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聚乙二醇修饰β-乳球蛋白羧基对其抗原性和结构的影响

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食品科学 2021年第24期42卷 16-23页

作者：罗舜菁吉莉熊绍百钟俊桢朱晓明江辛琳刘成梅南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 江西省辅食营养食品工程技术研究中心江西赣州341000

采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)羧基共价修饰,探究PEG修饰及PEG化程度对β-LG抗原性和结构的影响。结果表明:总修饰率为82.91%;使用SP Sepharose Fast Flow阳离子交换柱分离纯化,获得纯... 详细信息

采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)羧基共价修饰,探究PEG修饰及PEG化程度对β-LG抗原性和结构的影响。结果表明:总修饰率为82.91%;使用SP Sepharose Fast Flow阳离子交换柱分离纯化,获得纯度分别为99.66%和98.61%的两种主要修饰产物;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定产物分子质量分别为23.3 kDa和28.6 kDa,为单修饰产物(mono-PEG-β-LG)及两点修饰产物(di-PEG-β-LG)。β-LG、mono-PEG-β-LG和di-PEG-β-LG的间接竞争酶联免疫吸附测定半抑制浓度(IC50)分别为1.90、2.47μg/mL和10.41μg/mL;mono-PEG-β-LG和di-PEG-β-LG的IC50分别是β-LG的1.30倍和5.48倍,表明提高PEG修饰程度可极显著降低β-LG的抗原性。mono-PEG-β-LG和di-PEG-β-LG的游离巯基含量分别为42.70μmol/g和37.97μmol/g,表明PEG化程度增强,遮蔽作用增强。表面疏水性和内源荧光分析表明,mono-PEG-β-LG只发生了三级结构变化,而di-PEG-β-LG二级结构水平同时发生变化,表明PEG修饰后β-LG空间结构的改变可能是导致其构象表位破坏和抗原性下降的因素。PEG分子遮蔽可能是导致修饰产物抗原性降低的另一原因。PEG共价修饰β-LG可以显著降低后者的抗原性,且随PEG化程度增大β-LG抗原性降低幅度增加。

关键词： β-乳球蛋白聚乙二醇修饰抗原性结构变化

H_2O_2对红细胞抗原性与LPO影响的FCM研究

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生物化学与生物物理进展 1999年第3期26卷 254-258页

作者：符乃阳张尔贤汕头大学理学院生物学系

用流式细胞计（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）测定Ｈ２Ｏ２损伤后的红细胞（ＲＢＣ）与ＩｇＧ的结合能力，并直接检测细胞自发荧光的变化，以研究Ｈ２Ｏ２对ＲＢＣ抗原性和脂质过氧化（ＬＰＯ）荧光产物生成的影响．结果表明Ｒ... 详细信息

用流式细胞计（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）测定Ｈ２Ｏ２损伤后的红细胞（ＲＢＣ）与ＩｇＧ的结合能力，并直接检测细胞自发荧光的变化，以研究Ｈ２Ｏ２对ＲＢＣ抗原性和脂质过氧化（ＬＰＯ）荧光产物生成的影响．结果表明ＲＢＣ抗原性和自发荧光变化与Ｈ２Ｏ２浓度和作用时间有关，抗原性变化对Ｈ２Ｏ２更敏感，比引起自发荧光明显增强所需Ｈ２Ｏ２浓度低两个数量级；

关键词：红细胞活性氧细胞膜损伤流式细胞计抗原性

花生致敏蛋白Ara h1与咖啡酸互作对其抗原性的影响

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农业工程学报 2022年第8期38卷 288-296页

作者：任红涛石奇磊李静余秋颖王凡胡梅王娜河南农业大学食品科学技术学院郑州450002 郑州市营养与健康食品重点实验室郑州450002 国际动物免疫学联合研究中心郑州450002 农业农村部大宗粮食加工重点实验室郑州450002 河南农业大学动物医学院郑州450002

为探寻适宜的花生脱敏方法,该文研究了花生致敏蛋白Ara h1与咖啡酸互作对其抗原性的影响,利用荧光光谱、紫外光谱和间接ELISA法对碱法、酶法、自由基法处理后的咖啡酸蛋白复合物抗原性变化进行了分析,并对碱法互作反应温度、反应时间、p... 详细信息

为探寻适宜的花生脱敏方法,该文研究了花生致敏蛋白Ara h1与咖啡酸互作对其抗原性的影响,利用荧光光谱、紫外光谱和间接ELISA法对碱法、酶法、自由基法处理后的咖啡酸蛋白复合物抗原性变化进行了分析,并对碱法互作反应温度、反应时间、pH值、咖啡酸浓度进行优化。结果表明:在温度33.2℃、时间25 h、pH值8.67和咖啡酸浓度1.76 mg/mL时,咖啡酸与花生致敏蛋白Ara h1碱法互作后其抗原性降至69.31%,接枝量为119.16 nmol/mg。碱法处理后,咖啡酸与花生致敏蛋白Ara h1互作能降低致敏蛋白抗原性,研究结果可为花生脱敏处理提供参考。

