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MDVgB对鸡白细胞的粘着作用及其抗病毒免疫原性

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中国兽医学报 1996年第5期16卷 424-427页

作者：秦爱建崔治中段玉友陆长明扬州大学农学院动物医学系

用抗马立克氏病病毒囊膜糖蛋白Ｂ（ＭＤＶｇＢ）的单抗ＩＡＮ８６作间接免疫荧光试验表明，在昆虫细胞中表达的重组ｇＢ基因产物能识别和粘着于鸡的部分淋巴细胞和巨噬细胞表面。抗重组ｇＢ的鸡血清在鸡成纤维细胞培养上对ＭＤＶ的中和... 详细信息

用抗马立克氏病病毒囊膜糖蛋白Ｂ（ＭＤＶｇＢ）的单抗ＩＡＮ８６作间接免疫荧光试验表明，在昆虫细胞中表达的重组ｇＢ基因产物能识别和粘着于鸡的部分淋巴细胞和巨噬细胞表面。抗重组ｇＢ的鸡血清在鸡成纤维细胞培养上对ＭＤＶ的中和效价为１∶８～１∶１６。经用能表达ＭＤＶｇＢ基因的重组杆状病毒感染的昆虫Ｓｆ９细胞免疫的鸡，能抵抗ＭＤＶ强毒株引起的急性死亡。

关键词：马立克氏病病毒糖蛋白B 细胞粘着抗病毒免疫

鸡源天然免疫DNA感受器cGAS-STING信号轴功能及其抗病毒作用研究

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鸡源天然免疫DNA感受器cGAS-STING信号轴功能及其抗病毒作用研究

作者：杨洁扬州大学

学位级别：硕士

天然免疫通过模式识别受体(PRRs)识别侵入宿主机体的病原相关分子模式(PAMPs)。DNA受体主要识别病原DNA,并通过接头蛋白MyD88或STING诱导产生Ⅰ型干扰素、炎性因子和其它基因表达产物抵御病原入侵。cGAS是2013年发现的新型胞浆DNA受体,... 详细信息

