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基于抗原模拟表位的烯效唑全抗原模拟物构建及其免疫分析初步应用

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基于抗原模拟表位的烯效唑全抗原模拟物构建及其免疫分析初步应用

作者：陈笑南昌大学

学位级别：硕士

烯效唑(Uniconazole)作为植物生长调节剂,广泛应用于小麦、花生等农作物中,对烯效唑的毒理学研究表明,长期使用烯效唑会对人和动物的内分泌产生副作用,存在致畸、致突变的可能,对人类健康构成潜在的风险。针对烯效唑免疫分析方法构建过... 详细信息

烯效唑(Uniconazole)作为植物生长调节剂,广泛应用于小麦、花生等农作物中,对烯效唑的毒理学研究表明,长期使用烯效唑会对人和动物的内分泌产生副作用,存在致畸、致突变的可能,对人类健康构成潜在的风险。针对烯效唑免疫分析方法构建过程中,其检测全抗原的制备主要采用化学合成方法,从而面临效率低、成本高、副产物多、批次误差大等问题。本研究以烯效唑单克隆抗体为靶体,采用噬菌体展示多肽库亲和淘选技术,开展了基于噬菌体展示多肽的烯效唑抗原模拟表位的制备研究;并在此基础上,基于基因工程技术将抗原模拟表位(多肽)分别与麦芽糖结合蛋白(MBP)、硫氧还蛋白(Trx A)进行基于原核生物的融合表达,以多肽-融合蛋白的形式替代传统的化学合成的烯效唑检测全抗原,同时开展多肽-融合蛋白(检测全抗原模拟物)在免疫分析层析试纸条的初步应用并初步验证其在均相免疫分析体系中的可行性,取得的主要研究结果如下:1)以烯效唑单克隆抗体为靶标,投入噬菌体随机展示十二肽库,开展了三次、每次三轮的亲和淘选,通过间接Phage-ELISA、间接竞争Phage-ELISA以及DNA测序鉴定,最终从第三次亲和淘选过程中获得了2种烯效唑的抗原模拟表位,分别命名为3-25、3-19,并以其建立Phage-ELISA竞争抑制标准曲线,其半抑制浓度(IC)分别为0.54、0.28 ng/m L,与基于化学合成制备的烯效唑检测抗原所建立的ELISA相比(IC=3.88 ng/m L),其灵敏度提高了近10倍。2)成功构建了可分别与麦芽糖结合蛋白(MBP)、硫氧还蛋白(Trx A)进行融合表达的抗原模拟表位(多肽)-融合蛋白表达载体,分别命名为p MAl-多肽(3-19)-MBP、p MAl-多肽(3-25)-MBP、p ET-多肽(3-25)-Trx A@Spy Tag,将其分别转化至大肠杆菌,通过菌落浓度优化、IPTG浓度优化,实现了多肽(3-19)-MBP、多肽(3-25)-MBP、多肽(3-25)-Trx A@Spy Tag融合蛋白的可溶性表达,其中(3-25)-Trx A@Spy Tag的表达量1L为17.28 mg,多肽(3-19)-MBP、多肽(3-25)-MBP的表达量1L达到9 mg;以生物合成制备的多肽(3-19)-MBP、多肽(3-25)-MBP、多肽(3-25)-Trx A@Spy Tag作为烯效唑全抗原模拟物分别建立竞争ELISA标准曲线,其IC分别为14.86 ng/m L、3.20 ng/m L、17.34 ng/m L;37℃加速保存实验结果表明,在120 h的处理条件下,三种生物合成的烯效唑全抗原模拟物的免疫分析性能均未见显著下降,表明生物合成的烯效唑全抗原模拟物可作为传统化学合成检测抗原的替代物用于免疫分析方法的构建。3)分别将烯效唑抗体与胶体金、乳胶微球、时间分辨荧光微球进行标记,制备信号探针,将烯效唑全抗原模拟物(3-25-Trx A@Spy Tag、3-25-MBP)固定于硝酸纤维素膜的T线,分别构建了基于三种信号模式的烯效唑免疫层析试纸,结果显示:基于胶体金探针的免疫层析试纸无法实现有效地检测,推测可能是胶体金的信号片段无法有效地反应检测信号;基于乳胶微球的免疫层析试纸,当使用3-25-Trx A@Spy Tag作为检测抗原时,其信号灵敏度要强于基于3-25-MBP的免疫层析试纸,其cutoff值为100 ng/m L;以时间分辨荧光微球为检测信号时,以3-25-Trx A@Spy Tag为T线检测抗原的烯效唑免疫层析试纸条的IC为8.83ng/m L。4)基于Spy Tag/Catcher自组装系统,通过正交实验进行反应温度、反应时间以及Catcher:Spy Tag摩尔比的优化,基于优化后的自组装条件定向制备了偶联有烯效唑全抗原模拟物(3-25-Trx A@Spy Tag)的荧光微球,并与烯效唑抗体免疫磁珠相结合,初步构建了烯效唑的均相免疫分析竞争标准曲线,其SC值为34.82 ng/m L,线性范围为20.05～432.7 ng/m L,实验的结果初步验证了基于全抗原模拟物构建其均相免疫分析方法的可行性,但后续还需进行更深入的研究。

