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金水缓纤组分方Ⅱ调控PI3K/Akt通路抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞活化

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中药材 2023年第10期46卷 2558-2565页

作者：霍静李建生刘海军齐水水河南中医药大学中医药科学院河南郑州450046 河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心河南郑州450046 河南中医药大学第一附属医院河南郑州450099

目的:探讨金水缓纤组分方Ⅱ调控PI3K/Akt通路影响成纤维细胞活化、增殖及迁移干预特发性肺纤维化(IPF)的机制。方法:以TGF-β1作用MRC-5细胞诱导其活化,采用MTT法检测细胞活力筛选药物浓度;Western Blot检测低(30.63μg/mL)、中(61.25μ... 详细信息

目的:探讨金水缓纤组分方Ⅱ调控PI3K/Akt通路影响成纤维细胞活化、增殖及迁移干预特发性肺纤维化(IPF)的机制。方法:以TGF-β1作用MRC-5细胞诱导其活化,采用MTT法检测细胞活力筛选药物浓度;Western Blot检测低(30.63μg/mL)、中(61.25μg/mL)、高(91.88μg/mL)浓度金水缓纤组分方Ⅱ对活化MRC-5细胞CollagenⅠ、N-cadherin、α-SMA、PCNA、p-PI3K、p-Akt蛋白表达的影响;免疫荧光技术检测各组细胞CollagenⅠ、α-SMA表达;EdU法和划痕法检测金水缓纤组分方Ⅱ对活化MRC-5细胞增殖及迁移能力的影响。加入bpv(HOpic)激活PI3K/Akt通路和特异性抑制剂LY294002考察金水缓纤组分方Ⅱ调控PI3K/Akt通路对成纤维细胞活化、增殖及迁移的影响。结果:中、高浓度金水缓纤组分方Ⅱ均可抑制CollagenⅠ、N-cadherin、α-SMA、PCNA、p-PI3K、p-Akt表达,抑制MRC-5细胞的增殖和迁移能力;LY294002可增强金水缓纤组分方Ⅱ对MRC-5细胞活化、增殖和迁移的影响,bpv可抑制金水缓纤组分方Ⅱ的影响。结论:金水缓纤组分方Ⅱ调控PI3K/Akt通路抑制TGF-β1诱导的MRC-5细胞的增殖及迁移能力。

关键词：金水缓纤组分方Ⅱ 成纤维细胞活化增殖迁移 PI3K/Akt通路

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细胞周期抑制因子p21活化巨噬细胞促进小鼠肺纤维化发生发展

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药学学报 2020年第8期55卷 1792-1800页

作者：魏旭鹏王婉玉李云炫刘畅吕晓希赵燕燕刘姗姗河北大学药学院河北保定071000 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京100050

探讨博来霉素(bleomycin,BLM)损伤所致小鼠肺纤维化发病过程中肺泡巨噬细胞的细胞周期抑制因子p21(cell cycle inhibitor p21,p21)蛋白表达及其对巨噬细胞活化的调节作用。免疫荧光染色法检测肺纤维化组织中肺泡巨噬细胞中CD206的表达;R... 详细信息

探讨博来霉素(bleomycin,BLM)损伤所致小鼠肺纤维化发病过程中肺泡巨噬细胞的细胞周期抑制因子p21(cell cycle inhibitor p21,p21)蛋白表达及其对巨噬细胞活化的调节作用。免疫荧光染色法检测肺纤维化组织中肺泡巨噬细胞中CD206的表达;RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)法检测巨噬细胞活化标志蛋白的表达;巨噬细胞/成纤维细胞共培养法检测巨噬细胞对成纤维细胞活化及胶原收缩能力的影响;采用免疫荧光和免疫印迹法检测巨噬细胞中p21蛋白表达的变化;采用p21敲低和过表达病毒感染肺泡巨噬细胞,RT-PCR和巨噬细胞/成纤维细胞共培养法检测改变p21表达对肺泡巨噬细胞促纤维化表型的调节作用。动物实验操作过程依照中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所实验动物管理与动物福利委员会的要求执行。结果显示:与对照组比较,模型组肺泡巨噬细胞CD206的表达增加、巨噬细胞活化标志蛋白表达增加、模型组肺泡巨噬细胞促进成纤维细胞的活化并增强其胶原收缩能力。模型组小鼠肺泡巨噬细胞中p21蛋白表达增加。敲低p21可显著抑制巨噬细胞促纤维化表型,而过表达对照小鼠肺泡巨噬细胞中p21则促进其促纤维化表型的转化。以上研究结果表明,肺纤维化小鼠肺泡巨噬细胞中p21表达增加,p21可通过促进巨噬细胞活化参与肺纤维化发病。

关键词：肺纤维化巨噬细胞 p21 成纤维细胞活化博来霉素损伤

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Vinculin蛋白对放射性肺纤维化的调节作用

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海峡药学 2023年第1期35卷 6-12页

作者：杨超郑姝琦谢灵枫唐轶韬吴楚陈纯福建医科大学福建福州350122 福建医科大学药学院福建福州350122 福建省天然药物药理学重点实验室福建福州350122

目的肺纤维化中过多的成纤维细胞(FBs)活化推动着基质蛋白沉积、纤维化进展。黏着斑蛋白(Vinculin)是一种黏着斑成分蛋白,课题组前期研究发现vinculin与FBs活化有关,但体内改变FBs的vinculin表达量对肺纤维化进程的影响尚不清楚。方法C5... 详细信息

