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颗粒化重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其抗原性与免疫原性

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生物工程学报 2004年第2期20卷 262-268页

作者：何志强张军李少伟林鉴刘如石陈毅歆王颖彬夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005

过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋... 详细信息

过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋白HEV 2 3 9在体外可以形成颗粒性抗原。HEV 2 3 9抗原颗粒与戊肝患者血清反应性良好 ,对中和性单克隆抗体 8C11的反应性与NE2抗原相当 ,而对另一中和性单克隆抗体 8H3的反应性较NE2抗原有显著提高 ,表明HEV 2 3 9抗原颗粒具有比NE2更好的抗原性。纯化后的HEV 2 3 9抗原颗粒直径约为 15～3 0nm。铝佐剂吸附的HEV 2 3 9免疫Balb c小鼠的半数有效剂量 (ED5 0 )在 0 0 8～ 0 2 5μg之间 ,而同样以铝佐剂吸附的NE2抗原 60 μg剂量免疫的抗体阳转率仅 2 5% ,表明HEV 2 3

关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白疫苗颗粒性抗原原核表达抗原性免疫原性

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艰难梭菌毒素A的可溶性表达及抗原性分析

微生物学免疫学进展 2022年第5期50卷 40-44页

作者：王建霞陈晓玲李可可夏斌周跃辉孔迪王芮杨彦霖苑庆华天津喜诺生物医药有限公司试剂研发部天津300380

目的实现艰难梭菌(Clostridioides difficile,***)毒素A(toxin A, TcdA)的可溶性表达并鉴定其抗原特异性。方法使用生物信息学软件对TcdA受体结合域进行B细胞表位分析,选择优势抗原表位区段进行基因合成。将合成的基因连接到表达载体p... 详细信息

目的实现艰难梭菌(Clostridioides difficile,***)毒素A(toxin A, TcdA)的可溶性表达并鉴定其抗原特异性。方法使用生物信息学软件对TcdA受体结合域进行B细胞表位分析,选择优势抗原表位区段进行基因合成。将合成的基因连接到表达载体pET-28a和pET-32a中,构建重组质粒pET-28a/TcdA和pET-32a/TcdA,转化到BL21(DE3)感受态细胞中进行表达,并对诱导温度进行优化。采用镍柱纯化融合蛋白,然后用肠激酶酶切获得目的蛋白。最后使用艰难梭菌检测试剂盒检测蛋白的抗原性。结果选择TcdA受体结合区域优势抗原表位区段2 231~2 708 aa进行表达。成功表达pET-28a/TcdA和pET-32a/Trx-TcdA重组蛋白。其中pET-28a/TcdA为包涵体形式。pET-32a/Trx-TcdA实现了部分可溶性表达,并且优化诱导温度(18℃)后,可溶性表达量进一步提高。表达的pET-32a/Trx-TcdA融合蛋白纯度较好,产量约为4.5 mg/L,经酶切后获得几乎没有冗余氨基酸的TcdA。经检测,TcdA蛋白能被相应的抗体特异性识别。结论实现了TcdA蛋白可溶性表达且有很好的抗原性,可用于后续抗体制备,为建立艰难梭菌感染免疫学检测方法奠定了基础。

关键词：艰难梭菌毒素A 抗原表位原核表达硫氧还蛋白蛋白纯化肠激酶抗原性

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超声处理对牛乳酪蛋白结构及抗原性的影响

食品科学 2019年第23期40卷 123-129页

作者：薛海燕操歌贺宝元樊娇娇薛丽欢陕西科技大学食品与生物工程学院陕西西安710021 陕西科技大学轻工科学与工程学院陕西西安710021

利用超声波处理牛乳致敏蛋白α-酪蛋白(casein,CN)和β-CN,结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、圆二色光谱、荧光光谱及酶联免疫吸附测定等方法分析α-CN和β-CN结构和抗原性的变化。结果表明:随着超声波功率的增大,α-CN的分子质... 详细信息