关键词：烯效唑抗原模拟表位噬菌体展示多肽均相免疫分析免疫层析试纸条

呕吐毒素抗原模拟表位的定向突变及其免疫层析试纸条的制备

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呕吐毒素抗原模拟表位的定向突变及其免疫层析试纸条的制备

作者：谌远南昌大学

学位级别：硕士

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)又名呕吐毒素,在我国是常见的一种真菌毒素。基于抗原抗体特异性识别与结合的免疫分析方法在监测真菌毒素的污染方面发挥着重要作用,其中免疫层析试纸方法又以其操作简单、快速等优点在包括真菌... 详细信息

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)又名呕吐毒素,在我国是常见的一种真菌毒素。基于抗原抗体特异性识别与结合的免疫分析方法在监测真菌毒素的污染方面发挥着重要作用,其中免疫层析试纸方法又以其操作简单、快速等优点在包括真菌毒素在内的食品安全快速检测领域应用广泛。然而,传统的小分子抗原的免疫分析方法中的关键核心原料(检测抗原)主要以化学合成的方式为主,仍然面临着制备流程长、批次误差大、成本高及易造成环境污染等众多问题。本研究在前期获得呕吐毒素的抗原模拟表位(D)的基础上,基于丙氨酸扫描技术,开展了D的丙氨酸定点饱和突变研究,以期解析影响其免疫分析功能的关键氨基酸,并在此基础上将D的突变体与麦芽糖结合蛋白(MBP)、纳米荧光素酶进行了融合表达。分析了其作为包被抗原和竞争酶标抗原的免疫分析性能,在此基础上建立了基于D突变体的呕吐毒素免疫层析试纸检测方法,取得的主要研究进展如下:1)基于丙氨酸扫描技术,定向突变了D的七个关键氨基酸,并构建了七个D突变体与MBP融合蛋白的表达载体,并基于大肠杆菌表达体系,实现了上述七个D突变体-MBP融合蛋白的生物合成。基于ELISA检测结果发现,D-25A-MBP与呕吐毒素抗体的结合活性受到了显著影响,提示D的第5位组氨酸为关键氨基酸残基;并通过非竞争ELISA方法,测定了D-21A-MBP、D-22A-MBP、D-23A-MBP、D-24A-MBP、D-26A-MBP、D-27A-MBP和D-S-MBP分别为包被抗原时,呕吐毒素抗体的亲和力常数分别为4.5×10、1×10、0.9×10、1.47×10、2.1×10、1.8×10 L/mol和4.0×10 L/mol。2)为解析多肽抗原模拟表位中氨基酸组成的排列顺序对其结合抗体的能力及特异性的影响,本研究还设计了与D的氨基酸序列具有镜像组成差异的D突变体(D-S-MBP),研究结果发现D的镜像突变体仍保留了与呕吐毒素单克隆抗体结合的能力,然而与D原体相比,基于D-S-MBP为检测抗原的间接竞争ELISA的IC数值增大为196.56±4.19 ng/m L,提示镜像结构会影响其与抗体的结合能力。