天然免疫通过模式识别受体(PRRs)识别侵入宿主机体的病原相关分子模式(PAMPs)。DNA受体主要识别病原DNA,并通过接头蛋白MyD88或STING诱导产生Ⅰ型干扰素、炎性因子和其它基因表达产物抵御病原入侵。cGAS是2013年发现的新型胞浆DNA受体,它可被病原双链DNA激活,通过合成第二信使2’-3’cGAMP将信号传递给下游接头蛋白STING,诱导Ⅰ型干扰素和相关基因的表达。cGAS-STING通路不仅在抗DNA病毒感染免疫中发挥作用,它还与肿瘤、自身免疫系统疾病密切相关。本研究调查鸡源cGAS(chcGAS)和STING(chSTING)信号功能、相互关系及抗病毒作用。1、鸡源cGAS、STING的克隆、信号功能鉴定和组织分布根据NCBI公布的chcGAS、chSTING序列,设计相应PCR扩增引物,从鸡HD11细胞中RT-PCR扩增出chcGAS、chSTING基因。将基因片段连接至pENTER4-MCS-3FLAG中间载体,再通过LR位点特异性重组,分别构建出chcGAS和 chSTING 的 pcDNA 真核表达质粒。经 Western-Blotting 验证,chcGAS 和 chSTING表达蛋白大小分别为60 kDa和45 kDa。chcGAS和chSTING共转染293T细胞,不能激活ISRE启动子,但能显著激活NF-κB启动子和下游hIL-1β、hIL-8的活性。与此相对照,猪源cGAS和STING共转染293T细胞能激活ISRE启动子;另外chcGAS和猪STING共转染也能激活ISRE启动子。说明cGAS-STING在哺乳动物和禽类中存在种属特异性,STING在种属特异性中发挥关键作用。chcGAS和chSTING单独转染HD11细胞均能激活chIFN-β启动子和下游chIFN-β、chIL-1β、chIL-8的活性,且二者共转染活性显著升高。上述实验证明:chcGAS、chSTING均具有信号活性,通过cGAS-STING信号轴发挥作用。采集三周龄SPF鸡组织,分别检测chcGAS和chSTING转录产物在各组织中的分布。结果表明chcGAS在胰腺中的含量最高,而chSTING在脾脏中含量最高,二者在肠道中的含量均普遍较高。2、chcGAS和chSTING的相互作用及chcGAS信号活性位点研究免疫共沉淀实验结果表明,chcGAS和chSTING能以免疫复合物形式共沉淀,说明chcGAS和chSTING蛋白间具有相互作用关系。分别对chcGAS潜在的镁、锌离子和 ATP、GTP 结合位点 S129、E141、D143、D239、E303、N309、H310、C317、C324、K334、S353-K357位点进行点突变和缺失突变,探究这些位点对chcGAS信号活性的影响。HD11细胞转染结果表明,所有chcGAS突变体均不能激活chIFN-β启动子和下游Ⅰ型IFN表达;而S129A、D239A、H310A突变体chcGAS仍然能诱导下游chIL-1β和chIL-8表达,其余突变体均不能激发下游chIL-1β、chIL-8。293T细胞转染结果表明,E141、N309位点突变具有正常的NF-κB启动子活性和下游hIL-1β、hIL-8转录水平,而其余突变体的NF-κB启动子活性和下游的hIL-1β、hIL-8转录活性均消失。HD11和293T细胞实验结果的差异再一次显示了哺乳动物和禽类的种属特异性。3、chcGAS和chSTING的抗病毒功能研究本研究通过慢病毒感染HD11分别表达chcGAS和chSTING,抗生素嘌呤霉素筛选后获得稳定表达HD11细胞系。同时通过慢病毒感染HD11分别表达特异靶向chcGAS和chSTING的CRISPR gRNAs,抗生素嘌呤霉素筛选后获得chcGAS和chSTING 基因敲除(KO)稳定 HD11 细胞系。通过 45bp-dsDNA、pcDNA3.1、HSV-1刺激稳定表达细胞系检验细胞系的功能。与对照细胞相比,chcGAS和chSTING过表达细胞系对刺激应答能力升高,下游chIFN-β、chOASL、chIL-1β、chIL-8水平升高。与CRISPR对照细胞相比,chcGAS和chSTING KO细胞系对刺激应答减弱,下游基因转录水平降低。在此基础上利用过表达和KO稳定HD11细胞系正反向验证chcGAS和chSTING在抗病毒感染免疫中的作用。痘苗病毒VACV株、水泡型口炎病毒(VSV)、仙台病毒(SeV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、禽白血病病毒(ALV)均能激活下游IFN和NF-κB信号通路;而痘苗病毒SMV株、新城疫病毒(NDV)主要激活下游NF-κB通路。chcGAS 和 chSTING 过表达 HD 细胞中,VACV、SMV、VSV、SeV

关键词：天然免疫鸡 DNA感受器 cGAS-STING 信号功能抗病毒免疫

IL-33及其受体ST2在抗病毒和抗肿瘤免疫应答中的意义

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临床检验杂志 2015年第2期33卷 130-133页

作者：邓旭卢斌峰蒋敬庭苏州大学附属第三医院肿瘤生物诊疗中心江苏常州213003 美国匹兹堡大学免疫系美国宾夕法尼亚州匹兹堡15323

白细胞介素33(IL-33)是白细胞介素1家族的新成员。先前研究表明,IL-33主要参与TH2型免疫应答,在变态反应、炎症、感染、自身免疫性疾病和心肺疾病等领域起重要作用。最新研究发现,IL-33还可通过干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α... 详细信息

白细胞介素33(IL-33)是白细胞介素1家族的新成员。先前研究表明,IL-33主要参与TH2型免疫应答,在变态反应、炎症、感染、自身免疫性疾病和心肺疾病等领域起重要作用。最新研究发现,IL-33还可通过干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等多种细胞因子或作为免疫佐剂活化CD4+、CD8+T细胞,促进TH1型免疫应答,在细胞介导的抗病毒和抗肿瘤免疫中发挥重要作用。本文就近年来IL-33在抗肿瘤和抗病毒免疫应答中的相关研究作一综述。

