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新型鹅星状病毒AHQJ18株的分离鉴定

江苏农业学报 2019年第5期35卷 1262-1264页

作者：章丽娇黄欣梅刘飞刘青涛韩凯凯赵冬敏杨婧刘宇卓李银江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山东鲁抗舍里乐药业有限公司山东济宁272000

星状病毒于1975年在肠炎患儿的粪便样品中被首次发现[1],随着时间的推移和检测技术的不断进步,星状病毒的种类、宿主及流行范围相继扩大。目前,星状病毒在全世界不同地区不同种类哺乳动物中的感染非常普遍,并且还能感染各种禽类[2]。星... 详细信息

星状病毒于1975年在肠炎患儿的粪便样品中被首次发现[1],随着时间的推移和检测技术的不断进步,星状病毒的种类、宿主及流行范围相继扩大。目前,星状病毒在全世界不同地区不同种类哺乳动物中的感染非常普遍,并且还能感染各种禽类[2]。星状病毒主要引起感染哺乳动物的肠道疾病,对于感染的禽类,除肠道炎症外,还可引发鸡肾脏疾病,雏鸭的病毒性肝炎等[3-5]。星状病毒为无囊膜的单股正链RNA病毒,基因组变异较大,全长约6.1~7.9 kb,包括5′UTR,3个开放性阅读框(ORF1a、ORF1b和ORF2),3′UTR及多聚腺苷酸(PolyA)尾,不同种星状病毒之间存在基因重组现象。星状病毒基因组的高度变异使其对环境和宿主具有很强的适应能力,甚至可跨种传播,是威胁人类健康和动物养殖业的重要传染病原之一。

关键词：痛风新型鹅星状病毒分离鉴定

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新型鹅星状病毒FJ-NP株的分离鉴定

福建农业学报 2021年第2期36卷 141-147页

作者：林裕胜江锦秀张靖鹏游伟胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

【目的】确定福建某鹅场雏鹅以痛风为主要病征导致高死亡率的病原。【方法】2019年8月福建省南平市某鹅场暴发一种以痛风为主要特征的疾病,该病在5~20日龄的雏鹅中发病率高达40%,死亡率为80%,对该场采集的3份样品进行实验室检测和病原... 详细信息

【目的】确定福建某鹅场雏鹅以痛风为主要病征导致高死亡率的病原。【方法】2019年8月福建省南平市某鹅场暴发一种以痛风为主要特征的疾病,该病在5~20日龄的雏鹅中发病率高达40%,死亡率为80%,对该场采集的3份样品进行实验室检测和病原分离鉴定。【结果】PCR检测结果显示3份样品新型鹅星状病毒均为阳性;细菌分离结果显示,未分离到细菌,排除细菌感染引起;接种11日龄鹅胚未出现死亡,但胚体全身皮肤出现点状出血,肾脏、肺脏均有出血点,对收集尿囊液和组织样品进行PCR检测结果显示只有新型鹅星状病毒阳性,未检测到其他鹅常见病毒,将其命名为FJ-NP;并对分离株部分ORF2基因进行遗传进化分析,结果表明该分离株与安徽(GD AHAU2、AHAU3、AHAU5)、黑龙江(AstV-Goose-2018-HLJ01)和河南(AstV-HN02-Goose-1119-18、AstV-AH02-Goose-0715-18、AstV-HB02-Goose-0310-19、AstV-HN03-Goose-0402-19)株在同一进化分支上,与湖北、北京、福建株亲缘关系较远。【结论】成功分离到了1株新型鹅星状病毒,同时进行ORF2部分基因遗传进化分析,为福建省后续开展新型鹅星状病毒相关研究提供了素材。

关键词：痛风新型鹅星状病毒分离鉴定

新型鹅星状病毒荧光定量PCR方法的建立及应用

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中国家禽 2022年第2期44卷 36-42页

作者：马水锋徐梦璐吴少鹏邵红霞钱琨万志敏叶建强秦爱建扬州大学兽医学院教育部禽类预防医学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