关键词：蛋白优化花生致敏蛋白Ara h1 抗原性咖啡酸

蛋白质打开方式对乳清蛋白酶法交联及抗原性的影响

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中国食品学报 2020年第9期20卷 53-58页

作者：于鑫欣刘畅赵昀晗徐晓娟刘之容张英华东北农业大学乳品科学教育部重点实验室哈尔滨150030

为探究蛋白质打开方式对乳清蛋白抗原性及酶法交联程度的影响,采用加热或半胱氨酸处理使乳清蛋白分子结构打开。乳清蛋白改性后经转谷氨酰胺酶(TGase)交联,将改性后交联产物和直接与TGase交联的产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分... 详细信息

为探究蛋白质打开方式对乳清蛋白抗原性及酶法交联程度的影响,采用加热或半胱氨酸处理使乳清蛋白分子结构打开。乳清蛋白改性后经转谷氨酰胺酶(TGase)交联,将改性后交联产物和直接与TGase交联的产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其分子质量。应用间接竞争酶联免疫方法检测其抗原性,并测定乳清蛋白及其改性产物的疏水性。试验结果表明,热处理乳清蛋白改性产物的固有荧光性及表面疏水性比半胱氨酸改性产物高。SDS-PAGE结果表明,半胱氨酸改性乳清蛋白比加热改性得到的交联产物更多。抗原性分析表明:半胱氨酸改性比加热处理更能显著降低乳清蛋白的抗原性,抗原性下降在30%以上。

关键词：乳清蛋白热处理抗原性转谷氨酰胺酶交联半胱氨酸

β-乳球蛋白聚乙二醇定点修饰物的制备及其抗原性变化

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食品科学 2021年第2期42卷 1-7页

作者：刘成梅江辛琳李冬梅周磊钟俊桢吉莉罗舜菁南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 江西丹霞生物科技股份有限公司江西鹰潭335200

为探究不同共价修饰位点对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)抗原性影响,采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)定点修饰技术对β-LG第121位半胱氨酸(Cys121)游离巯基进行修饰。通过单因素试验优化,得到最佳修饰条件:β-LG与mPEG-MA... 详细信息

为探究不同共价修饰位点对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)抗原性影响,采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)定点修饰技术对β-LG第121位半胱氨酸(Cys121)游离巯基进行修饰。通过单因素试验优化,得到最佳修饰条件:β-LG与mPEG-MAL物质的量比1∶30,在0.1 mol/L,pH 7.0的磷酸钠缓冲液(含3倍物质的量的TCEP,25%乙醇及2 mmol/L EDTA)中4℃反应24 h。使用优化条件制备产物修饰率达64.1%,分离纯化后产物纯度达94%。游离巯基含量测定结果显示修饰后β-LG游离巯基含量由52.3 μmol/g降为0.3μmol/g。经验证mPEG-MAL与β-LG Cys121游离巯基发生特异性结合。经巯基定点修饰后,β-LG-MAL较天然β-LG抗原性显著提升25.9%,巯基修饰与前期不同位点修饰抗原性结果相反,定点修饰能有效探究不同位点共价修饰对蛋白抗原性的影响。

关键词： β-乳球蛋白聚乙二醇共价修饰定点修饰抗原性

加工方式对发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性的影响

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中国食品学报 2021年第3期21卷 138-145页

作者：王娜孟利军黄忠民艾志录李娜张改平农业农村部动物免疫学重点实验室郑州450002 河南农业大学食品科学技术学院郑州450002 河南农业大学动物医学院郑州450002 农业农村部大宗粮食加工重点实验室郑州450002 郑州市营养与健康食品实验室郑州450002

本文研究了加工方式对发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性的影响。利用SDS-PAGE和双抗体夹心法ELISA研究热加工(热蒸、烘烤、微波、高温高压)、冷处理(液氮、速冻机速冻)和非热加工(静态超高压、辐照、脉冲强光、臭氧和超声波)对发酵面团中... 详细信息

本文研究了加工方式对发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性的影响。利用SDS-PAGE和双抗体夹心法ELISA研究热加工(热蒸、烘烤、微波、高温高压)、冷处理(液氮、速冻机速冻)和非热加工(静态超高压、辐照、脉冲强光、臭氧和超声波)对发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性的影响。结果表明:100 MPa超高压处理时,发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性显著增加(P抗原性(P抗原性没有发生显著变化(P>0.05)。这说明适当的加工方式可作为食物过敏安全控制的有效手段,可为脱敏食品的生产提供有效参考。