关键词：白细胞介素33 细胞因子抗病毒免疫抗肿瘤免疫

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抗感染免疫重点号导读

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第1期44卷 M0002-M0002页

抗感染免疫是机体抵抗病原体入侵的重要防线,它涉及多种免疫细胞的活化和病原体的清除。随着研究的深入,我们对病原体的致病机制和各类免疫细胞在抗感染中的作用有了较为深入的了解。同时,新型检测技术的应用也为抗感染免疫研究提供了... 详细信息

抗感染免疫是机体抵抗病原体入侵的重要防线,它涉及多种免疫细胞的活化和病原体的清除。随着研究的深入,我们对病原体的致病机制和各类免疫细胞在抗感染中的作用有了较为深入的了解。同时,新型检测技术的应用也为抗感染免疫研究提供了诸多手段。本刊特邀请吉林大学柳忠辉教授和崔雪玲教授担任本期"抗感染免疫"重点号执行编委,主要报道抗细菌免疫、抗病毒免疫,以及微流控技术在抗感染免疫研究中的应用等研究成果和进展。我们希望通过"抗感染免疫"重点号的策划和报道,能够为大家对抗感染免疫的理解和研究提供更多的借鉴和启发,同时也为抗感染药物的研发提供新的思路和方向。

关键词：抗感染免疫免疫细胞抗病毒免疫抗感染药物致病机制微流控技术新型检测技术病原体

新型抗噬菌体防御系统RADAR的组装、催化和调控机制研究

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科学通报 2023年第21期68卷 2711-2713页

作者：高艺娜中国科学院生物物理研究所北京100101

宿主细胞依赖多种免疫应答机制来对抗病毒感染.其中,针对核酸分子的免疫识别和操作,是极为核心的抗病毒免疫策略,广泛存在于从细菌到哺乳动物等几乎所有宿主系统中^([1~7]).相较于哺乳动物细胞稍显复杂的信号转导和调控^([1]),细菌往往... 详细信息

宿主细胞依赖多种免疫应答机制来对抗病毒感染.其中,针对核酸分子的免疫识别和操作,是极为核心的抗病毒免疫策略,广泛存在于从细菌到哺乳动物等几乎所有宿主系统中^([1~7]).相较于哺乳动物细胞稍显复杂的信号转导和调控^([1]),细菌往往更为简单高效,其编码的多种抗病毒免疫系统可直接对核酸分子进行切割或修饰^([2,8~14]).

关键词：抗病毒免疫抗病毒感染宿主细胞核酸分子免疫识别宿主系统防御系统免疫应答机制

树突状细胞HBsAg疫苗抗乙型肝炎病毒免疫的体外研究

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中华传染病杂志 2002年第6期20卷 333-336页

作者：李用国罗云萍兰英华梁增伟许红梅任红重庆医科大学病毒性肝炎研究所 400010

目的　研究人单核细胞来源的树突状细胞 (DC)激活的HBsAg特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)对表达HBsAg的HepG2 /S靶细胞的杀伤效应 ,以探索DC HBsAg疫苗在抗乙型肝炎病毒 (HBV)中的作用。方法　从健康外周血中分离出单核细胞 ,在粒细胞 ... 详细信息

目的　研究人单核细胞来源的树突状细胞 (DC)激活的HBsAg特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)对表达HBsAg的HepG2 /S靶细胞的杀伤效应 ,以探索DC HBsAg疫苗在抗乙型肝炎病毒 (HBV)中的作用。方法　从健康外周血中分离出单核细胞 ,在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)和白细胞介素 4(IL 4)的作用下培养 7d诱导出DC ,然后以DC为刺激细胞在体外诱导出HBsAg特异性CTL ;将携有HBV S基因的pLXSN/S重组质粒电击导入肝癌细胞系 (HepG2 ) ,建立表达HBsAg的靶细胞模型HepG2 /S ;用染色法检测HBsAg特异性CTL对HepG2 /S靶细胞的杀伤效应。结果　DC激活的HBsAg特异性CTL对HepG2 /S靶细胞具有较强的杀伤效应 ,不同浓度HBsAg(0 μg/L ,5 0 μg/L和 10 0 μg/L)诱导的CTL的杀伤率分别为 3 .8%、69.5 %和85 .1% ,而CTL对HepG2细胞无明显杀伤效应。

