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人癌胚抗原单链抗体基因的构建和筛选

生物化学与生物物理进展 1996年第5期23卷 470-474页

作者：章美云孔健卫生部北京生物制品研究所

从分泌抗癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉａｎｔｉｇｅｎ，ＣＥＡ）单抗的杂交瘤细胞株Ｃ５０中提取总ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增分别得到抗体轻、重链可变区基因，再利用两对ＰＣＲ引物合成和扩增得到全单链抗体... 详细信息

从分泌抗癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉａｎｔｉｇｅｎ，ＣＥＡ）单抗的杂交瘤细胞株Ｃ５０中提取总ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增分别得到抗体轻、重链可变区基因，再利用两对ＰＣＲ引物合成和扩增得到全单链抗体基因．将含轻、重链可变区序列的ＤＮＡ片段克隆于含噬菌体基因Ⅲ的噬菌粒ｐＣＡＮＴＡＢ５．重组克隆在噬菌体表面表达基因Ⅲ与单链抗体的融合蛋白．表达具抗原结合活性的单链抗体的重组噬菌体可以通过亲和筛选的方法筛选得到并富集．利用该方法我们可以从许多分泌不同抗体的杂交瘤细胞ＲＮＡ中快速克隆和筛选功能性抗体可变区基因．

关键词：癌胚抗原抗体基因制备

利用单个B细胞分选方法获得HIV-1单克隆抗体基因及功能鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第7期38卷 481-487页

作者：鞠斌郝彦玲李丹任莉梁华王硕侯佳利魏民邵一鸣南开大学医学院天津300071 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的从人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）感染者中获得单克隆抗体基因及功能鉴定。方法单细胞流式分选得到抗原特异性单个B细胞，基因扩增和测序得到抗体可变区序列，BioEdit软件包中Sequence Identity Mat... 详细信息

目的从人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）感染者中获得单克隆抗体基因及功能鉴定。方法单细胞流式分选得到抗原特异性单个B细胞，基因扩增和测序得到抗体可变区序列，BioEdit软件包中Sequence Identity Matrix程序分析基因序列一致性，免疫遗传学数据库分析抗体基因家系和突变率，酶联免疫吸附试验测定抗体结合能力，TZM-bl/假病毒试验检测抗体中和能力。结果从3个HIV-1感染者中分别获得了4个、7个和11个不同抗体的重链和轻链基因序列，其基因家系、CDR3长度和突变率广泛多样；验证了一个感染者的4个抗体基因序列，抗体A1和B3是HIV-1单克隆结合抗体，能同时与B亚型、CRF01_AE和CRF07_BC抗原蛋白结合；A1和B3也是HIV-1单克隆中和抗体，能够中和C亚型的MW965病毒，50%抑制浓度分别为0.04 μg/ml和37.34 μg/ml。结论本研究成功获得了大量的单克隆抗体基因，并对其中的部分序列进行了功能验证，为单克隆抗体的分离和鉴定等研究工作提供了基础。

关键词：单个B细胞分选抗体基因序列分析结合能力中和活性

抗HBsAg鼠/人嵌合抗体基因的构建、表达及鉴定

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中国医学科学院学报 1990年第5期12卷 318-324页

作者：李以莞 Clyde W.Shearman 中国医学科学院肿瘤研究所 Integrated Genetics USA

用抗体工程法构建抗乙肝表面抗原(HBsAg)鼠/人嵌合抗体的嵌合基因,并在哺乳动物细胞中成功地表达。分离鼠McAb 2H1(抗HBsAg)轻、重链可变区基因,并连接到含有人轻链(Kappa)及重链(Gamma 1)恒定区基因的哺乳动物细胞表达载体中;用电穿孔... 详细信息

用抗体工程法构建抗乙肝表面抗原(HBsAg)鼠/人嵌合抗体的嵌合基因,并在哺乳动物细胞中成功地表达。分离鼠McAb 2H1(抗HBsAg)轻、重链可变区基因,并连接到含有人轻链(Kappa)及重链(Gamma 1)恒定区基因的哺乳动物细胞表达载体中;用电穿孔法将嵌合基因导入小鼠SP2/0细胞,得到高效表达。2H1嵌合抗体能特异性地与HBsAg结合,并能有效地与亲代McAb竞争;与血源性多克隆乙肝免疫球蛋白(HBIG)比较,其具有特异性好、节约血源、价廉、质纯、无其他病毒,如HIV等污染制品的可能等优点,可用于阻断乙肝母婴传播及在意外感染时被动免疫。