为建立一种准确快速检测新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的方法,研究以GAstV毒株JS20为模板,根据GAstV的ORF2基因序列设计特异性引物,在构建重组质粒pGEMT-GAstV的基础上,建立了检测GAstV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qRT-PCR... 详细信息

为建立一种准确快速检测新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的方法,研究以GAstV毒株JS20为模板,根据GAstV的ORF2基因序列设计特异性引物,在构建重组质粒pGEMT-GAstV的基础上,建立了检测GAstV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法。结果显示:阳性对照重组质粒pGEMT-GAstV在1.087×10^(1)~1.087×10^(8)拷贝/μL浓度之间与qRT-PCR的Ct值呈现良好的线性关系;该qRT-PCR对所检测的鸡星状病毒(cASTV)、禽腺病毒(FAdV)、小鹅瘟病毒(GPV)以及鸭坦布苏病毒(DTMUV)均无交叉反应;检测灵敏度为1.087×10^(1)拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于1.6%。利用该q RT-PCR方法对在鹅胚及LMH细胞上繁殖不同代次的JS20病毒载量进行检测发现,JS20在鹅胚上的扩增效率更高,病毒载量可达10^(8)~10^(9)拷贝/mL。对江苏不同地区26份临床样品进行检测发现,该q RT-PCR方法的阳性检出率为73.08%,而普通PCR方法阳性检出率仅为42.30%。结果表明建立的新型GAstV qRT-PCR具有很好的特异性及灵敏度,且在新型GAstV定量分析及临床样品检测诊断中展示了良好的应用前景。

关键词：新型鹅星状病毒荧光定量PCR 特异性灵敏度临床诊断

新型鹅星状病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与应用

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江苏农业科学 2022年第2期50卷 142-146页

作者：肖亦辰杨颖马平赵冬敏章丽娇刘青涛杨婧李银刘宇卓韩凯凯黄欣梅江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GoAstV)感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病。为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoA... 详细信息

新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GoAstV)感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病。为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物,构建质粒标准品,并对引物用量和退火温度等反应体系和条件进行了优化。结果表明,该方法能特异性扩增新型GoAstV 512 bp基因片段,其他鹅常见病毒性病原扩增结果均为阴性,具有较高的特异性。敏感性试验结果提示,最小检测限量达4.54×10^(2)拷贝/μL。此外,该方法重复性良好,应用所建立的方法对新型GoAstV临床样品进行检测,102份鹅泄殖腔拭子的阳性率为46.08%,24份痛风症状患病鹅内脏样本阳性率为91.70%。本研究建立的新型GoAstV一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且操作简便、经济、快速,可用于新型GoAstV的临床鉴别诊断和流行病学调查。

关键词：新型鹅星状病毒一步法RT-PCR 鉴别诊断鹅痛风病敏感性试验临床样品检测

新型鹅星状病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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福建农业学报 2021年第6期36卷 665-669页

作者：余明兴林裕胜福建省浦城县动物疫病预防控制中心福建浦城353400 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

【目的】建立一种新型鹅星状病毒(New goose astrovirus,NGAstV)的RT-PCR检测方法。【方法】根据ORF2基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过优化扩增条件,建立检测新型鹅星状病毒的RT-PCR方法,对其进行特异性及敏感... 详细信息

【目的】建立一种新型鹅星状病毒(New goose astrovirus,NGAstV)的RT-PCR检测方法。【方法】根据ORF2基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过优化扩增条件,建立检测新型鹅星状病毒的RT-PCR方法,对其进行特异性及敏感性检验,并在临床上进行初步应用。【结果】RT-PCR最佳反应体系为:Premix 10μL,ORF2上下游引物浓度10μmol·L^(-1)各1μL,模板3μL,无菌去离子水补足至20μL。最佳反应程序为:94℃2 min;94℃30 s、55℃15 s、72℃15 s,30个循环;72℃10 min。该方法对新型鹅星状病毒能扩增出特异性片段,对其他鹅常见病原无特异性扩增;检测灵敏度为62 fg·μL^(-1)。对45份临床样品进行检测,结果检测出15份阳性样品,阳性率为33.33%。【结论】建立的新型鹅星状病毒RT-PCR方法特异性强、稳定性好,可作为新型鹅星状病毒快速检测和流行病学调查的实用技术。