关键词：树突细胞抗病毒免疫乙型肝炎病毒 DC-HBsAg疫苗

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水稻病毒与植物寄主互作研究新进展

植物保护学报 2022年第1期49卷 33-41页

作者：张合红李雁军孙宗涛燕飞陈剑平宁波大学植物病毒学研究所农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室农业农村部和浙江省植物保护生物技术重点实验室浙江宁波315211

水稻是维持世界一半以上人口生存的主要粮食作物,其产量和品质关系到社会稳定。近年来,水稻病毒引起的病毒病严重影响作物的产量及品质。植物在与病毒长期的互作过程中进化出了多种有效的防御机制来抑制病毒侵染。本文围绕近年来国内外... 详细信息

水稻是维持世界一半以上人口生存的主要粮食作物,其产量和品质关系到社会稳定。近年来,水稻病毒引起的病毒病严重影响作物的产量及品质。植物在与病毒长期的互作过程中进化出了多种有效的防御机制来抑制病毒侵染。本文围绕近年来国内外关于水稻抗病毒的研究进展,对植物激素、自噬与水稻病毒的互作关系进行总结,并提出了水稻病毒研究过程中所涉及到的一些问题,以期为开展水稻抗病育种相关研究提供参考。

关键词：水稻病毒植物激素细胞自噬抗病毒免疫

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核受体NR4A1调控宿主抗流感病毒天然免疫反应的作用机制

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核受体NR4A1调控宿主抗流感病毒天然免疫反应的作用机制

作者：傅振东山东农业大学

学位级别：硕士

A型流感病毒（Influenza A virus,IAV）是重要的人畜共患病病原,其宿主范围十分广泛,其中猪和家禽是IAV的两个重要宿主。IAV感染能引起动物严重的呼吸系统疾病,严重时导致大量的死亡。虽然疫苗接种能够明显降低IAV感染和发生,但是病毒... 详细信息

A型流感病毒（Influenza A virus,IAV）是重要的人畜共患病病原,其宿主范围十分广泛,其中猪和家禽是IAV的两个重要宿主。IAV感染能引起动物严重的呼吸系统疾病,严重时导致大量的死亡。虽然疫苗接种能够明显降低IAV感染和发生,但是病毒的不断变异和重组给疫苗的生产和应用带来了严峻挑战。因此,寻找新的抗流感病毒药物靶点,对制定流感病毒感染的防控和治疗具有重要意义。近年来研究发现,IAV感染能够调控多种宿主因子的表达促进自身复制,这些宿主因子被认为是潜在的IAV治疗靶点。已有研究表明核受体Nr4a1表达可被多种病毒感染所调控,提示该蛋白可能是机体调控IAV感染相关的重要宿主因子。然而,对于Nr4a1如何影响IAV复制以及IAV调控Nr4a1的表达作用机制尚不完全清楚。为了明确Nr4a1在IAV感染中的作用,我们以小鼠原代骨髓巨噬细胞（BMDMs）为模型发现IAV感染能够显著抑制细胞Nr4a1的表达。进一步研究发现IAV的PA和PB2是IAV抑制Nr4a1表达的两个主要病毒蛋白。为了进一步明确Nr4a1与IAV复制的关系,我们利用慢病毒系统在i BMDMs上构建了表达和敲低Nr4a1的单克隆细胞系。利用以上细胞检测Nr4a1对IAV复制的影响,结果显示Nr4a1表达能够显著抑制IAV的复制,而敲低Nr4a1能显著促进IAV的复制,证实Nr4a1是宿主调控IAV复制的重要宿主因子。为了明确Nr4a1调控IAV复制的机制,我们检测了Nr4a1对Ⅰ型干扰素以及干扰素刺激基因（ISGs）表达的影响,结果发现Nr4a1表达能显著促进Poly（I:C）以及RNA病毒诱导的Ifnb和下游ISG表达;而敲低Nr4a1则能显著抑制Poly（I:C）以及RNA病毒诱导的Ifnb和下游ISG表达。深入研究发现,缺失或敲低Nr4a1显著抑制了干扰素调节因子IRF3的磷酸化,表明Nr4a1是一个Ⅰ型干扰素正向调控分子。综上所述,我们发现IAV感染能够通过下调Nr4a1的表达来抑制Ⅰ型干扰素的产生,进而促进自身复制,这可能是IAV逃避天然免疫的一种新机制。因此,Nr4a1可能是治疗IAV感染的潜在分子靶点。

