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抗PEDV活性小分子筛选研究

抗PEDV活性小分子筛选研究

作者：吴雨婷中国农业科学院

学位级别：硕士

猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)是一种猪肠道冠状病毒,可引起新生仔猪急性腹泻,有极高的死亡率。在过去的几十年里,PEDV已经对世界养猪业造成了巨大的经济损失。猪场通常使用疫苗来对PEDV进行防控,但由于群体... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)是一种猪肠道冠状病毒,可引起新生仔猪急性腹泻,有极高的死亡率。在过去的几十年里,PEDV已经对世界养猪业造成了巨大的经济损失。猪场通常使用疫苗来对PEDV进行防控,但由于群体免疫的压力,病毒的基因经常发生突变,导致越来越多经过正常免疫程序的养猪场相继爆发疫情。由于目前市面上没有PEDV特效治疗药物,因此筛选抗PEDV的化合物具有广阔的临床应用前景。另外,PEDV所在的冠状病毒属极易发生基因同源重组,影响细胞的嗜性导致宿主范围发生改变,从而使冠状病毒具有从动物宿主到人类宿主的跨物种传播能力。因此,抗PEDV化合物的筛选可能有助于寻找新的抗冠状病毒药物,对人畜共患冠状病毒的预防和控制具有潜在的价值。本课题通过建立抗PEDV活性小分子化合物筛选方法,从两个小分子化合物库(Natural Compound Library、Epignenetics Compound Library)中的1313种化合物进行筛选,发现了9种化合物可以有效抑制PEDV的增殖。经过文献检索,发现其中4种小分子为新的抗病毒小分子,本研究成果为发现新型抗冠状病毒药物提供了参考。主要研究结果包括以下三个方面:首先是抗PEDV活性小分子的筛选。基于流式细胞技术(FCM)和携带增强型绿色荧光蛋白标签的PEDV病毒(CV777-EGFP)建立一种高通量药物筛选平台。从小分子化合物库中,筛选出9种具有抗PEDV活性的小分子化合物,经过文献检索,发现其中4种小分子(2-Methoxynaphthoquinone,Dihydroergotoxine mesylate,GSK503和TCS PIM-1 1)为新的抗病毒小分子化合物,对其进行后续研究。其次是小分子化合物细胞毒性及抑制效率。检测4种小分子化合物的细胞毒性(CC50)以及抗病毒效率(EC50),通过治疗指数(SI)评估发现4种化合物SI值均大于1,均具有抗PEDV药物开发的临床价值。最后是小分子化合物抗病毒活性及作用阶段的确定。通过Western blot(WB)和Indirect immunofluorescence assay(IFA)在蛋白水平验证了4种化合物均具有抗PEDV活性。通过探究4种化合物抗PEDV的作用阶段,确定TCS PIM-1 1抑制PEDV感染的吸附、入侵、复制增殖等多个阶段;2-Methoxynaphthoquinone主要抑制PEDV病毒复制增殖阶段;Dihydroergotoxine mesylate和GSK503主要抑制病毒的入侵和复制增殖阶段。该部分研究为化合物限制PEDV及冠状病毒感染提供了参考。结论:本研究建立了评估抗PEDV活性化合物的方法,对2个小分子库进行了筛选,发现了4种新的小分子具有活性。利用多种方法对小分子的活性进行了验证并研究了抗病毒作用阶段。本研究为研发抗冠状病毒药物奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒高通量筛选模型小分子化合物抗病毒化合物抑制病毒增殖

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抗柯注射液治疗柯萨奇B病毒性心肌炎研究

医学研究杂志 1998年第12期32卷 13-14页

作者：陈曙霞梅尚文章隆泉钱富荣谢龙山陈美芳王平全陆国红沈金芳刘晶星陈福祥陆德源姚季生上海第二医科大学附属仁济医院心内科上海200001 上海第二医科大学临床药理研究室上海第二医科大学基础部

