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抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因在CHO细胞中的表达

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中国生物制品学杂志 2005年第5期18卷 368-370,374页

作者：何太平聂艳桃葛永红谢荣麟袁涛王琰 Vesna Galvani Vladka Curin Serbec 成都生物制品研究所成都610023 北京海军总医院北京100037 斯洛文尼亚输血中心

目的构建抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因,并在CHO细胞中表达。方法采用RT-PCR及RACE技术从鼠杂交瘤细胞克隆免疫球蛋白可变区基因,与人免疫球蛋白恒区基因拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因,转染CHO细胞并测定其表达量。结果构建的嵌合抗体基因... 详细信息

目的构建抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因,并在CHO细胞中表达。方法采用RT-PCR及RACE技术从鼠杂交瘤细胞克隆免疫球蛋白可变区基因,与人免疫球蛋白恒区基因拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因,转染CHO细胞并测定其表达量。结果构建的嵌合抗体基因在CHO细胞中的初始表达量为0.71μg/ml,亚克隆后表达量达0.95μg/ml。结论已成功构建抗人TNF-α嵌合抗体基因,并在CHO细胞中得到了高效表达。

关键词：肿瘤坏死因子嵌合抗体 CHO细胞表达抗体基因 TNF-α 嵌合人免疫球蛋白鼠 RACE技术

抗体基因的装配——抗体基因的装配需要一系列完全协调的基因重排,以增加基因产物的多样性

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动物医学进展 1983年第1期 45-48页

作者：李健强

高等生物体的基因组具有很大潜在的易变性。这是因为大多数基因以碎片的形式存在。过去几年的研究表明,通过组合分开的 DNA 段片把单个基因装配起来就可以解释众多的抗体的多样性。哺乳动物基因组何以能包含需要产生一百万左右不同的抗... 详细信息

高等生物体的基因组具有很大潜在的易变性。这是因为大多数基因以碎片的形式存在。过去几年的研究表明,通过组合分开的 DNA 段片把单个基因装配起来就可以解释众多的抗体的多样性。哺乳动物基因组何以能包含需要产生一百万左右不同的抗体信息这样免疫学上重要的问题?许多新近的研究对解决这些问题是有帮助的。Leder 氏说,“建造一个小鼠或人

关键词：可变区基因种系编码 DNA 恒定区段片基因重排抗体基因基因产物

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抗体基因工程——重组抗体

细胞与分子免疫学杂志 1988年第3期 4-8页

作者：洪锦心上海市肿瘤研究所

七十年代中杂交瘤单克隆抗体问世以来,在医学和生物学的研究及临床应用中,单克隆抗体己越来越显示它的重要性。但是,目前能应用的单克隆抗体(McAb)大多是鼠-鼠杂交瘤,抗体是属鼠的免疫球蛋白(Ig),在进入人体后能激发抗异种蛋白的反应。... 详细信息

七十年代中杂交瘤单克隆抗体问世以来,在医学和生物学的研究及临床应用中,单克隆抗体己越来越显示它的重要性。但是,目前能应用的单克隆抗体(McAb)大多是鼠-鼠杂交瘤,抗体是属鼠的免疫球蛋白(Ig),在进入人体后能激发抗异种蛋白的反应。为此,人们试着获得人型免疫球蛋白(Ig)的McAb。目前除了人-人杂交瘤外,用抗体基因工程方

关键词：嵌合抗体抗原重构抗体抗体基因恒定区轻链可变区

重组炭疽疫苗免疫人体产生抗体基因的生物信息学分析

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生物技术通讯 2018年第2期29卷 174-182页

作者：刘渝娇陈郑珊王美荣张冠英范鹏飞房婷迟象阳于长明军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071

目的:采用多种生物信息学手段,提取并分析前期获得的重组炭疽疫苗免疫人体产生的抗体基因序列的特征信息,探究与抗体进化规律和功能预测相关的线索。方法:利用R、Perl等语言编写了一系列数据处理和接口程序,整合集成Change-O等相关程序... 详细信息

目的:采用多种生物信息学手段,提取并分析前期获得的重组炭疽疫苗免疫人体产生的抗体基因序列的特征信息,探究与抗体进化规律和功能预测相关的线索。方法:利用R、Perl等语言编写了一系列数据处理和接口程序,整合集成Change-O等相关程序集和R语言包构建抗体基因序列分析平台,对抗体重链基因的VDJ基因使用频率、聚类分布、CDR3区理化特性及体细胞高频突变模式进行信息提取,并通过在线服务器得到部分数据可视化结果。结果:前期获得的抗体基因序列中IGHV3、IGHD3和IGHJ4的使用频率最高,而IGHV3和IGHD5、IGHD6和IGHJ4、IGHV3和IGHJ4的组合是序列中出现频率最高的组合方式;23.3%的保护性抗原(PA)结合抗体都出现在同一个抗体聚类(239号克隆组)中;中和抗体HCDR3区较其他抗体对于碱性和酸性氨基酸使用频率较低,偏向于使用疏水性氨基酸;抗体的体细胞高频突变多发生在AAAAC、GTTAA、AGCTC、AAGTA等热点motif。结论:相关生物信息学手段能够有效处理和分析大量的抗体基因序列,研究结果和方法可为重组疫苗评价以及抗体鉴定和改造提供信息和方法学帮助。

关键词：抗体基因序列分析生物信息学炭疽疫苗

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PCR扩增人外周血淋巴细胞抗体基因的探讨

南京师大学报（自然科学版） 1999年第1期22卷 73-76页

作者：张建琼单祥年张雪萍林陵谢维南京铁道医学院微生物免疫学教研室

采用ＲＴ－ＰＣＲ法，以一组人抗体重链和轻链简并引物，直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Ｆｄ和κ轻链基因．结果提示：用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取细胞总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇ（ｄＴ）引导合成ｃＤＮＡ第一链，再经ＰＣＲ扩增的... 详细信息