3)选取含有编码纳米荧光素酶NLuc的质粒p ET-22b-NLuc,将其进行双酶切后与制备的三种D突变体的目的基因片段进行了酶连,成功制备了三种D突变体-NLuc融合蛋白的表达载体p ET-D-24A-NLuc,p ET-D-26A-NLuc和p ET-D-S-NLuc,并获得了D突变体-NLuc高纯度的融合蛋白。经直接竞争ELISA验证,结果显示D-24A-NLuc,D-26A-NLuc和D-S-NLuc三种融合蛋白作为竞争抗原时,均可与呕吐毒素单克隆抗体特异性结合,并且可与呕吐毒素标准品竞争性结合抗体。在1.5 ng/m L的标准品浓度下,基于D-24A-NLuc,D-26A-NLuc和D-S-NLuc的ELISA的抑制率分别为32%、2%、10%。直接竞争ELISA的结果表明,将D抗原模拟表位与荧光素酶进行融合表达,制备的D突变体-荧光素酶具有作为酶标抗原替代物的应用前景。4)分别构建了基于D-MBP、D-24A-MBP融合蛋白为T线检测抗原的呕吐毒素免疫层析试纸条。开展了基于D-MBP、D-24A-MBP融合蛋白的呕吐毒素免疫层析试纸性能评估,结果显示,在试纸的样本孔中加入呕吐毒素时,随着呕吐毒素标准品浓度的增加,试纸条上的T线颜色逐渐降低,呈现典型的竞争抑制曲线,其IC值分别为50±2.15 ng/m L,56±3.12 ng/m L。当呕吐毒素标准品的浓度达到125,135 ng/m L时,基于D-MBP、D-24A-MBP的呕吐毒素免疫层析试纸条上的T线完全不显色,设定该浓度为免疫层析试纸的肉眼检测阈值;特异性验证实验结果表明,建立的两种呕吐毒素免疫层析试纸均只特异性结合呕吐毒素,而与其它真菌毒素不结合。5)选取玉米、小麦、燕麦等呕吐毒素阴性样本,人工添加呕吐毒素标准品至样本中进行加标回收实验评估建立的免疫层析试纸的准确度,结果显示,对于D-MBP的呕吐毒素免疫层析试纸,玉米、小麦、燕麦样本的回收率分别为96～116.6%、96.67～103%、95～102%;对于D-24A-MBP的呕吐毒素免疫层析试纸,玉米、小麦、燕麦样本的回收率分别为83～101.0%、96.67～101%、88.3～106.67%。进一步地选取了30份实际样本,分别用本研究建立的免疫层析试纸及UPLC-Qq Q-MS方法进行检测,结果显示,其中三份小麦一份燕麦样本检出呕吐毒素,玉米样本未检出呕吐毒素,该结果与UPLC-QqQ-MS检测方法的结果相一致。

关键词：呕吐毒素抗原模拟表位免疫分析免疫层析试纸条

基于纳米抗体免疫磁珠的AFB1免疫层析试纸条构建及抗原模拟表位淘选

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基于纳米抗体免疫磁珠的AFB1免疫层析试纸条构建及抗原模拟表位淘...

作者：贺晓薇南昌大学

学位级别：硕士

黄曲霉毒素B(Aflatoxins B,AFB)是曲霉属真菌产生的一种有毒次级代谢产物,具有很强的致癌性和肝毒性,常见于被污染的玉米、花生及大米中,会造成严重的经济损失并威胁食品安全,因此建立一种快速、灵敏、准确的检测方法是十分必要的。在... 详细信息

