新型鹅星状病毒一步法RT-PCR检测方法的建立与应用

作     者：肖亦辰 杨颖 马平 赵冬敏 章丽娇 刘青涛 杨婧 李银 刘宇卓 韩凯凯 黄欣梅 Xiao Yichen

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2022年第50卷第2期

页      面：142-146页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：横向课题“雏鹅痛风病因确定和防控方法初探” 

主　　题：新型鹅星状病毒 一步法RT-PCR 鉴别诊断 鹅痛风病 敏感性试验 临床样品检测 

摘      要：新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GoAstV)感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病。为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物,构建质粒标准品,并对引物用量和退火温度等反应体系和条件进行了优化。结果表明,该方法能特异性扩增新型GoAstV 512 bp基因片段,其他鹅常见病毒性病原扩增结果均为阴性,具有较高的特异性。敏感性试验结果提示,最小检测限量达4.54×10^(2)拷贝/μL。此外,该方法重复性良好,应用所建立的方法对新型GoAstV临床样品进行检测,102份鹅泄殖腔拭子的阳性率为46.08%,24份痛风症状患病鹅内脏样本阳性率为91.70%。本研究建立的新型GoAstV一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且操作简便、经济、快速,可用于新型GoAstV的临床鉴别诊断和流行病学调查。