.64%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。与RT-PCR法同时检测65份疑似CDV样本和15份健康样本,2种检测方法的符合率为100%。本研究建立的CDV TRFIA方法具有灵敏度高、特异性强、准确率好、方便快捷等优点,为大批量CDV临床样品的检测提供了可行技术手段。

关键词：犬瘟热病毒双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析

癌胚抗原的时间分辨免疫荧光分析及其诊断试剂的研制

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第1期22卷 121-124页

作者：杭建峰吴英松余伟鸿黄颖李明南方医科大学生物技术学院广东广州510515 广州市达瑞抗体工程技术有限公司广东广州510663 中国药品生物制品检定所北京100050

目的：利用时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）技术，建立一种人血清癌胚抗原（CEA）的快速全自动检测方法并研制其诊断试剂。方法：采用双抗体夹心法（用1株抗CEA的mAbM86160M用于包被微孔板，另1株抗CEA的mAb M86110M用于标记铕）建立CEA... 详细信息

目的：利用时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）技术，建立一种人血清癌胚抗原（CEA）的快速全自动检测方法并研制其诊断试剂。方法：采用双抗体夹心法（用1株抗CEA的mAbM86160M用于包被微孔板，另1株抗CEA的mAb M86110M用于标记铕）建立CEA—TRFIA，增强液采用B-二酮体为主的发光增强系统。结果：CEA-TRFIA的线性测量范围为（1～560）μg／L，分析的灵敏度为0．28μg／L，批内和批间的变异系数（CV）分别为7．2％～8．6％和8．9％～13．2％。与AFP，CA12—5、CA19—9和白蛋白均无交叉反应，与CA15—3的交义反应值为1．62μg／L。将1000份血清标本用本法与国外罗氏化学发光试剂盒同时检测，其相关系数（r）为0．946。结论：CEA—TRFIA的各项指标均达到临床检测的要求，可替代国外同类检测试剂盒，用于临床血清CEA水平的测定。

关键词：癌胚抗原时间分辨免疫荧光分析

新生儿TSH-时间分辨免疫荧光分析检测试剂的评价

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中国妇幼保健 2009年第12期24卷 1677-1680页

作者：李月吴英松汤永平李明南方医科大学生物技术学院广东广州510515 广州市达瑞抗体工程技术有限公司

目的:利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立新生儿TSH的检测试剂。方法:采用双抗体夹心法建立新生儿TSH-TRFIA检测试剂,对试剂的各项指标进行评价。结果:TSH-TRFIA检测试剂的灵敏度为2.0μU/ml,测量范围为2.0～250μU/ml,分析内和... 详细信息

目的:利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立新生儿TSH的检测试剂。方法:采用双抗体夹心法建立新生儿TSH-TRFIA检测试剂,对试剂的各项指标进行评价。结果:TSH-TRFIA检测试剂的灵敏度为2.0μU/ml,测量范围为2.0～250μU/ml,分析内和分析间的精密度分别为6.2%～7.5%和9.6%～9.9%。100份新生儿干血片测试结果表明,该试剂与同类试剂同时检测,其相关系数为0.993。结论:TSH-TRFIA检测试剂各项指标均达到临床检测要求,可替代同类产品。

关键词：先天性甲状腺功能减低症促甲状腺激素时间分辨免疫荧光分析诊断试剂

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人C肽时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

临床检验杂志 2005年第3期23卷 200-202页

作者：汤永平吴英松杭建峰徐伟文孙胜利余伟鸿周志聪李明广州市达瑞抗体工程技术有限公司广州510663 第一军医大学热带医学研究所广州510515

目的研制人C肽(C peptide)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心一步法建立C肽TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的可测范围为0.5～22ng/ml,灵敏度为0.045ng/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为4.1... 详细信息

目的研制人C肽(C peptide)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心一步法建立C肽TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的可测范围为0.5～22ng/ml,灵敏度为0.045ng/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为4.1%～6.7%和5.4%～6.8%;与胰岛素无交叉反应,与胰岛素原的交叉反应率为9.0%。30份血样用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.992。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。

关键词：人C肽时间分辨免疫荧光分析试剂盒实验室检查胰岛素

丙型肝炎病毒抗体时间分辨免疫荧光分析及应用评价

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核技术 2001年第11期24卷 891-894页

作者：肖华龙黄飙朱利国潭成蔡刚明金坚江苏省原子医学研究所附属江原医院无锡214063 核医学国家重点实验室无锡214063

为建立抗 -HCV的时间分辨免疫荧光分析法 (IFMA) ,以HCV抗原包被微孔板 ,样品中的抗 -HCV、Eu3 + 标记羊抗人IgG形成夹心 ,以β -二酮体为增强液 ,数据采用Log -Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明 ,方法的批内和... 详细信息

为建立抗 -HCV的时间分辨免疫荧光分析法 (IFMA) ,以HCV抗原包被微孔板 ,样品中的抗 -HCV、Eu3 + 标记羊抗人IgG形成夹心 ,以β -二酮体为增强液 ,数据采用Log -Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明 ,方法的批内和批间CV分别为 3.6 4 %和 4 .39% ,平均回收率 10 5 .5 8% ,可测范围为 1.0 1— 17.34NCU/mL ,灵敏度为 0 .0 3NCU/mL。本法与HB sAg有 0 .2 3%的交叉 ,与HBeAg有 0 .0 4 %的交叉。 2 78例正常对照组血清抗 -HCV浓度均小于1NCU/mL。结果提示 ,高度灵敏、稳定的抗

关键词：抗-HCV 时间分辨免疫荧光分析丙型肝炎病毒抗体临床检验

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游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

热带医学杂志 2007年第3期7卷 212-214页

作者：蒋艺勤汤永平丁岚李来庆李明吴英松南方医科大学生物技术学院广州510515 广州市达瑞抗体工程技术有限公司广州510663

目的建立游离雌三醇(uE_3)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE_3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0.14nmol/L,线性范围为0.14～120nmol/L,回收率为97.7%。分... 详细信息

目的建立游离雌三醇(uE_3)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE_3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0.14nmol/L,线性范围为0.14～120nmol/L,回收率为97.7%。分析内和分析间变异系数分别为1.6%～4.1%和4.4%～8.8%。与E_2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0.24%、0.36%和0.40%。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0.925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。

关键词：游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析

乙肝五项时间分辨免疫荧光分析与PCR-HBV定量的关系

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中外医疗 2008年第34期27卷 18-19页

作者：田玉峰王家安律洁山东省日照市人民医院检验科山东日照276826

目的研究乙肝血清标志物时间分辨免疫定量检测结果与HBV-DNA定量之间的关系。方法将200例血清标本同时采用时间分辨免疫荧光定量和实时荧光定量PCR技术,对乙肝五项含量和HBV-DNA含量分别进行检测,按照不同的乙肝病毒标志模式情况分组后... 详细信息

目的研究乙肝血清标志物时间分辨免疫定量检测结果与HBV-DNA定量之间的关系。方法将200例血清标本同时采用时间分辨免疫荧光定量和实时荧光定量PCR技术,对乙肝五项含量和HBV-DNA含量分别进行检测,按照不同的乙肝病毒标志模式情况分组后,进行乙肝病毒标志物与HBV-DNA的分析研究。结果乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组HBV-DNA检出率为98.7%,HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组检出率59.3%,HBcAb单项阳性组检出率50%,HBsAb阳性组检出率0,全阴性组检出率0。结论时间分辨免疫荧光分析与HBV-DNA关系密切,两者联用能更好的满足临床需求。

关键词：时间分辨免疫荧光分析实时荧光定量PCR