黄曲霉毒素B(Aflatoxins B,AFB)是曲霉属真菌产生的一种有毒次级代谢产物,具有很强的致癌性和肝毒性,常见于被污染的玉米、花生及大米中,会造成严重的经济损失并威胁食品安全,因此建立一种快速、灵敏、准确的检测方法是十分必要的。在真菌毒素的免疫分析检测中一般以传统的单克隆抗体和化学合成抗原作为元件,但单克隆抗体的制备过程复杂且成本较高,化学合成抗原的制备存在价格昂贵、危害操作人员健康等限制因素。而纳米抗体以其制备简单、性质稳定、生产成本低等优点,在真菌毒素的免疫检测逐渐显现出独特优势。本研究以抗AFB纳米抗体为元件,制备了抗AFB纳米抗体免疫磁珠,并将其应用于AFB免疫层析试纸条中,另外,为获得能与抗AFB纳米抗体配对使用的检测抗原模拟物,为AFB无毒绿色免疫分析方法的建立提供基础,本研究还开展了以AFB纳米抗体为配体,投入噬菌体随机展示十二肽亲和淘选AFB抗原模拟表位的探索研究,取得的主要研究结果如下:1)原核表达抗AFB纳米抗体,间接竞争ELISA测得其与AFB单克隆抗体的IC分别为4.17 ng/m L、0.36 ng/m L,之后以该纳米抗体为研究对象,分别采取MNPs@Nb、MNPs@SA@Nb、MNPs@Catcher@Nb三种方法制备抗AFB纳米抗体免疫磁珠,通过ELISA、测定Zeta电位以及BCA蛋白定量的方法对偶联效果进行表征,结果表明,MNPs@Nb、MNPs@SA@Nb、MNPs@Catcher@Nb三种免疫磁珠均成功制备,偶联量分别为22.00mg/mg、27.76mg/mg、24.15mg/mg。2)以前期制备的MNPs@Nb、MNPs@Catcher@Nb、MNPs@SA@Nb为新型信号探针,建立基于抗AFB纳米抗体的免疫层析试纸条检测方法。最优条件下,MNPs@Nb、MNPs@Catcher@Nb、MNPs@SA@Nb的试纸条肉眼判读检测AFB的灵敏度分别为4.0、4.0、6.0 ng/m L,与传统的AFB胶体金试纸条比较,灵敏度提高一倍。基于MNPs@Nb、MNPs@Catcher@Nb、MNPs@SA@Nb探针所建立免疫层析试纸竞争抑制曲线,其IC分别为0.25 ng/m L、0.16 ng/m L、0.45ng/m L。特异性实验表明,所构建的三种免疫层析试纸条与其他真菌毒素(DON、ZEN、OTA、FB)均无交叉。在花生油提取液中添加AFB标准品进行加标回收实验,加标回收率为81～121.3%,变异系数为9.3～14.2%,表明三种试纸条均具有较好的准确性和精密度。3)以抗AFB纳米抗体为靶分子,分别采取基于MNPs@Nb的液相淘选和基于Spy Tag-Catcher自组装的固相淘选两种方法从噬菌体展示十二肽库中筛选AFB抗原模拟表位,两种方法的阳性率分别为3.1%和30.9%,测序后发现-LSFQYHKVPQGG-、-STLLLSGAVDIW-两个序列得到富集,但并未获得AFB的抗原模拟表位。

关键词：黄曲霉毒素B1 纳米抗体免疫磁珠抗原模拟表位免疫层析

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真菌毒素抗原模拟表位及其免疫分析应用

卫生研究 2021年第3期50卷 521-526页

作者：严晓阳(综述) 游凯豪何庆华(审校) 浙江嘉兴市中医医院嘉兴314001 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室南昌330027

食源性真菌毒素污染广泛且具有致癌、致畸等毒性,严重危害人类及动物的健康。免疫分析方法在真菌毒素的监测领域中发挥着重要作用,然而传统真菌毒素免疫分析方法的建立依赖于以真菌毒素标准品为原料,存在成本高、制备复杂、污染环境等... 详细信息

食源性真菌毒素污染广泛且具有致癌、致畸等毒性,严重危害人类及动物的健康。免疫分析方法在真菌毒素的监测领域中发挥着重要作用,然而传统真菌毒素免疫分析方法的建立依赖于以真菌毒素标准品为原料,存在成本高、制备复杂、污染环境等问题。有鉴于此,研究者开始基于抗原模拟表位理论,开展真菌毒素的替代研究,以期建立不基于真菌毒素的新型免疫分析方法。本文主要对真菌毒素抗原模拟表位的解析及其免疫分析领域的应用进行综述,为将来其它有害化学污染物的环境友好型免疫分析体系的建立提供参考。

关键词：真菌毒素抗原模拟表位免疫分析抗原

结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原模拟表位的筛选研究

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中华结核和呼吸杂志 2010年第5期33卷 382-383页