关键词：新型鹅星状病毒 RT-PCR 检测

新型鹅星状病毒ORF2基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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畜牧与兽医 2021年第9期53卷 78-82页

作者：张硕谢军顾玲玲方馨慧嵇珊珊陶静朱善元陈丽王安平江苏海洋大学食品科学与工程学院江苏连云港222005 江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室江苏连云港222005 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏泰州225300 江苏海洋大学江苏省海洋资源开发研究院江苏连云港222005

以新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)ORF2基因为序列设计1对特异性引物,利用PCR方法进行扩增,将其克隆到原核表达载体pET-30a中,转化DH5α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后,获得重组质粒pET30a-ORF2。随后转化BL21(DE3)感受态细胞,... 详细信息

以新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)ORF2基因为序列设计1对特异性引物,利用PCR方法进行扩增,将其克隆到原核表达载体pET-30a中,转化DH5α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后,获得重组质粒pET30a-ORF2。随后转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白。将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗鹅星状病毒衣壳蛋白的多克隆抗体。结果:成功获得ORF2基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,大小约84 kDa,且均能与His单抗和鹅阳性血清特异反应。制备的多克隆抗体,Western blot检测能与重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验(IFA)检测也能与新型鹅星状病毒发生特异性反应。本试验结果表明,原核表达的新型鹅星状病毒结构蛋白ORF2及制备的多抗均具有良好的免疫原性和反应原性,为新型鹅星状病毒检测方法的建立及ORF2基因功能研究奠定了基础。

关键词：新型鹅星状病毒 ORF2基因原核表达多克隆抗体

新型鹅星状病毒的分离鉴定及其抗体竞争ELISA检测方法的建立

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新型鹅星状病毒的分离鉴定及其抗体竞争ELISA检测方法的建立

作者：孙敏山东农业大学

学位级别：硕士

星状病毒属于星状病毒科,是一种无囊膜、单股正链RNA病毒,在人和动物体内广泛存在,它是引起婴儿和幼龄动物腹泻的主要病原之一。家禽感染后不仅引发腹泻和生长不良,还会带来严重致死性的肝炎和肾病。自2017年以来,我国山东、河南、安徽... 详细信息