病毒性心肌炎为常见病、多发病,主要为柯萨奇B病毒引起。该病在常规尸检中约有3.4％～9.3％患有局灶性病毒心肌炎;在普通感冒中约有1/3的患者可出现异常心电图。国外曾有学者报道,在常规尸解标本中。

关键词：病毒性心肌炎荧光抗体技术抑制病毒增殖异常心电图治疗普通感冒抗柯注射液常见病抗病毒作用局灶性

复方大果木姜子软胶囊抗流感病毒作用的体外实验研究

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时珍国医国药 2006年第10期17卷 F0003-F0004页

作者：胡万福张永萍邱德文贵阳中医学院贵州贵阳550002

目的对复方大果木姜子软胶囊进行体外抗流感病毒实验研究，开发安全有效的抗流感病毒的中药新药。方法细胞培养实验方法。结果复方大果木姜子软胶囊在MDCK细咆中的半数中毒浓度（TC50）为1．248mg·ml^-1；预防组抗流感病毒的半数有... 详细信息

目的对复方大果木姜子软胶囊进行体外抗流感病毒实验研究，开发安全有效的抗流感病毒的中药新药。方法细胞培养实验方法。结果复方大果木姜子软胶囊在MDCK细咆中的半数中毒浓度（TC50）为1．248mg·ml^-1；预防组抗流感病毒的半数有效浓度（EC50）为0．117mg·ml^-1；治疗指数（TI）为10．67；感染病毒0—7h后均有明显的抑制FM1在MDCK细胞中增殖的作用。结论复方大果木姜子软胶囊对流感病毒FM1在MDCK细胞中的增殖具有明显的抑制作用。

关键词：复方大果木姜子软胶囊 FM1 MDCK 抑制病毒增殖抗病毒活性

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双效微肥

技术与市场 1997年第5期4卷 14-14页

双效微肥该肥与国内外微肥相比，其最大的特点是既能提高作物产量，又能防病治病。该肥含有的１７种微量元素以螯合态加入，在遇到硫酸等酸根离子时，这些元素不会形成沉淀，而以全溶离子态存在于液体中，易被植物吸收。该肥可用于粮棉... 详细信息

双效微肥该肥与国内外微肥相比，其最大的特点是既能提高作物产量，又能防病治病。该肥含有的１７种微量元素以螯合态加入，在遇到硫酸等酸根离子时，这些元素不会形成沉淀，而以全溶离子态存在于液体中，易被植物吸收。该肥可用于粮棉拌种、浸种及喷施，可使作物增产１０...

关键词：双效抑制病毒增殖毒理试验绿色工程技术开发区自然灾害作物产量酸根离子稳产高产作物品质

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香菇保健菜肴

家庭医学（上半月） 2003年第7期18卷 37-37页

作者：牛国平高级烹调师

香菇是一种高蛋白、低脂肪、低热量食品。医学专家研究,香菇中含有的“香菇多糖”,是调节人体免疫反应T细胞的促进剂,能提高人体免疫功能;香菇中的双链核糖核酸,能刺激人体产生干扰素诱导物,抑制病毒增殖。香菇素、香菇多糖以及不饱和... 详细信息

香菇是一种高蛋白、低脂肪、低热量食品。医学专家研究,香菇中含有的“香菇多糖”,是调节人体免疫反应T细胞的促进剂,能提高人体免疫功能;香菇中的双链核糖核酸,能刺激人体产生干扰素诱导物,抑制病毒增殖。香菇素、香菇多糖以及不饱和脂肪酸还具有降低血清胆固醇的作用。此外,香菇中的D-甘露醇具有高渗降压作用,可以降低颅内压和眼压;

关键词：香菇多糖不饱和脂肪酸支链氨基酸人体免疫反应核糖核酸抑制病毒增殖保健作用胖头鱼人体免疫功能干扰素诱导

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感冒新观点

医药与保健 1999年第12期7卷 28-28页

作者：胡沛斌