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日本鳗鲡肠道N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

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水生生物学报 2022年第9期46卷 1301-1309页

作者：林建城胡建辉吴钦端莆田学院环境与生物工程学院福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室生态环境及其信息图谱福建省高等学校重点实验室(莆田学院)莆田351100

为了探讨日本鳗鲡(Anguilla japonica)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.***.1.52,NAGase)的分离纯化及其酶学性质,通过硫酸铵沉淀分级分离、Sephadex G-100分子筛凝胶柱层析和DEAE-32离子交换柱层析纯化NAGase,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)... 详细信息

为了探讨日本鳗鲡(Anguilla japonica)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.***.1.52,NAGase)的分离纯化及其酶学性质,通过硫酸铵沉淀分级分离、Sephadex G-100分子筛凝胶柱层析和DEAE-32离子交换柱层析纯化NAGase,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定酶的纯度、测定酶蛋白亚基分子质量;以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖为底物,研究NAGase催化反应的动力学参数,探讨其酶学性质。结果表明:日本鳗鲡肠道NAGase纯酶制剂比活力为2517.40 U/mg,酶蛋白亚基分子质量为69.98 kD,酶的最适pH、最适温度、米氏常数K_(m)和最大反应速度V_(max)分别为6.0、60℃、0.336 mmol/L和7.634μmol/(L·min);酶在pH 4.8—7.2较稳定,在温度60℃以下具有较好的热稳定性,在65℃以上酶迅速失活。Mg^(2+)、Ca^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)和Fe^(3+)对NAGase表现出不同程度的激活作用,Na^(+)、Li+和Ba^(2+)对酶活力几乎没有影响,Zn^(2+)、Fe^(2+)、Pb^(2+)和Hg^(2+)对酶活力有不同程度的抑制作用,Hg^(2+)对酶活力抑制作用最强,1.0μmol/L Hg^(2+)可使酶活力丧失83.69%。化学修饰法研究表明,精氨酸胍基不是日本鳗鲡NAGase的必需基团,而赖氨酸ԑ-氨基、半胱氨酸巯基、组氨酸咪唑基、丝氨酸羟基和色氨酸吲哚基是酶的必需基团,二硫键是NAGase活性所必需的。综上所述,实验采用的日本鳗鲡肠道NAGase分离纯化方案有效可行,酶活力易受环境中酸碱度、温度和金属离子的影响,且与其他不同动物来源的NAGase具有相似的必需基团。

关键词：分离纯化酶学性质必需基团 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶日本鳗鲡

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日本鳗鲡TRAF3基因的克隆及功能研究

水产学报 2023年第8期47卷 145-156页

作者：凌露露梁英黄文树聂品黄贝集美大学水产学院广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心青岛农业大学海洋科学与工程学院

为探究鱼类TRAF3在鱼类抗病毒免疫应答中的功能及作用机制，实验利用逆转录PCR克隆获得了日本鳗鲡TRAF3转录本(AjTRAF3)，利用生物信息学软件分析了AjTRAF3的结构特征，利用实时荧光定量PCR(qPCR)、双荧光素酶报告系统以及免疫共沉淀等... 详细信息

为探究鱼类TRAF3在鱼类抗病毒免疫应答中的功能及作用机制，实验利用逆转录PCR克隆获得了日本鳗鲡TRAF3转录本(AjTRAF3)，利用生物信息学软件分析了AjTRAF3的结构特征，利用实时荧光定量PCR(qPCR)、双荧光素酶报告系统以及免疫共沉淀等方法对其表达规律、功能及作用机理进行了初步分析。AjTRAF3的开放阅读框长度为1 707 bp，编码568个氨基酸。序列结构分析结果显示，AjTRAF3由N端的环结构域2个锌指结构域以及1个螺旋结构域和C端高度保守的TRAF-C (MATH)结构域组成。qPCR结果显示，AjTRAF3在日本鳗鲡各组织中均有表达，脑组织中表达量最高，其次为头肾，心脏中的表达量最低。Poly I:C刺激6 h后，日本鳗鲡脾脏组织中AjTRAF3上调倍数最高，为对照组的15.83倍。迟缓爱德华氏菌感染24 h后，日本鳗鲡脾脏组织中AjTRAF3上调倍数最高，为对照组的31.47倍。此外，本研究构建了AjTRAF3真核表达质粒，发现过表达AjTRAF3能显著上调炎症及抗病毒相关基因的表达，可显著增强AjIFN2、AjIFN4和NF-κB启动子荧光素酶活性。并能显著上调由AjRIG-IN、AjMAVS、AjIRF3诱导的AjIFN2、AjIFN4和NF-κB启动子活性。免疫荧光结果显示，AjTRAF3主要定位于细胞质中，且与AjMAVS存在共定位。免疫共沉淀结果显示，AjTRAF3通过MATH结构域与AjMAVS相互结合，缺失该结构域后，其与AjMAVS的相互作用消失，推测AjTRAF3可通过介导RIG-I/MAVS信号转导途径调控鱼类的抗病毒免疫应答。本研究结果为进一步揭示鱼类TRAF3的生物学功能奠定了基础。