星状病毒属于星状病毒科,是一种无囊膜、单股正链RNA病毒,在人和动物体内广泛存在,它是引起婴儿和幼龄动物腹泻的主要病原之一。家禽感染后不仅引发腹泻和生长不良,还会带来严重致死性的肝炎和肾病。自2017年以来,我国山东、河南、安徽和江苏等省份的部分雏鹅陆续暴发一种以痛风为主要特征的传染性疾病。该病主要侵害两周龄以内的雏鹅,引起全身器官尿酸盐沉积,死亡率高达50%以上,对养鹅业造成了严重的经济损失。本研究首先对疑似感染新型鹅星状病毒的病料进行处理,然后利用鸡胚肝细胞分离鉴定此病毒,通过RT-PCR检测、测序分析证实为新型鹅星状病毒,进而开展动物回归试验以确定其致病性。RT-PCR检测结果显示,扩增出与目的片段大小一致的条带,约为759 bp;病毒接种鸡胚肝细胞,出现细胞皱缩、变圆为特征的病变;动物回归试验结果表明,接毒雏鹅出现了与自然感染病例较为一致的临床症状及剖检变化,主要表现为全身脏器、关节腔有大量的尿酸盐沉积,在攻毒后的第3 d、5 d、7 d、9 d、11 d、13 d进行采样,每组随机剖检5只,收集肾脏、肝脏、脾脏、心脏等组织器官利用荧光定量PCR测定病毒含量,结果显示在攻毒第7 d肾脏的病毒载量最高。利用实验室已纯化的ORF 2蛋白免疫14日龄的健康雏鹅,于三免后的第7 d静脉采血,对制备的血清进行无菌检验,同时检测常见病毒的抗体,测定血清抗体效价,并做抗体特异性检测,结果显示该阳性血清无菌,不含其他病毒抗体,细胞中和试验表明制备的血清能够与新型鹅星状病毒发生特异性反应。另外,我们将实验室已保存的杂交瘤细胞进行复苏,制备腹水,经检测,腹水效价可高达1:204800,WB和IFA鉴定结果显示,所制备腹水能够与ORF 2蛋白发生特异性反应,具有免疫活性。本研究将ORF 2纯化蛋白作为包被抗原,所制备的腹水为竞争抗体,建立新型鹅星状病毒抗体的竞争ELISA检测方法,并优化确定最佳反应条件。利用所建立的竞争ELISA方法检测40份GAst V阴性血清,根据统计学方法计算出阳性临界值为48%。上述检测方法与AIV、GPV、ARV、DEV病毒抗体无交叉反应,证明该方法的特异性较好;板内变异系数为5.82-6.75%,板间变异系数为3.97-7.70%,表明该方法具有比较好的重复性。最后用67份血清分别进行竞争ELISA和细胞中和试验,结果显示符合率为80%。综上所述,本研究分离到一株新型鹅星状病毒,并建立了其抗体竞争ELISA检测方法,为养禽生产中新型鹅星状病毒的诊断和血清流行病学调查以及免疫监测提供了技术支撑。

关键词：新型鹅星状病毒分离鉴定竞争ELISA

新型鹅星状病毒分离鉴定、变异分析及胶体金层析检测方法的建立

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新型鹅星状病毒分离鉴定、变异分析及胶体金层析检测方法的建立

作者：杨晓童山东农业大学

学位级别：硕士

新型鹅星状病毒（Novel Goose Astrovirus,N-GAstV）是近年来一种新出现的致病病毒,可引起5～20日龄雏鹅的多个器官出现尿酸盐沉积的病变特征,具有高度传染性和高死亡率,给我国鹅业造成了严重的经济损失。因此,加强对新型鹅星状病毒病... 详细信息