关键词：乙型肝炎抗体基因嵌合基因构建

嵌合内含子对抗bFGF抗体基因在293T细胞中表达的影响

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中国生物工程杂志 2010年第3期30卷 9-14页

作者：龚义平陶俊王宏宋其芳唐勇向军俭邓宁暨南大学抗体工程中心广州510632

目的:构建含嵌合内含子和抗bFGF抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中表达,探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法:设计引物分别从载体pCl-neo和pComb3-Fab25中扩增出内含子和抗体Fd段、κ链基因序列,按不同组合构建到含人免疫球蛋白I... 详细信息

目的:构建含嵌合内含子和抗bFGF抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中表达,探讨嵌合内含子对抗体表达的影响。方法:设计引物分别从载体pCl-neo和pComb3-Fab25中扩增出内含子和抗体Fd段、κ链基因序列,按不同组合构建到含人免疫球蛋白IgG1恒定区Fc段基因的表达载体pIgG中。重组质粒经脂质体PEI转染293T细胞,荧光显微镜观察质粒转染情况,采用夹心ELISA和Western blot检测细胞上清中抗体的表达。结果:DNA测序和酶切分析表明,内含子和抗体基因成功插入pIgG,获得了重组质粒pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron。倒置荧光显微镜下可观察EGFP大量表达,Western blot分析上清中有抗体的表达,夹心ELISA检测pIgG-Fd-κ、pIgG-Fd-intron-κ、pIgG-Fd-κ-intron和pIgG-Fd-intron-κ-intron抗体表达量分别为1.21mg/L、0.468mg/L、7.39mg/L、0.601mg/L。结论:成功构建了含嵌合内含子和抗体基因的真核表达载体并在293T细胞中得到表达。嵌合内含子插入κ链基因5′端可提高抗体的表达,插入Fd段5′端则抑制抗体的表达。

关键词：嵌合内含子抗体基因 bFGF 293T细胞表达

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植物抗体基因工程研究进展

科学通报 1998年第16期43卷 1705-1711页

作者：曾君祉付钰俞小淙蒋欣黄华梁中国科学院遗传研究所北京100101

抗体基因工程与植物生物技术相结合 ,产生了植物抗体 .研究表明 ,工程抗体中不论是全抗体或小分子抗体 ,在植物中表达后都具有与抗原结合的活性 ,即具功能性 ,从而使植物抗体的研究备受人们的关注 .目前主要在下述 3个方面开展研究 :( ... 详细信息

抗体基因工程与植物生物技术相结合 ,产生了植物抗体 .研究表明 ,工程抗体中不论是全抗体或小分子抗体 ,在植物中表达后都具有与抗原结合的活性 ,即具功能性 ,从而使植物抗体的研究备受人们的关注 .目前主要在下述 3个方面开展研究 :( 1 )医用治疗性抗体 .人们期望利用农业大田规模的方式生产抗体 ,以降低成本 .另外 ,利用植物可多次杂交的特点 ,装配双 (或多 )功能的新的大分子抗体 ,创造新的抗体药物 ;( 2 )植物生理 .通过表达植物激素及微量活性物质的工程抗体 ,封闭原有活性成分 ,研究植物的生长和发育 ;( 3)植物抗病 .将由植物病毒制备出的工程抗体基因转入植物 ,以抵御该病毒的入侵 ,达到防病、治病的目的 .

关键词：抗体基因植物抗性转基因植物基因工程

半套式PCR扩增人抗体基因以增加抗体库的多样性

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军事医学科学院院刊 1996年第1期20卷 45-48页

作者：王学王海涛陈万荣鲍作义徐静军事医学科学院微生物学流行病学研究所

用重链５′末端８条引物（ＶＨ１ａ、ＶＨ３ａ、ＶＨ１ｆ、ＶＨ３ｆ、ＶＨ２ｆ、ＶＨ４ｆ、ＶＨ６ａ、ＶＨ６ｆ）和３′末端１条引物（ＣＧ１ｚ）以及轻链５′末端９条引物（ＶＫ１ａ、ＶＫ２ａ、ＶＫ３ａ及ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、Ｖ... 详细信息

用重链５′末端８条引物（ＶＨ１ａ、ＶＨ３ａ、ＶＨ１ｆ、ＶＨ３ｆ、ＶＨ２ｆ、ＶＨ４ｆ、ＶＨ６ａ、ＶＨ６ｆ）和３′末端１条引物（ＣＧ１ｚ）以及轻链５′末端９条引物（ＶＫ１ａ、ＶＫ２ａ、ＶＫ３ａ及ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、ＶＬ４、ＶＬ５、ＶＬ６）和３′末端２条引物（ＣＫ１ｚ和ＣＬ２）ｃＤＮＡ为模板我疫球蛋白基因进行ＰＣＲ扩增。结果表明，重链的扩增率为５０％，。轻链的扩增率为４４％。而先用信号肽序列为引物和以上的３′末端引物以ｃＤＮＡ为模板先进行第一次ＰＣＲ，然后以该产物为模板再用以上方法进行第二次ＰＣＲ时，不仅所有的引物都能扩增出来，而且其产量要比进行一次ＰＣＲ的产量多得多。