作者：张丽婷胡忠义李连青刘忠华秦莲花蔡江丽杨华山西医科大学第一临床医学院临床检验诊断学太原030001 同济大学附属上海市肺科医院上海市结核病(肺)重点实验室山西省临床检验中心

MTB分泌蛋白64（MPT64）是MTB重要的保护性抗原,也是结核病血清学诊断的理想抗原之一.然而目前报道MPT64抗原对血清标本的直接检出率较低.20世纪80年代兴起的噬菌体展示随机肽库（phage display peptide library）技术是一种快捷、高效... 详细信息

MTB分泌蛋白64（MPT64）是MTB重要的保护性抗原,也是结核病血清学诊断的理想抗原之一.然而目前报道MPT64抗原对血清标本的直接检出率较低.20世纪80年代兴起的噬菌体展示随机肽库（phage display peptide library）技术是一种快捷、高效分析蛋白分子间相互作用的工具[3],尤其适于筛选生物活性大分子的配体.

关键词：抗原模拟表位分泌蛋白结核分枝杆菌筛选噬菌体展示随机肽库蛋白分子间相互作用 display peptide

诺如病毒全人单链抗体的制备及抗原模拟表位的鉴定

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诺如病毒全人单链抗体的制备及抗原模拟表位的鉴定

作者：王璐南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的诺如病毒（Norovirus,NoV）是引起全球各年龄段人群急性胃肠炎暴发流行及散发的主要病原体,是重要的公共卫生问题。基于NoVVP1氨基酸序列多样性,将其分为10个基因组,共49个基因型。GII.4 NoV是自20世纪90年代以来,全球No... 详细信息

研究背景和目的诺如病毒（Norovirus,NoV）是引起全球各年龄段人群急性胃肠炎暴发流行及散发的主要病原体,是重要的公共卫生问题。基于NoVVP1氨基酸序列多样性,将其分为10个基因组,共49个基因型。GII.4 NoV是自20世纪90年代以来,全球NoV胃肠炎的主要流行株。然而,在2014～2016年NoV流行季,GII.17新变异株取代GII.4基因簇成为我国该时期的优势毒株。同时,在2015～2018年间,GII.4/2012新变异株在多个国家引起NoV胃肠炎暴发。GII.6 NoV常以散发为主,但近年来该毒株所致胃肠炎的发病率在我国及全球范围内均呈上升趋势。由于NoV的遗传和抗原多样性,缺乏成熟的细胞培养系统,也无合适的小动物感染模型,尚无许可使用的NoV疫苗或抗体药物。因而,本研究结合课题组前期源于一起GII.17 NoV暴发制备的全人源单抗,利用一起GII.6 NoV暴发的感染者恢复期外周血,用噬菌体展示技术制备NoV全人单链抗体,初步鉴定NoV抗原模拟表位,为后续NoV治疗性单抗的研制和中和抗原表位的深入研究奠定基础。研究方法1.人源噬菌体抗体库的构建用密度梯度离心法从外周血中分离得到PBMC,提取总RNA并逆转录为cDNA,PCR扩增抗体重轻链可变区片段,重叠延伸PCR构建scFv,并克隆至噬菌体质粒pCANTAB-5E,构建人源噬菌体单链抗体库,以菌落PCR和DNA测序鉴定抗体库的重组率和多样性。2.人源NoV噬菌体抗体库的淘选以NoVP蛋白为固相抗原,用甘氨酸-盐酸洗脱法对噬菌体抗体库进行4轮生物淘选,获得特异性抗NoV单链抗体,并用Phage-ELISA鉴定其特异性。3.人源NoV单链抗体的制备与生物学特性鉴定以淘选所得阳性噬菌体上清为模板,扩增scFv片段,构建重组表达质粒,并经原核表达系统表达,用GST-resin亲和层析柱进行分离纯化,ELISA鉴定scFv抗体的特异性和中和性。***抗原模拟表位的初步鉴定用噬菌体展示技术,以人源NoV单链抗体为靶蛋白,对噬菌体随机12肽库进行3轮生物淘选,Phage-ELISA鉴定噬菌体的特异性,ELISA鉴定其与NoVP蛋白的竞争抑制作用,经测序获得抗原模拟表位的氨基酸序列。研究结果1.人源噬菌体抗体库的构建成功构建初级人源噬菌体单链抗体库,库容约8.8×106PFU/mL,该库重组率和多样性均良好。2.人源NoV噬菌体抗体库的淘选噬菌体抗体库经淘选后,有效富集了特异性单链抗体,成功获得10株与NoV P蛋白具有良好亲和力的噬菌体单链抗体。3.人源NoV单链抗体的制备与生物学特性鉴定用原核表达系统成功制备人源NoV单链抗体,10株scFv抗体均能特异性结合GII.4/GII.6/GII.17NoV P蛋白,且这10株抗体对GII.4毒株与HBGA受体的结合均有强阻断作用,有5株对GII.6具有较强的阻断能力,4株对GII.17有一定的阻断作用。***抗原模拟表位的初步鉴定用噬菌体展示技术初步鉴定NoV抗原模拟表位,得到27条与scFv抗体有高亲和力、与NoV P蛋白具有竞争抑制作用的多肽序列,且发现了 2条共有序列MGLDLWENFQVL和FHWPSYYLTPWV,包含3段高同源性的短肽WXXPXY、YXXXXXXXLXPXXWV 和 MGXDXW,提示它们模拟了 NoV 与scFv抗体结合的抗原表位。研究结论1.利用一起GII.6 NoV暴发感染者恢复期PBMC成功构建人源噬菌体单链抗体库,淘选获得特异性抗NoV噬菌体单链抗体。2.利用原核表达系统成功制备10株与GII.4/GII.6/GII.17 NoV P蛋白均具有良好反应性的全人源NoV单链抗体,且对这3株毒株与HBGA受体的结合均有不同强度的阻断作用。3.利用噬菌体展示技术初步鉴定NoV抗原模拟表位,发现了 2条共有序列,与NoV单链抗体具有高亲和力、且与NoVP蛋白有竞争抑制作用。经比对后,发现了 2段与GII.4/GII.6/GII.17NoVVP1区有高同源性的氨基酸序列:WXXPXY和YXXXXXXXLXPXXWV,可能是不同NoV毒株共同的抗原构象表位;此外,亦发现1段与GII.6VP1区同源性较高的氨基酸序列:MGXDXW,在402-407残基之间,提示其为GII.6 NoV的特异性抗原模拟表位。