新型鹅星状病毒（Novel Goose Astrovirus,N-GAstV）是近年来一种新出现的致病病毒,可引起5～20日龄雏鹅的多个器官出现尿酸盐沉积的病变特征,具有高度传染性和高死亡率,给我国鹅业造成了严重的经济损失。因此,加强对新型鹅星状病毒病原及快速检测方法的研究,对防控新型鹅星状病毒病,保护和促进我国养鹅业的可持续发展具有重要意义。目前已建立了检测N-GAstV的RT-PCR、RT-q PCR和LAMP等方法,但是这些方法均需要特殊仪器辅助。胶体金层析检测方法具有简便快速、适合现场检测和不需特殊实验仪器等优点,广泛应用于疫病诊断中。本研究成功分离了7株新型鹅星状病毒,制备了抗新型鹅星状病毒的单克隆抗体和多克隆抗体,并以此为基础建立了针对新型鹅星状病毒的胶体金层析检测方法,可以为防控和快速诊断NGAstV提供了一定的技术支撑。本研究的内容如下:1、N-GAstV分离鉴定与遗传变异分析:为了解国内新型鹅星状病毒的变异情况,本研究于2019～2021年采集了我国9个省份30份不同日龄的鹅病料。剖检显示,内脏器官均有尿酸盐沉积的病变特征。对采集的样品进行PCR检测,均检测出N-GAstV,采用鸡胚肝细胞（CEL）对阳性样品进行病毒分离,共分离得到7株新型鹅星状病毒毒株。同源性比对和遗传进化分析结果显示,7株病毒分离株ORF2基因核苷酸同源性在97.9%～99.7%之间,分离株之间差异性不大。病毒分离株与N-GAstV SDPY株ORF2基因核苷酸同源性在98.4%～99.5%之间,氨基酸同源性在98.0%～99.0%之间,并在进化树的同一分支上,亲缘关系较近,表明近年来N-GAstV未发生明显变异。病毒分离株与鹅源、鸡源、鸭源和火鸡源Ast V标准株ORF2基因核苷酸同源性均较低。其中与GAstV FLX株同源性在42.6%～42.8%之间;与DAst V YP2株同源性在38.2%～38.7%之间;与TAst V MO/01同源性在38.2%～38.7%之间;与CAst V 4175同源性在37.0%～38.4%之间,同源性最低、亲缘关系最远。并且分离株与鹅源、鸡源、火鸡源和鸭源Ast V均位于不同进化树分支上,亲缘关系较远。本研究选取与N-GAstV SDPY株ORF2基因组序列同源性最高,与其他禽源Ast V同源性均较低的SDWF0601分离株作为实验毒株,提取病毒核酸,扩增ORF2目的基因片段。2、N-GAstV ORF2单克隆抗体和多克隆抗体的制备:根据已发表的N-GAstV ORF2基因组序列,设计引物,构建新型鹅星状病毒ORF2重组表达载体,原核表达ORF2蛋白,免疫6～7周龄的BALB/c小鼠,制备脾细胞,经与SP2/0融合、筛选和亚克隆,获得一株能够稳定分泌单抗的杂交瘤细胞,通过诱导小鼠产腹水的方法大量获得单克隆抗体,经鉴定单克隆抗体的亚型为Ig G2a,抗体滴度为1:51200,IFA、WB和间接ELISA鉴定表明该单克隆抗体具有良好的反应活性。将制备的ORF2蛋白与弗氏佐剂和弗氏不完全佐剂混和后免疫新西兰大耳兔,4次免疫后采血制备多克隆抗体,纯化后的抗体滴度为1:102400,IFA和WB鉴定表明该多克隆抗体具有良好的反应活性。3、胶体金层析检测方法的建立:本研究经柠檬酸三钠还原氯金酸制备金溶液,制备的胶体金颜色清亮、均一。对各条件优化,胶体金与单抗最佳结合浓度为6μg/m L,最佳结合p H为p H 8.0,最佳免疫胶体金重悬稀释液为含有1%蔗糖和1%BSA的0.01mol/L Tris-Cl。以制备的单克隆抗体作为金标抗体,多克隆抗体作为包被抗体,建立胶体金层析方法检测N-GAstV。对各条件优化,胶体金试纸条T线和C线抗体最佳包被浓度为1.6 mg/m L,最佳包被液为PBS。试纸条灵敏性试验结果显示,该方法最低检出病毒量为1.2μg/m L,PCR为0.12μg/m L,灵敏性相近;特异性试验结果显示,除NGAstV检测结果为阳性外,常见禽源病原DAst V、GPV、H9-AIV、FAd V-4、DHAV-3和TMUV检测结果均呈阴性,无交叉反应;重复性试验结果显示,使用不同批次的试纸条均能检测出病毒;临床样品检测试验结果显示,该试纸条可检出37份阳性样品,与PCR方法的符合率为92.5%。稳定性试验结果显示,在25℃室温下试纸条可稳定保存3个月,4℃下可稳定保存5个月。并且该方法反应时间短,可在10 min内出现结果。胶体金层析检测方法可作为一种简便、快速、灵敏、特异检测新型鹅星状病毒的方法。

关键词：新型鹅星状病毒 ORF2 单克隆抗体免疫胶体金层析试纸条

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新型鹅星状病毒感染雏鹅肾脏病理损伤的研究

新型鹅星状病毒感染雏鹅肾脏病理损伤的研究

作者：黄晗南京农业大学

学位级别：硕士

自2016年以来,中国江苏、安徽、山东、河南、四川、广东等多个地区养鹅场暴发了新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)引起雏鹅痛风的传染病,对我国养鹅业造成巨大经济损失。该病主发于20日龄以下的雏鹅,在鹅群中既可水平传播又能垂... 详细信息