关键词：加工发酵面团小麦醇溶蛋白抗原性

大豆蛋白-葡萄糖复合物的抗原性及结构特性研究

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现代食品科技 2014年第11期30卷 28-33页

作者：布冠好朱婷伟陈复生河南工业大学粮油食品学院河南郑州450001

大豆是优质的植物蛋白资源,同时也是八大食物过敏原之一;糖基化改性是降低蛋白质过敏原的有效方法之一。本文以大豆分离蛋白和葡萄糖为原料,在蛋白与糖不同质量比、不同温度、不同时间条件下进行美拉德反应,制取糖基化复合物;并以β-伴... 详细信息

大豆是优质的植物蛋白资源,同时也是八大食物过敏原之一;糖基化改性是降低蛋白质过敏原的有效方法之一。本文以大豆分离蛋白和葡萄糖为原料,在蛋白与糖不同质量比、不同温度、不同时间条件下进行美拉德反应,制取糖基化复合物;并以β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为指标,采用间接竞争ELISA方法检测糖基化复合物抗原性的变化。发现在温度55℃、蛋白与糖比例为3:1时,制备的糖基化复合物抗原性较低;当反应时间为72 h时,抗原抑制率从93.54%降低到22.58%。同时,通过三硝基苯磺酸(TNBS)法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证明了美拉德反应的发生;紫外光扫描、傅里叶红外光谱分析等方法研究了蛋白质结构的变化。这些基础研究可能为探究糖基化修饰对抗原性影响的作用机理、开发低敏性大豆蛋白制品提供研究方法和理论依据。

关键词：大豆分离蛋白葡萄糖糖基化抗原性结构特性

大豆蛋白-木糖复合物的抗原性、致敏性及结构特性研究

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现代食品科技 2015年第11期31卷 33-38,91页

作者：布冠好张楠陈复生河南工业大学粮油食品学院河南郑州450001

大豆是营养丰富的植物蛋白资源,但也是八大过敏原之一;糖基化修饰是一种降低食物过敏原的有效方法。本文将木糖通过糖基化的方法引入大豆分离蛋白制备大豆分离蛋白-木糖复合物,采用间接竞争ELISA法,测定在一定温度、一定质量比、不同反... 详细信息

大豆是营养丰富的植物蛋白资源,但也是八大过敏原之一;糖基化修饰是一种降低食物过敏原的有效方法。本文将木糖通过糖基化的方法引入大豆分离蛋白制备大豆分离蛋白-木糖复合物,采用间接竞争ELISA法,测定在一定温度、一定质量比、不同反应时间条件下,大豆分离蛋白-木糖复合物中大豆球蛋白的抗原性和过敏原性的变化,并且对糖基化产物进行了结构特性的研究。结果表明,糖基化能有效降低大豆球蛋白的抗原性和过敏原性,其抗原性从83.01%降到67.43%;过敏原性从46.32%降低到29.48%;两者在反应10 h时免疫活性都较低。通过三硝基苯磺酸(TNBS)法、SDS-PAGE电泳证明了糖基化反应的发生;傅里叶红外光谱结果表明,与大豆分离蛋白相比,SPI-木糖糖基化产物的α-螺旋、β-转角的含量下降,而无规卷曲、β-折叠的含量增加。

关键词：大豆分离蛋白木糖糖基化抗原性过敏原性

糖基化反应对大豆蛋白-乳糖复合物抗原性及结构的影响

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现代食品科技 2015年第8期31卷 117-121 272,272页

作者：张楠布冠好朱婷伟陈复生河南工业大学粮油食品学院河南郑州450001

本文将乳糖通过糖基化反应引入到大豆分离蛋白(SPI)上制备大豆分离蛋白-乳糖复合物,采用间接竞争ELISA法测定不同温度、不同质量比、不同反应时间下大豆分离蛋白-乳糖复合物中β-伴大豆球蛋白的抗原性变化,并对糖基化产物进行了结构特... 详细信息

本文将乳糖通过糖基化反应引入到大豆分离蛋白(SPI)上制备大豆分离蛋白-乳糖复合物,采用间接竞争ELISA法测定不同温度、不同质量比、不同反应时间下大豆分离蛋白-乳糖复合物中β-伴大豆球蛋白的抗原性变化,并对糖基化产物进行了结构特性的研究。结果表明,糖基化能有效降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,其抗原性从93.79%降到37.75%。糖基化改性后,大豆蛋白中游离氨基含量降低,在反应60 h时,游离氨基含量下降最大;傅里叶红外光谱结果表明,与原大豆分离蛋白相比,大豆分离蛋白-乳糖糖基化产物的α-螺旋、β-转角、无规卷曲的含量下降,而β-折叠的含量增加;SDS-PAGE电泳及PAS染色结果表明,随着糖基化反应的程度增加,SPI谱带逐渐的减弱,说明SPI与乳糖分子发生了共价连接。

关键词：大豆分离蛋白乳糖糖基化抗原性结构特性