目的肺纤维化中过多的成纤维细胞(FBs)活化推动着基质蛋白沉积、纤维化进展。黏着斑蛋白(Vinculin)是一种黏着斑成分蛋白,课题组前期研究发现vinculin与FBs活化有关,但体内改变FBs的vinculin表达量对肺纤维化进程的影响尚不清楚。方法C57BL/6小鼠全肺照射形成放射性肺纤维化(RIPF),静脉注射vinculin敲低细胞及vinculin突变细胞,于照射后4个月取小鼠肺组织,采用Masson染色、血相分析了解肺纤维化病理变化及炎症情况,RT-PCR、Western blot及免疫荧光法了解肺组织中基质蛋白含量、FBs活化等的变化。结果体外实验显示敲低vinculin可下调FBs的增殖、活化及迁移能力,而过表达突变vinculin在体外培养中未见对FBs的显著调节作用。给RIPF小鼠分别注射vinculin敲低细胞和vinculin突变细胞,结果发现注射vinculin敲低细胞可减少胶原蛋白沉积,下调血相炎症指标,下调肺组织中vinculin及α-SMA表达量,而注射vinculin突变细胞对RIPF的部分上述指标具有上调作用。结论本实验结果显示vinculin表达量与RIPF的进展有关,注射vinculin敲低细胞具有一定的缓解RIPF的作用。

关键词：放射性肺纤维化(RIPF) vinculin 成纤维细胞活化敲低突变

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circHECTD1介导HECTD1调控矽肺纤维化的作用机制研究

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circHECTD1介导HECTD1调控矽肺纤维化的作用机制研究

作者：褚汉东南大学

学位级别：硕士

目的:矽肺(Silicosis)是一类长时间地吸入二氧化硅(SiO)颗粒所导致的肺纤维化疾病,早期会出现多种炎症反应,发生间质转化并伴随着成纤维细胞的过度增殖,后期发展为不可逆的纤维化。关于矽肺的具体发病原理和机制并不明确,过去的研究多... 详细信息

目的:矽肺(Silicosis)是一类长时间地吸入二氧化硅(SiO)颗粒所导致的肺纤维化疾病,早期会出现多种炎症反应,发生间质转化并伴随着成纤维细胞的过度增殖,后期发展为不可逆的纤维化。关于矽肺的具体发病原理和机制并不明确,过去的研究多集中在SiO刺激肺泡巨噬细胞所释放的趋化因子和细胞因子的作用上,但关于肺成纤维细胞在矽肺中所起到作用的研究较少。而HECTD1作为E3泛素连接酶,与MCPIP1的去泛素化酶的功能是具有相关性,MCPIP1已经探明了其在巨噬细胞活化中的作用。所以本课题主要探索HECTD1在成纤维细胞活化中的作用,以及对肺纤维化进程的影响,同时引入circRNA,为矽肺的诊疗提供新思路。方法:1)HECTD1在SiO所诱导的成纤维细胞增殖活化中的作用。a)取对数生长期的人肺成纤维细胞(HPF-a),使用SiO颗粒处理,蛋白免疫印迹法结合细胞免疫荧光检测HECTD1、成纤维细胞标志物表达量变化;b)使用气管滴注SiO的方法来构建矽肺小鼠模型,获取小鼠肺组织切片,免疫荧光检测成纤维细胞标志物和HECTD1的表达量;c)免疫荧光检测矽肺患者和健康志愿者的肺组织样品中纤维化标志物和HECTD1的分布和丰度差异;d)CRISPR/Cas9敲除HECTD1后,BrdU、MTT和胶收缩等实验检测细胞增殖和活力的变化;e)CRISPR/Cas9敲除HECTD1后,进行细胞划痕实验、3D基质巢式迁移实验来综合评估对HPF-a细胞迁移能力的改变。2)circHECTD1与HECTD1调控成纤维细胞活化的具体机制。a)WB检测SiO作用下HPF-a细胞中自噬相关标志物的表达量变化;b)特异性敲除HECTD1后,WB和LC3腺病毒检测自噬流水平;c)加入自噬的激动剂雷帕霉素,探究HECTD1是否通过自噬来影响成纤维细胞功能;d)qRT-PCR和原位杂交观察circHECTD1在HPF-a细胞中的表达和分部情况;e)采用慢病毒上调circHECTD1的表达,检测HECTD1表达量的变化以及后续的对细胞功能的影响。结果:1)与对照组比较,SiO可以诱导HPF-a中HECTD1表达量最多升高1.6倍,同时矽肺小鼠和矽肺病人肺组织中成纤维细胞内HECTD1呈高表达;SiO作用下,新生细胞数明显增多,活力也增加了30%,并且增强了迁移的能力;CRISPR/Cas9敲除HECTD1后,能够抑制HPF-a的增殖以及活化能力并大幅抑制迁移的发生。2)SiO刺激后,HPF-a内自噬标志物表达量明显升高,提示自噬的程度被增强;使用雷帕霉素处理后,可以显著逆转敲除HECTD1所带来的细胞功能的改变;SiO诱导circHECTD1下落到0.5倍,并且circHECTD1基本分布在细胞质中;慢病毒过表达circHECTD1可以引起HECTD1表达量下降,进而抑制成纤维细胞的活力和迁移。结论:HECTD1通过自噬介导了成纤维细胞活化、增殖、迁移等多个生命历程,进而影响肺纤维化的发生发展,而circHECTD1可以调控这一过程,为矽肺的相关研究提供了新的方向,也为进一步的临床治疗提供了新的路径。

关键词：矽肺 HECTD1 成纤维细胞活化纤维化自噬 circRNA