利用超声波处理牛乳致敏蛋白α-酪蛋白(casein,CN)和β-CN,结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、圆二色光谱、荧光光谱及酶联免疫吸附测定等方法分析α-CN和β-CN结构和抗原性的变化。结果表明:随着超声波功率的增大,α-CN的分子质量无显著性变化,β-CN在600 W时发生聚集,两种酪蛋白羰基含量上升,自由巯基含量先下降后回升,在500 W时达到最低,疏水性则呈现与自由巯基含量相反的规律;二级结构中,α-螺旋结构经超声处理后其相对含量减少,无规卷曲相对含量随着超声功率先增加后降低,功率为500 W时相对含量最高,β-折叠的相对含量变化趋势则与无规卷曲相反,这表明超声波处理破坏了酪蛋白的高级结构;随着超声功率的增强,抗原性呈现先升高后降低的趋势,其中500 W时抗原性最高,与酪蛋白疏水性及无规卷曲结构相对含量呈正相关,与β-折叠结构的相对含量呈现负相关。超声处理酪蛋白在影响蛋白构象及结构的同时改变其抗原性,且抗原性与疏水性及无规卷曲相对含量相关。

关键词：牛乳酪蛋白超声波抗原性羰基巯基二级结构疏水性

还原协同加热处理对花生过敏原Ara h2结构及抗原性的影响

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食品科学 2017年第11期38卷 89-94页

作者：李坤连君朱瑾曾辛陈红兵吴志华南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学资源环境与化工学院江西南昌330047 南昌大学食品学院江西南昌330047 江西省儿童医院感染科江西南昌330006 江西省妇幼保健院临床实验室江西南昌330031 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

花生过敏能引起荨麻疹、呕吐甚至休克等症状,通常是终生性过敏。本研究运用加热处理、半胱氨酸还原对Ara h2进行单独和复合处理,采用圆二色谱、紫外扫描光谱、间接竞争酶联免疫吸附法分别检测蛋白加工前后的结构与抗原性变化。结果显示... 详细信息

花生过敏能引起荨麻疹、呕吐甚至休克等症状,通常是终生性过敏。本研究运用加热处理、半胱氨酸还原对Ara h2进行单独和复合处理,采用圆二色谱、紫外扫描光谱、间接竞争酶联免疫吸附法分别检测蛋白加工前后的结构与抗原性变化。结果显示,单一的加热和半胱氨酸还原处理过的蛋白结构与抗原性只发生部分变化。而复合处理中,在加热条件下,半胱氨酸还原蛋白的能力明显增强,还原后的蛋白二级结构与三级结构发生大幅变化,抗原性显著降低。研究结果表明,二硫键对于蛋白Ara h2结构稳定具有重要作用,二硫键被还原和加热过程破坏后,蛋白的抗原性和结构即发生重大变化。还原协同加热处理有望大幅改善2S球蛋白的结构和致敏性,可以作为蛋白脱敏加工的备选方法。

关键词：花生热加工 Ara h 2 二硫键结构抗原性

热加工方式对牛乳过敏原α_(s1)-酪蛋白二级结构和抗原性的影响

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乳业科学与技术 2022年第4期45卷 29-35页

作者：魏家祺周胜云丛艳君闫文杰北京工商大学食品与健康学院北京市食品营养与人类健康高精尖创新中心北京市食品添加剂工程技术研究中心北京100048 北京联合大学生物化学工程学院北京100023

为探究热加工方式对牛乳过敏原α_(s1)-酪蛋白构象和抗原性的影响,利用间接竞争酶联免疫吸附测定方法、免疫印迹方法分析不同加热条件下α_(s1)-酪蛋白免疫原性的变化,进而通过8-苯胺-1-萘磺酸荧光探针和圆二色谱分析其二级结构变化,初... 详细信息

