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抗人B7-H4嵌合抗体的制备及鉴定

中国免疫学杂志 2022年第22期38卷 2763-2769页

作者：范振军张文婷张丽张俊爱赵祖国徐军发(指导) 广东医科大学医学技术学院检验医学研究所东莞523808 广东医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室东莞523808

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测... 详细信息

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测mAb纯度;ELISA测定mAb效价;SPR测定mAb的亲和力;BCA法检测mAb浓度;CCK-8法检测T细胞增殖情况;ELISA和Western blot确定mAb结合表位范围;使用Discovery Studio软件对单抗表位进行分析。结果:从杂交瘤细胞成功扩增出抗体可变区基因,筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO-K1细胞株;细胞培养上清中mAB浓度为1.82 mg/ml,ELISA有效效价为1.97×10^(5)左右,亲和力为3.72×10^(-9)kD;CCK-8结果表明嵌合单抗可以阻断B7-H4-Fc分子对T细胞增殖的抑制作用;表位分析结果表明嵌合mAb主要以氢键和疏水作用与B7-H4 IgC域结合。结论:本研究成功制备了抗B7-H4的人鼠嵌合单抗,可在体外有效地阻断B7-H4-Fc对T细胞增殖抑制作用并为B7-H4抗体药物研发提供了前期基础。

关键词： B7-H4 嵌合抗体抗体表位 T细胞增殖

抗乙型肝炎病毒S抗原全人单克隆抗体的制备和表位探究

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中国免疫学杂志 2018年第7期34卷 1029-1033页

作者：佀传亚潘少坤凌志洋伊春艳邓志瑞谢幼华孙兵上海大学生命科学学院上海200444 复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032 中国科学院上海巴斯德研究所上海200031 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

目的:针对乙型肝炎病毒S蛋白,制备全人单克隆抗体,对其亲和力、中和病毒活性及抗体所结合的抗原表位进行研究。所制备的全人抗体可应用于乙肝病毒的暴露后预防,为阻断母婴传播提供治疗手段。方法:通过流式分选和单细胞RT-PCR技术获得单... 详细信息

目的:针对乙型肝炎病毒S蛋白,制备全人单克隆抗体,对其亲和力、中和病毒活性及抗体所结合的抗原表位进行研究。所制备的全人抗体可应用于乙肝病毒的暴露后预防,为阻断母婴传播提供治疗手段。方法:通过流式分选和单细胞RT-PCR技术获得单克隆抗体;利用间接ELISA法检测抗体结合活性,进行表位分析;Hep G2-NTCP细胞用于病毒感染,KHB乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒检测细胞上清中HBe Ag的指标。结果:获得三株具有中和活性,可以结合三种乙肝病毒亚型S蛋白的抗体,其中1F2、2A1两株抗体的结合依赖于抗原蛋白的天然构象,2H2抗体的结合依赖于连续的氨基酸序列;1F2、2H2抗体结合的位置位于S蛋白胞外区第一个免疫环状区域。结论:利用单细胞RT-PCR技术成功制备了针对乙肝病毒S蛋白的抗体,其具有中和作用。抗原表位位于S蛋白胞外区的第一个免疫环状区域内。

关键词：乙型肝炎全人单克隆抗体单细胞RT-PCR 中和活性抗体表位

利用生物信息学技术对肿瘤微环境中差异表达基因及ALK激酶耐药和OPN表位确定初步研究

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利用生物信息学技术对肿瘤微环境中差异表达基因及ALK激酶耐药和O...

作者：王玺婷江苏大学

学位级别：硕士

生物信息学是21世纪生命科学及医学领域的一项极为重要的技术,随着计算机技术、信息技术、生物学技术的发展及相互间融合,生物信息学越来越受到关注。目前,生物信息学可以分别从基因,蛋白等不同水平对生物学事件进行系统分析和详细研究... 详细信息