采用ＲＴ－ＰＣＲ法，以一组人抗体重链和轻链简并引物，直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Ｆｄ和κ轻链基因．结果提示：用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取细胞总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇ（ｄＴ）引导合成ｃＤＮＡ第一链，再经ＰＣＲ扩增的方法，是值得优先采用的方法．细胞总ＲＮＡ的提取不必追求高纯度，少量外周血即足以满足构建抗体库所需，简并引物可获得良好的扩增效果。

关键词：聚合酶链反应抗体基因外周血淋巴细胞 PCR

外周血B淋巴细胞半套式PCR法扩增人抗体基因

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现代临床医学生物工程学杂志 2005年第2期11卷 86-89页

作者：田朝伟黄少华陈敏生广州医学院第二附属医院急诊科广州510260

目的用半套式PCR法,以一组人抗体重链和轻链引物直接从人外周血淋巴细胞中扩增人全套抗体基因片段.方法从不同人群外周血淋巴细胞中提取总RNA,经反转录后,以免疫球蛋白信号肽序列引物和家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物,进行半套式PC... 详细信息

目的用半套式PCR法,以一组人抗体重链和轻链引物直接从人外周血淋巴细胞中扩增人全套抗体基因片段.方法从不同人群外周血淋巴细胞中提取总RNA,经反转录后,以免疫球蛋白信号肽序列引物和家族特异性免疫球蛋白可变区基因引物,进行半套式PCR扩增人全套抗体基因片段.结果采用不同的引物进行重链、轻链Kappa和Lambda链的半套式PCR扩增,均能获得相应大小的PCR产物,其结果扩增率达到100%.结论在建立抗体基因文库时,半套式PCR法能进一步丰富扩增的抗体基因的多样性,可弥补由于转化效率不高而降低抗体库多样性的不足.

关键词：聚合酶链反应抗体基因人外周血淋巴细胞

用基因融合技术进行杀蚊幼毒蛋白基因的研究Ⅱ.蚊幼虫肠壁细胞膜抗体基因的克隆

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中国寄生虫病防治杂志 1999年第3期12卷 226-228页

作者：刘相萍闫歌徐旭东孔任秋山东省寄生虫病防治研究所济宁272033

为了提高Ｂ．ｓ．对蚊幼虫肠壁细胞膜的识别与结合力从而提高其杀蚊活性，本实验解剖了万余只中华按蚊幼虫肠道，制备了按蚊幼虫肠壁膜泡抗原及其鼠抗血清。抗原蛋白组分分析表明膜泡的纯度较高，而抗血清实验则显示出抗体组分与肠壁... 详细信息

为了提高Ｂ．ｓ．对蚊幼虫肠壁细胞膜的识别与结合力从而提高其杀蚊活性，本实验解剖了万余只中华按蚊幼虫肠道，制备了按蚊幼虫肠壁膜泡抗原及其鼠抗血清。抗原蛋白组分分析表明膜泡的纯度较高，而抗血清实验则显示出抗体组分与肠壁的结合作用。利用ＰＣＲ技术成功扩增了小鼠抗体重链区基因，借助Ｔ４ＤＮＡ聚合酶的修饰，使抗体基因得以成功克隆，为研制抗体基因与毒蛋白基因融合编码的“生物导弹”打下了基础。

关键词：中华按蚊肠细胞膜鼠抗血清抗体基因基因综合

应用PCR从丙型肝炎患者外周血B淋巴细胞扩增抗体基因

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南京铁道医学院学报 2000年第1期19卷 17-20页

作者：张建琼张雪萍林陵谢维单祥年南京铁道医学院微生物学与免疫学教研室江苏南京210009 南京铁道医学院生物学教研室江苏南京210009

用常规RT PCR法 ,以 1组人抗体重链和轻链简并引物 ,直接从 5名丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Fd基因和κ轻链基因。结果提示 ,用Trizol试剂提取细胞总RNA ,以Olig(dT)引导合成cDNA第一链 ,再经PCR扩增的方法 ,是值得... 详细信息

用常规RT PCR法 ,以 1组人抗体重链和轻链简并引物 ,直接从 5名丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Fd基因和κ轻链基因。结果提示 ,用Trizol试剂提取细胞总RNA ,以Olig(dT)引导合成cDNA第一链 ,再经PCR扩增的方法 ,是值得优先采用的方法。细胞总RNA的提取不必追求高纯度 ,少量外周血即足以满足构建抗体库所需 ,简并引物可获得良好的扩增效果。

关键词：抗体基因外周血淋巴细胞丙型肝炎 PCR

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抗结肠癌单链抗体基因的构建、克隆及表达

中华微生物学和免疫学杂志 1994年第6期14卷 372-372页

作者：阎锡蕴田华松李力袁玫田波中国人民解放军总医院基础研究所中国科学院微生物研究所

抗结肠癌单链抗体基因的构建、克隆及表达阎锡蕴，田华松，李力，袁玫，田波抗体基因工程是近几年发展起来的一个新兴领域，它的诞生为抗体的产生和应用开辟了新的途径。该技术不仅能够在原核、真核细胞中表达完整抗体和抗体片段（如Ｆ... 详细信息

抗结肠癌单链抗体基因的构建、克隆及表达阎锡蕴，田华松，李力，袁玫，田波抗体基因工程是近几年发展起来的一个新兴领域，它的诞生为抗体的产生和应用开辟了新的途径。该技术不仅能够在原核、真核细胞中表达完整抗体和抗体片段（如Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ等）。而且能够...

关键词：单链抗体田华李力抗体基因结肠癌