关键词：日本鳗鲡 TRAF3 MAVS 共定位启动子

日本鳗鲡STAT3及其剪切异构体的克隆、亚细胞定位及功能分析

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水产学报 2021年第9期45卷 1517-1529页

作者：李文星郑妨凌露露梁英黄文树聂品黄贝集美大学水产学院集美大学鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心集美大学福建省水产生物育种与健康养殖工程研究中心青岛农业大学海洋科学与工程学院

为研究鱼类信号与转录激活因子3 (signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)在抗病毒免疫应答中的作用,实验利用逆转录PCR(RT-PCR)和RACE-PCR技术从日本鳗鲡中扩增获得了STAT3及其剪切异构体(AjSTAT3-L和AjSTAT3-S)。AjSTAT3-L及AjSTAT3-S开放阅读框全长分别为2 349和1 470 bp,编码782和489个氨基酸。基因结构分析结果显示,AjSTAT3-L具有23个外显子,AjSTAT3-S缺失了第2、3、4、5、6、7及21个外显子。AjSTAT3-L类似于哺乳动物STAT3,由N端结构域(NTD,1～120位氨基酸)、卷曲螺旋结构域(CCD,140～313位氨基酸)、DNA结合结构域(DBD,325～462位氨基酸)和SH2结构域(577～672位氨基酸)构成。相较于AjSTAT3-L,AjSTAT3-S缺失了整个CCD结构域,且NTD结构域也缺失了69个氨基酸。系统进化分析结果显示,AjSTAT3-L和AjSTAT3-S位于硬骨鱼类STAT3分支的基部。脊椎动物STAT3聚为一支,并与STAT1和STAT4聚为一大支。免疫荧光结果显示,AjSTAT3-L及AjSTAT3-S均定位于细胞质。此外,过表达AjSTAT3-L和AjSTAT3-S能显著抑制Poly I∶C诱导的IFN和Mx启动子的活化。研究表明,实验所克隆鉴定的日本鳗鲡STAT3及其剪切异构体,均能负调控鱼类抗病毒免疫应答。

关键词：日本鳗鲡信号与转录激活因子3 (STAT3) 亚细胞定位负调控

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日本鳗鲡营养需求及饲料添加剂研究进展

大连海洋大学学报 2023年第3期38卷 543-552页

作者：张翔王祖峰农业农村部全国水产技术推广总站北京100125

日本鳗鲡(Anguilla japonica)是中国重要的水产养殖品种之一,明确日本鳗鲡的营养需求对促进饲料研发和产业发展至关重要。本文综述了日本鳗鲡对蛋白质、脂肪、维生素和矿物质等的需求,蛋白源替代问题,以及饲料添加剂的作用效果等研究进... 详细信息

日本鳗鲡(Anguilla japonica)是中国重要的水产养殖品种之一,明确日本鳗鲡的营养需求对促进饲料研发和产业发展至关重要。本文综述了日本鳗鲡对蛋白质、脂肪、维生素和矿物质等的需求,蛋白源替代问题,以及饲料添加剂的作用效果等研究进展,针对日本鳗鲡营养需求和配合饲料优化研究中存在的问题,提出系统地研究日本鳗鲡在不同生长阶段的营养需求及构建营养需求数据库,尤其是仔鳗的营养需求,加强复合饲料添加剂及其相互作用的研究,加深对不同添加剂之间协同互作和拮抗互作机制的认识等未来重点研究方向,以期为日本鳗鲡营养需求和配合饲料优化研究提供有益参考,助力鳗鲡产业可持续发展。

关键词：日本鳗鲡营养需求饲料添加剂

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日本鳗鲡游泳能力和游泳行为研究

水生态学杂志 2022年第4期43卷 127-132页

作者：陈橙闫慧张挺苏燕福州大学土木工程学院福建福州350018

研究日本鳗鲡的游泳能力特性指标和游泳行为,为日本鳗鲡的保护及渔业管理提供参考。在(22±0.5)℃试验水温下,针对体长为21.4~43.5 cm,体重11~62 g的日本鳗鲡,利用自循环明渠变坡水槽,采用流速递增法开展鱼类感应流速、临界游泳速度和... 详细信息