生物信息学是21世纪生命科学及医学领域的一项极为重要的技术,随着计算机技术、信息技术、生物学技术的发展及相互间融合,生物信息学越来越受到关注。目前,生物信息学可以分别从基因,蛋白等不同水平对生物学事件进行系统分析和详细研究,并为生物学、医学、药学等领域的发展提供了更为广阔的思路。在研究中,我们通过生物信息学技术分析急性髓系白血病和正常组织芯片数据,再结合文献挖掘等方法对差异基因及其蛋白间相互作用进行分析,最后再利用分子生物学实验对差异表达基因进行功能验证。从急性髓系白血病和癌旁组织芯片数据筛选到了190个差异基因。交叉网络分析筛选出关键基因NDUFA4（NADH dehydrogenase 1 alpha subcomplex subunit 4）、UQCRQ（Ubiquinol-cytochrome c reductase）、COX7A2（Cytochrome c oxidase polypeptide 7A2）基因。功能富集分析证明差异表达基因主要与PI3K-AKT信号通路有关。实验结果表明在PI3K信号通路过程中,NDUFA4是影响急性髓系白血病增殖的关键基因。从而为急性髓系白血病的分子机制并为其早期诊断和靶向治疗提供新的思路。通过生物信息学技术对ALK激酶（anaplasticlymphoma kinase,ALK）耐药机制进行研究。首先通过分子动力学模拟,发现因其F1174C突变破坏了野生型ALK-ceritinib复合体中残基F1098,F1174,F1245以及F1271间的π对网络的形成。并进一步影响了P-环构象的动态变化,导致ATP结合位点P-环的结构上移。随后MM/GBSA结合自由能计算和结合自由能分解分析则进一步验证F1174C突变确实导致ceritinib与ALK结合能力减弱。本研究通过研究F1174C抗性突变所引发的变构效应的机制,并将有助于设计下一代ALK抑制剂。通过生物信息学技术为抗体表位的筛选提供新的方案。首先分别对骨桥蛋白（osteopontin,OPN）蛋白抗体和抗原进行模建,再通过分子动力学软件进行优化和确定关键肽段,在此基础上,理论模拟抗体与抗原肽的作用模式及评估它们之间的作用能,确定可能表位。最后经实验验证,我们设计的抗体表位确定理论预测方法在OPN抗体表位的确定中取得成功。为计算机辅助抗体表位的鉴定提供了新的思路。

关键词：生物信息学急性髓系白血病分子动力学模拟耐药机制抗体表位

丙型肝炎病毒E2蛋白HVR1在体液免疫应答中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第8期29卷 714-715页

作者：乐爱平陈志辉童一民邵圣文南昌大学第一附属医院输血科 330006 第二军医大学长海医院感染科第二军医大学微生物学教研室湖州师范学院医学院创新实验室

丙型肝炎病毒（HCV）感染是肝硬化、肝癌的高危险因素，目前尚无HCV疫苗上市。HCV包膜E2蛋白能诱导机体产生中和抗体，是重要的候选疫苗成分。E2蛋白氨基末端由27个氨基酸残基组成的高变区1（hypervariable region1，HVR1）含有多个线... 详细信息

丙型肝炎病毒（HCV）感染是肝硬化、肝癌的高危险因素，目前尚无HCV疫苗上市。HCV包膜E2蛋白能诱导机体产生中和抗体，是重要的候选疫苗成分。E2蛋白氨基末端由27个氨基酸残基组成的高变区1（hypervariable region1，HVR1）含有多个线性中和抗体表位，变异频率极高，增加了HCV疫苗研制的难度。近年发现，除了HVR1含有中和抗体表位外，E2蛋白还存在其他的保守空间构象和线性中和抗体表位心。本研究构建了羧基端截短的含有HVR1和缺失HVR1的E2蛋白真核表达质粒，以之免疫小鼠，分析HVR1在E2蛋白诱导的小鼠体液免疫应答中的作用。

关键词：体液免疫应答丙型肝炎病毒 E2蛋白 HVR1 HCV疫苗氨基酸残基抗体表位真核表达质粒

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肾移植受者抗体表位分析(附63例报告)

肾脏病与透析肾移植杂志 2002年第4期11卷 319-322页

作者：袁小鹏焦伟华姜松李杰高伟广东省东莞市太平人民医院血液净化器官移植科东莞523905

目的 :探讨致敏肾移植受者的抗体表位分析和氨基酸残基配型方案。　方法 :采用ELISA法对 6 3例致敏肾移植受者进行抗体特异性分析 ,指定可能的抗体表位。　结果 :5 0 8% (32 /6 3)的致敏受者 [群体反应性抗体 (PRA) >10 % ]和 88 9% ... 详细信息

目的 :探讨致敏肾移植受者的抗体表位分析和氨基酸残基配型方案。　方法 :采用ELISA法对 6 3例致敏肾移植受者进行抗体特异性分析 ,指定可能的抗体表位。　结果 :5 0 8% (32 /6 3)的致敏受者 [群体反应性抗体 (PRA) >10 % ]和 88 9% (2 4 /2 7)的高敏受者 (PRA >5 0 % )具有可指定的抗体公共表位 ;最常见的公共表位是 :16 3E ,14 2 - 14 5TTKH ,16 3R ,6 2 - 6 6RNTRN。　结论 :部分致敏受者的组织相容性抗原 (HLA)抗体产生有明显的规律 ,对少数高频率高免疫原性氨基酸残基的致敏是高度致敏受者致敏的主要原因 ,对供 -受者作氨基酸残基配型能有效地避开PRA。

关键词：肾移植群体反应性抗体抗体表位氨基酸残基