关键词：抗体库抗体基因半套式聚合酶链反应引物

腺病毒载体携带全长人乙肝病毒表面前S2蛋白抗体基因在体外的表达

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中华实验外科杂志 2005年第1期22卷 49-51页

作者：郭明高杨甲梅李根丛苏长青钱其军吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438

目的　构建携带全长人乙肝病毒表面PRES2 蛋白抗体基因的腺病毒载体 ,观察其在体外的表达。方法　将全长 2 5 70bp人乙肝病毒表面PRES2 蛋白抗体基因克隆入 5型腺病毒穿梭质粒载体 ,在 2 93细胞中重组产生重组腺病毒 ,体外感染CHO细胞 ... 详细信息

目的　构建携带全长人乙肝病毒表面PRES2 蛋白抗体基因的腺病毒载体 ,观察其在体外的表达。方法　将全长 2 5 70bp人乙肝病毒表面PRES2 蛋白抗体基因克隆入 5型腺病毒穿梭质粒载体 ,在 2 93细胞中重组产生重组腺病毒 ,体外感染CHO细胞 ,感染复数 (MultiplicityofInfec tionVirus/Cell)为 2 0 ,获得表达产物 ,并测定其亲和力。结果　TCID5 0法测定重组腺病毒滴度为(2 .1× 10 10 )pfu/ml。病毒感染CHO细胞后 ,表达蛋白经蛋白质印迹分析证实为全长人源化抗体。抗体亲和力常数为 (2 .16± 0 .2 0 )× 10 8L/mol。结论　全长人乙肝病毒表面PRES2 蛋白抗体基因腺病毒载体成功构建和表达全长高亲和力人源化抗体 ,为乙型肝炎治疗提供了一个全新的途径。

关键词：乙肝病毒腺病毒载体表达体外携带前S2蛋白人源化抗体抗体基因 CHO细胞蛋白质印迹

腺病毒携带人乙型肝炎病毒表面前S_2抗体基因转染大鼠移植肝预防乙型肝炎病毒再感染

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中华器官移植杂志 2005年第6期26卷 370-372页

作者：郭明高杨甲梅单云峰张辉李根丛崔贞福钱其军吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438

目的探讨腺病毒携带人乙型肝炎病毒表面前S2抗体基因预防乙型肝炎病毒(HBV)再感染移植肝的作用。方法将人乙型肝炎病毒表面前S2抗原人源化抗体基因(Ab-H-HBV-S2)克隆入5型腺病毒穿梭质粒载体,在293细胞中重组,产生重组型腺病毒。用重组... 详细信息

目的探讨腺病毒携带人乙型肝炎病毒表面前S2抗体基因预防乙型肝炎病毒(HBV)再感染移植肝的作用。方法将人乙型肝炎病毒表面前S2抗原人源化抗体基因(Ab-H-HBV-S2)克隆入5型腺病毒穿梭质粒载体,在293细胞中重组,产生重组型腺病毒。用重组腺病毒感染冷保存时的大鼠供肝,获得人乙型肝炎病毒表面前S2抗体(简称为:前S2抗体)的表达。观察前S2抗体在体外保护人原代肝细胞不受HBV感染的效果。结果用50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定重组腺病毒滴度为5.1×1010PFU/ml。受鼠肝移植后3d时,血清中前S2抗体的表达量为(16.7±10.5)mg/L,7d时的表达量为(30.9±13.6)mg/L。当受鼠血清中前S2抗体浓度≥0.5mg/L时,与HBV和人原代肝细胞共同培养后,检测上清液中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)为阴性。结论全长Ab-H-HBV-S2基因克隆入腺病毒载体,感染大鼠供肝,获得人源化抗体的表达;表达的前S2抗体能保护人原代肝细胞不受HBV感染。

关键词：前S2抗体人乙型肝炎乙型肝炎病毒再感染腺病毒携带移植肝大鼠基因转染乙型肝炎病毒(HBV) 乙型肝炎病毒表面抗原人原代肝细胞 HBV感染前S2抗原 293细胞腺病毒感染腺病毒载体人源化抗体基因预防质粒载体抗体基因

抗甜菜坏死黄脉病毒单链抗体基因的构建和在细菌中的表达

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云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 96-97页

作者：曾君祉周志勇吴有强刘志萍熊英黄华梁蔡祝南于嘉林中国科学院遗传所研究所北京100101 中国农业大学北京100094