自2016年以来,中国江苏、安徽、山东、河南、四川、广东等多个地区养鹅场暴发了新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)引起雏鹅痛风的传染病,对我国养鹅业造成巨大经济损失。该病主发于20日龄以下的雏鹅,在鹅群中既可水平传播又能垂直传播,感染率高,死亡率约2%-50%,死亡雏鹅胸腹膜及内脏表面、关节腔、输尿管中有大量白色尿酸盐沉积,肾脏因尿酸盐沉着和严重肿胀而呈花斑状,目前还没有有效控制该疾病的药物与疫苗。本实验室和其他学者先前研究结果显示肾脏是新型鹅星状病毒侵害的主要靶器官,病死雏鹅除痛风外主要病变为肾脏苍白肿胀,且所有组织中肾脏病毒载量最高。为了解雏鹅感染新型鹅星状病毒后肾脏病理损伤的变化规律,将100只1日龄健康雏鹅随机分为实验组与对照组两组,每组50只,实验组每只口服0.5 m L GAstV病毒液,对照组每只口服0.5 m L PBS,于感染后12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、11 d、15 d、19 d(dpi)观察临床症状并每组剖杀5只雏鹅,采取血液和肾脏组织并称重,用荧光定量PCR方法检测血清和肾脏中病毒载量,微板法检测血清中尿酸和肌酐的含量;HE染色、Masson、PAS染色和电子透射显微镜观察肾组织病理学变化;免疫组织化学观察病毒在肾脏的定位。试验结果表明雏鹅感染GAstV后生长缓慢,体重从7dpi起相较于对照组明显下降(P病毒载量均在3 dpi时骤然升高,分别在3 dpi和7 dpi达到高峰后逐渐下降。血清中尿酸和肌酐含量在3 dpi、5 dpi、7dpi均显著高于对照组(P鹅肾脏,与对照组相比,实验组于感染3天后出现苍白肿胀,肾脏相对重量明显增加(P鹅肾小管上皮细胞在3 dpi开始出现病理损伤,可见其变性、坏死,近曲小管刷状缘结构受损,肾小球的血管球系膜在7 dpi、11 dpi、15 dpi增厚,肾间质于5 dpi、7dpi、11 dpi伴有炎性细胞浸润,在7 dpi、11 dpi可见纤维化。电镜观察发现攻毒后雏鹅肾脏细胞核核膜增厚,线粒体肿胀、大量线粒体脊断裂,胞浆中可见自噬小体和自噬溶酶体的结构。免疫组化结果表明GAstV主要存于肾小管上皮细胞胞浆内。为进一步探究GAstV对肾脏造成损伤的机制,本课题组收集感染3 d、5 d、7 d、11 d、15 d后的实验组与对照组雏鹅肾脏,用微板法检测氧化损伤相关指标SOD、MDA、GSH-PX、T-AOC活性;Tunel法检测肾脏细胞凋亡率;q RT-PCR检测自噬相关基因LC3B、Beclin1、ATG5,细胞间连接关键基因ZO-1、Occludin、claudin-10,α-catenin、β-catenin、catenin-α2,肾小球足细胞损伤相关基因WT1、desmin,细胞因子i NOS、TNF-α、IL-8、IL-1β和禽类肾脏中重要的尿酸转运蛋白MRP4在mRNA水平上的变化;Western Blot对自噬相关基因LC3Ⅱ、Beclin1和泛素结合蛋白P62以及尿酸转运蛋白MRP4在蛋白水平上的表达进行定量分析;免疫组化方法对LC3B、Beclin1、P62在肾脏中进行定位。结果显示与对照组相比,感染组肾脏仅在7 dpi时SOD活力值明显下降,MDA含量明显升高(P0.05);自噬相关基因LC3B、Beclin1在5 dpi、7 dpi、11 dpi mRNA表达明显升高,ATG5在5 dpi、7 dpi mRNA表达上调(P鹅后引起肾小管上皮细

关键词：新型鹅星状病毒肾脏病理损伤自噬尿酸