研究日本鳗鲡的游泳能力特性指标和游泳行为,为日本鳗鲡的保护及渔业管理提供参考。在(22±0.5)℃试验水温下,针对体长为21.4~43.5 cm,体重11~62 g的日本鳗鲡,利用自循环明渠变坡水槽,采用流速递增法开展鱼类感应流速、临界游泳速度和爆发游泳速度的试验研究。结果表明(:1)闽江流域日本鳗鲡的感应流速为(3.3~4.8)cm/s,即(0.109~0.196)BL/s;临界游泳速度为(49.5~86.5)cm/s,即(1.874~2.331)BL/s;爆发游泳速度为(86.9~135.9)cm/s,即(2.982~4.062)BL/s。(2)日本鳗鲡的绝对特征流速随体长的增加而增加,相对特征流速随体长的增加而减小。(3)随着流速的递增,日本鳗鲡游泳形态分为5个阶段:顺流爬越、逆流转向静止、逆流上溯爬越、逆流冲刺后静止、逆流后退。以日本鳗鲡为主要过鱼对象时,建议鱼道内最小水流速度应大于10.0 cm/s,高流速区最大设计水流大于70.0 cm/s,小于112.0 cm/s。研究结果可为闽江鱼道水力设计提供依据。

关键词：日本鳗鲡感应流速临界游泳速度爆发游泳速度闽江流域

日本鳗鲡巨噬细胞移动抑制因子的基因鉴定及表达分析

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水产学报 2020年第9期44卷 1549-1560页

作者：武亚方黄文树段明珠李文星熊静梁英黄贝集美大学水产学院鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心福建省海洋生物资源开发利用协同创新中心

巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一类进化上古老的多功能细胞因子,广泛分布于细菌、植物和动物中。哺乳动物MIF兼具酶催化活性和趋化作用,在机体炎症反应中具有十分重要的作用。为探究MIF在鱼类免... 详细信息

巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一类进化上古老的多功能细胞因子,广泛分布于细菌、植物和动物中。哺乳动物MIF兼具酶催化活性和趋化作用,在机体炎症反应中具有十分重要的作用。为探究MIF在鱼类免疫系统中的作用,本实验利用PCR技术克隆获得了日本鳗鲡MIF基因(AjMIF)。预测的AjMIF前体肽含MIF特征性的硫醇蛋白氧化还原酶活性基序Cys57-Ala-Leu-Cys60,以及异构酶活性相关的保守氨基酸残基,如Pro2和Cys81等。荧光定量结果显示,AjMIF在日本鳗鲡不同组织中均有表达,且在肝脏中表达量最高,其次为中肾和肠。脂多糖刺激8 h后,头肾、中肾和鳔中AjMIF表达量显著上调;PolyI:C刺激8 h后,鳃、皮肤和肠中AjMIF表达量显著上调。迟缓爱德华氏菌人工感染8 h后,肠和鳃中AjMIF表达量极显著上调;感染16 h后,鳃组织中MIF表达量显著升高;感染24 h后皮肤和鳃中MIF基因表达量显著上调。此外,本研究构建了AjMIF原核表达质粒,在获得重组蛋白的基础上研究了rAjMIF异构酶活性。结果显示,1 nmol重组蛋白在pH 6.2时异构酶活性为2.6 U,而在pH 8.0,酶活性为36.6 U。本研究结果为进一步解析MIF在鱼类免疫系统中的作用奠定了基础。

关键词：日本鳗鲡巨噬细胞移动抑制因子组织表达互变异构酶活性

基于16S rRNA高通量测序的长江口日本鳗鲡幼体肠道微生物群落研究

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中国水产科学 2023年第6期30卷 699-710页

作者：常亚娟唐文乔郭弘艺上海海洋大学海洋动物系统分类与进化上海高校重点实验室上海海洋大学水产种质资源发掘与利用省部共建教育部重点实验室

为了解长江口日本鳗鲡(Anguilla japonica)幼体肠道微生物的结构特点和多样性组成,探索其潜在功能，采用MiSeq 16S rRNA高通量测序技术对2022年1―4月每月VA期和VB期2个发育时期的肠道样本进行微生物测序,分析了肠道微生物的OTU数量、... 详细信息

为了解长江口日本鳗鲡(Anguilla japonica)幼体肠道微生物的结构特点和多样性组成,探索其潜在功能，采用MiSeq 16S rRNA高通量测序技术对2022年1―4月每月VA期和VB期2个发育时期的肠道样本进行微生物测序,分析了肠道微生物的OTU数量、菌群组成、丰度及Alpha多样性,并预测其功能。8个样本共测得1467个OTU,每个样本平均396个。共鉴定出51门、140纲、286目、414科、643属、959种,每个样本平均包含26门和229属,并表现出随月份递增而门数和属数明显减少的现象。在门水平上,以变形菌门(Proteobacteria)(81.33%)和拟杆菌门(Bacteroidota)(10.61%)为优势菌群。在属水平上,主要由嗜冷杆菌属(Psychrobacter)(35.10%)、假单胞菌属(Pseudomonas)(16.75%)、黄杆菌属(Flavobacterium)(7.99%)、无色杆菌属(Achromobacter)(4.82%)、希瓦氏菌属(Shewanella)(4.21%)等组成,显示了一组与其他鱼类不同的肠道微生物群落。1月组的肠道菌群丰度及多样性显著高于其他月组(P0.05)。KEGGpathway注释预测肠道菌群编码的大多数基因与新陈代谢相关,其中氨基酸转运与代谢功能类群的相对丰度较高。本研究解析了长江口日本鳗鲡幼体的肠道微生物结构组成及其时间变化特征,并分析了其优势菌群可能的作用途径,为其苗种繁育及饵料研制提供参考。