为探究热加工方式对牛乳过敏原α_(s1)-酪蛋白构象和抗原性的影响,利用间接竞争酶联免疫吸附测定方法、免疫印迹方法分析不同加热条件下α_(s1)-酪蛋白免疫原性的变化,进而通过8-苯胺-1-萘磺酸荧光探针和圆二色谱分析其二级结构变化,初步揭示热处理调控过敏原α_(s1)-酪蛋白抗原性的机制。结果表明:在80℃、60 min,90℃、10 min,90℃、60 min条件下热处理后,α_(s1)-酪蛋白中α-螺旋结构含量显著低于未加热α_(s1)-酪蛋白,在70℃、20 min,80℃、20 min,90℃、20 min条件下热处理后,α_(s1)-酪蛋白中无规卷曲含量显著增加,70~100℃加热20 min条件下表面荧光强度最强,其他温度-时间条件下二级结构含量变化不显著;α_(s1)-酪蛋白构象的变化导致α_(s1)-酪蛋白的抗原性显著降低,间接竞争酶联免疫吸附测定显示,在70~100℃加热20 min条件下,α_(s1)-酪蛋白的抗原残留量均较高,而免疫印迹方法显示不同温度-时间条件下α_(s1)-酪蛋白仍具有免疫反应特性,建议进一步通过动物实验揭示热处理调控α_(s1)-酪蛋白抗原性的机制。

关键词： α_(s1)-酪蛋白过敏原热加工抗原性二级结构

抗体选择压作用下新城疫病毒HN和F基因的演化及其抗原性变异的比较分析

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病毒学报 2012年第5期28卷 489-495页

作者：何羽婷巩艳艳赵鹏崔治中山东农业大学动物医学院泰安271018

TZ060107株新城疫病毒(NDV)在含有对它抗体的鸡胚成纤维细胞(CEF)培养上分3个独立系列连传50代,每10代扩增其HN和F基因并测序。选择变异最大的系列A1-50病毒,再在含有抗A1-50抗体的CEF培养上分3个独立系列连续传50代,同时设3个不带抗体... 详细信息

TZ060107株新城疫病毒(NDV)在含有对它抗体的鸡胚成纤维细胞(CEF)培养上分3个独立系列连传50代,每10代扩增其HN和F基因并测序。选择变异最大的系列A1-50病毒,再在含有抗A1-50抗体的CEF培养上分3个独立系列连续传50代,同时设3个不带抗体的独立传代系列作为对照。对第60、70、80、90、100代病毒的HN和F基因序列比较结果显示,有抗体组HN基因的非同义突变(NS)对同义突变(S)比值NS/S为5.25,明显高于无抗体组NS/S的2.375。前50代在抗体选择压作用下已发生的稳定NS突变在含有抗A1-50抗体的细胞培养中传代仍能稳定保持,且又出现了一个新的稳定的NS突变位点。在有抗体组经传50代后F基因发生的稳定非同义突变,在抗A1-50血清作用下再连传50代后也仍然保持,且又出现3个新的稳定的NS突变。不同传代病毒与原始病毒间的血清交叉血球凝聚抑制试验结果表明,随着在含有抗NDV血清的细胞培养上传代代数的增加,病毒与原始病毒间在抗原性的差异越来越大。

关键词：新城疫病毒 HN基因 F基因免疫选择压抗原性

牛病毒性腹泻病毒NS3基因的序列分析、表达与抗原性鉴定

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生物工程学报 2010年第3期26卷 311-316页

作者：李岩聂明非魏伟温凯贾莹霍慧王君伟东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

本研究应用套式RT-PCR方法扩增出牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株编码NS3蛋白的基因,克隆至表达载体pET-30a(+),并进行测序。对瘟病毒属病毒NS3基因进行氨基酸差异性分析,显示平均P-distance为0.07,系统进化树分析表明VEDEVAC株隶属于BVDV1... 详细信息

本研究应用套式RT-PCR方法扩增出牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株编码NS3蛋白的基因,克隆至表达载体pET-30a(+),并进行测序。对瘟病毒属病毒NS3基因进行氨基酸差异性分析,显示平均P-distance为0.07,系统进化树分析表明VEDEVAC株隶属于BVDV1型。将构建成功的重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta(DE3),在IPTG诱导下表达NS3重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化和尿素梯度透析后进行反应原性鉴定。Western blotting结果显示表达的重组蛋白可以与牛病毒性腹泻病毒阳性血清反应,并与猪瘟阳性血清有交叉反应,ELISA结果显示该重组蛋白具有良好的反应原性。所获得的蛋白为建立针对NS3抗体的ELISA检测方法奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 NS3蛋白差异性分析进化树抗原性