关键词：诺如病毒噬菌体抗体库人源单链抗体中和抗体抗原模拟表位

人CD55抗原模拟表位的筛选及其对乳腺癌细胞的抑瘤作用研究

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人CD55抗原模拟表位的筛选及其对乳腺癌细胞的抑瘤作用研究

作者：殷启风青岛大学

学位级别：硕士

目的:利用噬菌体肽库展示技术从Ph.D.12噬菌体肽库中筛选能够和人CD55单克隆抗体(CD55 Mc Ab)特异性结合的短肽,从中找到CD55的抗原模拟表位,设计出与人肿瘤免疫逃逸蛋白CD55同源的的短肽,为肿瘤治疗奠定理论基础。方法:以人CD55单克隆... 详细信息

目的:利用噬菌体肽库展示技术从Ph.D.12噬菌体肽库中筛选能够和人CD55单克隆抗体(CD55 Mc Ab)特异性结合的短肽,从中找到CD55的抗原模拟表位,设计出与人肿瘤免疫逃逸蛋白CD55同源的的短肽,为肿瘤治疗奠定理论基础。方法:以人CD55单克隆抗体为靶标,Ph.D.12肽库通过4轮噬菌体筛选淘选出与CD55单克隆抗体特异性结合的短肽,计算每轮回收率。4轮筛选后,随机挑选11个噬菌体单克隆和野生型噬菌体进行竞争结合,计算其结合力。利用ELISA、竞争结合实验鉴定筛选出结合力强的噬菌体单克隆,*** ER2378宿主菌表达和纯化噬菌体。将阳性噬菌体克隆交由公司测序,测序结果里找出出现频率高的短肽序列,设计与人CD55单克隆抗体具有高亲和性及特异性的短肽,并对其体外抗乳腺癌作用效果进行研究。CCK8实验检测CD55抗原模拟表位对乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7细胞)增殖的影响。荧光显微镜验证短肽在细胞中的摄入和分布。透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)和流式细胞术检测该短肽在乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞凋亡中的影响。结果:4轮筛选后,每轮噬菌体回收率都达到了较高数量级。竞争结合实验结果显示11个噬菌体单克隆和第3、4轮筛选后的噬菌体都与CD55单克隆抗体亲和力都非常显著。ELISA结果显示有8个噬菌体单克隆和CD55单克隆抗体亲和力显著。根据测序结果得到两条高表达短肽序列HAHTPTRGVMHA(简称H肽)和QVNGLGERSQQM(简称Q肽)。CCK8实验证明Q短肽序列对乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的毒性作用显著且具有剂量依赖性,而H短肽较Q肽药效较差,达到相同抑瘤率所需作用浓度较高。荧光显微镜观察到Q短肽分布在细胞膜表面。透射电镜和流式细胞术显示Q短肽具有诱导MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡的作用。结论:利用噬菌体随机12肽库成功得到两条CD55单克隆抗体特异性结合的CD55抗原模拟表位短肽序列HAHTPTRGVMHA和QVNGLGERSQQM,其中Q肽比H肽作用更显著,能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,为乳腺癌靶向治疗提供新思路和新靶标。