关键词：长江口日本鳗鲡 16S rRNA 肠道微生物优势菌群功能预测

日本鳗鲡TLR3基因的克隆及其免疫功能分析

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生物技术通报 2018年第1期34卷 160-171页

作者：余丽丽林鹏郭松林王艺磊张子平王婷婷冯建军集美大学水产学院鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心农业部东海海水健康养殖重点实验室厦门361021 福建农林大学动物科学学院福州350002

Toll样受体3(TLR3)是用于识别双链RNA的一种重要模式识别受体。利用RT-PCR和RACE技术克隆了日本鳗鲡TLR3(Aj TLR3)基因c DNA全长序列,并采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测分析该基因在日本鳗鲡各组织器官以及体外肝脏细胞的表达水平变... 详细信息

Toll样受体3(TLR3)是用于识别双链RNA的一种重要模式识别受体。利用RT-PCR和RACE技术克隆了日本鳗鲡TLR3(Aj TLR3)基因c DNA全长序列,并采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测分析该基因在日本鳗鲡各组织器官以及体外肝脏细胞的表达水平变化,以期对日本鳗鲡TLR3基因的序列特征及其功能进行研究。结果表明:Aj TLR3基因全长3 383 bp,开放阅读框为2 766 bp,编码921个氨基酸。该蛋白具有16个LRR的胞外结构域、跨膜结构域以及TIR结构域,其中在TIR结构域含有一个高度保守的氨基酸残基Tyr^(778)。Aj TLR3基因在日本鳗鲡各组织器官中均有表达,其中肝脏表达量最高;经poly I∶C刺激后在血、肠、肝脏、脾脏、皮肤、心脏及肌肉组织中均显著提高;而LPS刺激后,仅在肝脏和肠中有显著提高。日本鳗鲡肝脏细胞体外实验结果显示:poly I∶C处理后12 h和24 h表达水平显著增高,Cp G-DNA和肽聚糖处理后24 h表达量均有显著增加;而细菌浓度达到107 CFU/m L和108 CFU/m L后,Aj TLR3基因表达水平分别在24 h、12 h显著增高并达到峰值。以上研究表明,Aj TLR3在日本鳗鲡抵御病毒及细菌的免疫应答过程中具有重要作用。

关键词：日本鳗鲡 TLR3 基因克隆荧光定量肝脏细胞

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日本鳗鲡仔鱼的开口饵料和行为特征

水产学报 2017年第5期41卷 703-710页

作者：刘利平刘登攀蒲金成杜力陈桃英陈文银郑春静吴雄飞吴嘉敏上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室宁波市海洋与渔业研究院

在连续多年日本鳗鲡人工繁殖实验的基础上,研究了不同饵料对日本鳗鲡仔鱼存活率的影响,并记录了仔鱼的运动特征和摄食行为。结果显示,与对照组(不投饵)相比,投喂以鲨鱼卵、磷虾提取液为基础的饵料和以鲨鱼卵、海蜇匀浆液为基础的饵料以... 详细信息

在连续多年日本鳗鲡人工繁殖实验的基础上,研究了不同饵料对日本鳗鲡仔鱼存活率的影响,并记录了仔鱼的运动特征和摄食行为。结果显示,与对照组(不投饵)相比,投喂以鲨鱼卵、磷虾提取液为基础的饵料和以鲨鱼卵、海蜇匀浆液为基础的饵料以及微绿球藻液均提高了日本鳗鲡仔鱼的存活率,仔鱼发育至柳叶鳗前期阶段;而投喂以鲨鱼卵、卤虫匀浆液为基础的饵料和以卤虫匀浆液、磷虾提取液为基础的饵料,以及轮虫、海带+龙须菜匀浆液或海蜇以及发酵鲨鱼肉,均降低日本鳗鲡仔鱼的存活率。实验同时还研究了日本鳗鲡仔鱼的主动摄食行为,摄食时仔鱼先用吻端反复多次触碰食物,然后张开下颌咬食,证实了日本鳗鲡早期仔鱼的摄食方式是触碰后咬食。

关键词：日本鳗鲡仔鱼开口饵料摄食行为