西藏牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH基因的遗传进化、分子特征和抗原性分析

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高原农业 2023年第1期7卷 40-49页

作者：李义兴孟朝轶符汉宇王运路刘博华徐业芬包玉花牛家强索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室西藏林芝860000 西藏自治区兽医生物药品制造厂西藏拉萨850000

本研究旨在分析一株西藏牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH基因的遗传进化、分子特征和抗原性。从一株西藏牦牛源B型多杀性巴氏杆菌的全基因组测序中获得OmpH基因序列,对其核苷酸序列进行遗传进化分析,通过生物信息学软件在线对OmpH基因编码的... 详细信息

本研究旨在分析一株西藏牦牛源多杀性巴氏杆菌OmpH基因的遗传进化、分子特征和抗原性。从一株西藏牦牛源B型多杀性巴氏杆菌的全基因组测序中获得OmpH基因序列,对其核苷酸序列进行遗传进化分析,通过生物信息学软件在线对OmpH基因编码的氨基酸序列进行理论分子质量、理论等电点、亲水性和疏水性、跨膜结构、结构域、二、三级结构及抗原性分析。结果表明OmpH基因全长1002 bp,编码333个氨基酸;遗传进化分析发现,西藏牦牛源Pm的OmpH基因与新疆牦牛源的同源性最近。OmpH蛋白的分子特性分析发现该蛋白为亲水性蛋白,较为稳定,具有信号肽结构,所有序列均在膜外,无跨膜结构,属于分泌型蛋白,在PFAM数据库中存在Porin_1结构域及低复杂性区域;该蛋白的二、三级蛋白结构分析发现分子同源三聚体构成,其中无规则卷曲占比45.35%,结构较为稳定。抗原性分析OmpH蛋白的保护性抗原的总体预测为0.6945,高出正常阈值0.2945。OmpH具有抗原性的可能性较大,可作为免疫原性蛋白和多杀性巴氏杆菌疫苗的较佳候选抗原。

关键词：牦牛多杀性巴氏杆菌 OmpH基因遗传进化分子特征抗原性

非洲猪瘟病毒p35蛋白作为诊断抗原的抗原性比较

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生物工程学报 2021年第1期37卷 187-195页

作者：施磊田占成杨吉飞高闪电独军政赵亚茹刘志杰关贵全刘光远罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了筛选出酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)反应性最佳的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)诊断抗原,通过建立ELISA方法,以杆状病毒昆虫细胞表达系统表达的ASFV p30蛋白诊断抗原为参照,首次探... 详细信息

为了筛选出酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)反应性最佳的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)诊断抗原,通过建立ELISA方法,以杆状病毒昆虫细胞表达系统表达的ASFV p30蛋白诊断抗原为参照,首次探讨原核表达系统表达的ASFVp35蛋白作为诊断抗原的抗原性和潜力。免疫印迹和免疫荧光结果表明,获得了40 kDa的重组p35蛋白和30 kDa的p30蛋白,两种蛋白与ASFV阳性血清均具有较好的免疫反应原性。采用重组p30和p35蛋白作为诊断抗原分别建立ELISA方法,并验证其敏感性、稳定性以及与进口试剂盒的符合率。结果显示,尽管p35-ELISA方法的检测敏感性稍低于p30-ELISA方法,但其敏感性仍可达95.8%,且p35-ELISA方法和p30-ELISA方法的批内和批间变异系数均小于10%。p35-ELISA方法与进口试剂盒比较,符合率达97.2%。结果表明建立的p35-ELISA方法敏感性高且稳定性好,可应用于ASFV感染血清的检测。

关键词：非洲猪瘟病毒 p35蛋白 p30蛋白抗原性间接ELISA