关键词： CD55 抗原模拟表位噬菌体展示乳腺癌细胞凋亡

从随机多肽库中筛选日本血吸虫抗原模拟表位诱导保护性免疫的研究

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中国热带医学 2002年第2期2卷 132-135页

作者：欧阳理王庆林曾宪芳周金春易新元中南大学湘雅医学院血吸虫病研究室长沙市410078

目的　从噬菌体随机肽库中筛选出能模拟日本血吸虫抗原表位的短肽分子 ,并测定其作为疫苗候选分子的潜能。方法　分别用正常及感染日本血吸虫的东方田鼠血清筛选在丝状噬菌体表面表达的随机十二肽库。经三轮亲和筛选后 ,随机挑取噬菌体... 详细信息

目的　从噬菌体随机肽库中筛选出能模拟日本血吸虫抗原表位的短肽分子 ,并测定其作为疫苗候选分子的潜能。方法　分别用正常及感染日本血吸虫的东方田鼠血清筛选在丝状噬菌体表面表达的随机十二肽库。经三轮亲和筛选后 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其与日本血吸虫抗血清的反应。用混合噬菌体免疫小鼠并进行攻击感染。结果　随机挑取的 12个克隆中 ,感染东方田鼠血清来源的噬菌体有 10个克隆为阳性 ,正常血清来源的噬菌体有 7个克隆为阳性。用感染东方田鼠血清筛到的噬菌体免疫小鼠诱导了部分保护作用 ( 2 2 .6 %)及较高的肝卵减少率 ( 6 8.9%)。然而 ,正常东方田鼠血清筛到的噬菌体没有保护效果。结论　感染及正常东方田鼠血清筛到的模拟表位具有免疫原性 ,提示随机肽库技术在日本血吸虫疫苗研制中有其潜在价值。

关键词：抗原模拟表位肽库日本血吸虫东方田鼠疫苗日本血吸虫病

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从噬菌体肽库中筛选抗原模拟表位的研究进展

国外医学（皮肤性病学分册） 2004年第6期30卷 390-392页

作者：黄丽群郑捷上海第二医科大学附属瑞金医院皮肤科 200025

大部分功能重要的抗体都可以识别抗原的构象表位 ,而噬菌体肽库技术最大的应用前景就是可以得到模拟抗原表位结构和化学特征的小肽分子 ,通过这些模拟表位不仅可以寻找、发现血清中的特异抗体 ,用于研究疾病的病因与发病机制以及特异性... 详细信息

大部分功能重要的抗体都可以识别抗原的构象表位 ,而噬菌体肽库技术最大的应用前景就是可以得到模拟抗原表位结构和化学特征的小肽分子 ,通过这些模拟表位不仅可以寻找、发现血清中的特异抗体 ,用于研究疾病的病因与发病机制以及特异性地诊断疾病 ;而且还可以替代抗原诱导抗体产生 ,达到治疗疾病的目的 ;

关键词：噬菌体肽库抗原模拟表位诊断治疗抗体产生疾病研究进展构象筛选分子