关键词： NR4A1 RLR 干扰素抗病毒免疫流感病毒

灰飞虱IMD免疫通路相关基因的鉴定及其在水稻条纹病毒侵染中的功能初探

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灰飞虱IMD免疫通路相关基因的鉴定及其在水稻条纹病毒侵染中的功...

作者：鲁燕华浙江农林大学

学位级别：硕士

灰飞虱(Small brown planthopper,Laodelphax striatellus)是重要的水稻害虫,其传播的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)对我国水稻的安全生产造成严重影响。IMD免疫通路是果蝇抵御革兰氏阴性菌感染的重要机制,近几年研究表明IMD天... 详细信息

灰飞虱(Small brown planthopper,Laodelphax striatellus)是重要的水稻害虫,其传播的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)对我国水稻的安全生产造成严重影响。IMD免疫通路是果蝇抵御革兰氏阴性菌感染的重要机制,近几年研究表明IMD天然免疫通路在果蝇、对虾等节肢动物中应对病毒侵染过程中同样具有重要作用。而灰飞虱中IMD免疫通路相关基因的鉴定及其功能目前还未见报道,为明确灰飞虱中IMD通路相关基因在其抗RSV中的作用,本研究鉴定并克隆了五个灰飞虱IMD通路相关基因(PGRP-LC、Duox、Relish、IKKα和TBK1)的开放阅读框,研究了其在无毒(RSV-free)及RSV侵染(RSV-infected)的灰飞虱不同发育阶段和不同组织中的表达模式,进一步利用双链RNA(dsRNA)干扰技术初步明确了IMD通路相关基因在灰飞虱抗病毒中的功能。主要研究结果如下:(1)以已知的模式昆虫中的IMD通路相关基因为诱饵序列,利用生物信息学方法在灰飞虱基因组中鉴定并克隆了5个灰飞虱IMD通路相关重要基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),分别为PGRP-LC、Duox、Relish、IKKα和TBK1,并对这些基因进行了进一步的序列分析及系统进化分析。(2)利用荧光定量PCR技术检测了PGRP-LC、Duox、Relish、IKKα和TBK1基因在RSV-free及RSV-infected的灰飞虱不同发育阶段和不同组织中的表达特点,结果表明这5个IMD相关基因在灰飞虱不同发育阶段和组织中均广泛表达,且各个基因具有时空表达特异性。同时,RSV侵染后对IMD通路相关基因表达具有明显影响,表明其在应对RSV侵染过程中可能具有一定功能。(3)为进一步明确灰飞虱IMD通路在抵御RSV侵染过程中的作用,我们利用dsRNA注射方法干扰无毒及RSV侵染灰飞虱的相关基因。结果表明,RNA干扰带毒灰飞虱中IMD通路相关基因后,其相应基因的表达量均被显著抑制,同时带毒灰飞虱体内的病毒含量显著上调,表明IMD通路在灰飞虱抗病毒过程中可能具有重要作用。另一方面,同样利用dsRNA注射方法干扰无毒灰飞虱体内的IMD通路相关基因再检测对其获毒率的影响,结果表明相关基因干扰后无毒灰飞虱的获毒率相对对照(dsGFP)显著上升,进一步证实了PGRP-LC、Duox、Relish、IKKα和TBK1参与了灰飞虱抗RSV的免疫反应。本研究为今后进一步深入研究IMD免疫通路在灰飞虱抗病毒中的功能提供了丰富的基础信息,同时有助于深入理解传毒介体应对植物病毒的先天免疫机制。

关键词：灰飞虱水稻条纹病毒 RNA干扰抗病毒免疫 IMD通路