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不同物种成熟精子Fas蛋白的表达研究

东北农业大学学报 2015年第8期46卷 51-55页

作者：周佳勃李有为孙铭菊朱江焦光忠董海波谭景和东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

使用免疫荧光标记和激光共聚焦显微镜方法,对不同物种成熟精子Fas蛋白进行观测。明确细胞凋亡蛋白Fas在不同物种成熟精子表面的分布规律,并对Fas蛋白进行定位。结果显示Cy3红色荧光标记的Fas蛋白主要分布在啮齿类动物(大鼠、小鼠),反刍... 详细信息

使用免疫荧光标记和激光共聚焦显微镜方法,对不同物种成熟精子Fas蛋白进行观测。明确细胞凋亡蛋白Fas在不同物种成熟精子表面的分布规律,并对Fas蛋白进行定位。结果显示Cy3红色荧光标记的Fas蛋白主要分布在啮齿类动物(大鼠、小鼠),反刍动物(山羊、绵羊、牛)的精子头部和中段线粒体鞘上,而在猪和人的成熟精子上未检测到Fas蛋白。说明使用激光共聚焦显微镜技术可以精确定位标记后的Fas蛋白,不同物种成熟精子Fas蛋白的表达存在差异。

关键词：猪成熟精子 Fas 免疫荧光激光共聚焦显微镜

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人睾丸组织中成熟精子的分离方法初探

生物医学工程学杂志 2005年第2期22卷 371-373页

作者：李培旭李尚为彭芝兰马黔红黄仲英李蕾唐宗蓉韩字研四川大学华西第二医院妇产科成都610041

探索简单、适用的体外分离睾丸组织中成熟精子的方法,以用于男性无精子症病人行卵母细胞内单精子注射受精-胚胎移植为目的。用含不同浓度透明质酸酶的10 %人血白蛋白人类输卵管液培养人睾丸曲细精管组织匀浆2 4 h,再用Percoll梯度离心... 详细信息

探索简单、适用的体外分离睾丸组织中成熟精子的方法,以用于男性无精子症病人行卵母细胞内单精子注射受精-胚胎移植为目的。用含不同浓度透明质酸酶的10 %人血白蛋白人类输卵管液培养人睾丸曲细精管组织匀浆2 4 h,再用Percoll梯度离心法洗涤后计算所获各级精子的总数,并设置前后对照和空白对照进行比较。用不同浓度透明质酸酶处理后的4个实验组分别与2个对照组比较,实验组所获得的各级精子的总数高于对照组,有显著差异(P精子总数组间比较,处理前对照和处理后空白对照之间比较,无显著差异(P>0 .0 5 )。而用浓度为2 0 0 u/ ml的10 %人血白蛋白人类输卵管液处理组获得的各级精子的总数与其它浓度处理组之间比较存在统计学差异(P精子总数相似,但活动能力较其它浓度处理组低。透明质酸酶结合Percoll梯度离心可从人睾丸曲细精管组织匀浆中分离出较多更纯的成熟精子,但过高浓度的透明质酸酶可能会影响分离出的精子的活动能力。

关键词：睾丸精子透明质酸酶 Percoll梯度离心成熟精子睾丸组织 Percoll梯度离心法分离方法卵母细胞内单精子注射睾丸曲细精管人血白蛋白

小鼠圆形精子、成熟精子细胞RNA-Seq文库的构建

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小鼠圆形精子、成熟精子细胞RNA-Seq文库的构建

作者：张留光广西大学

学位级别：硕士

小鼠精子增殖分化一步一步的发育成熟,这个过程很复杂。精原细胞经过有丝分裂,减数分裂和圆形精子拉长变态,最后形成带尾巴的成熟精子。精子发育后期即精子形成阶段,圆形精子细胞经过一系列的生化反应和形态结构变化变成长形精子细胞在... 详细信息

小鼠精子增殖分化一步一步的发育成熟,这个过程很复杂。精原细胞经过有丝分裂,减数分裂和圆形精子拉长变态,最后形成带尾巴的成熟精子。精子发育后期即精子形成阶段,圆形精子细胞经过一系列的生化反应和形态结构变化变成长形精子细胞在附睾尾发育成具有繁殖性能的成熟精子。精子这一系列发育成熟过程都和相关基因的调控是分不开的。精子的过程可以看到一层层的各种精子细胞的结合,支持细胞、间质细胞和其他类型的生精细胞。人们采用不同的分离方法,试图分离到纯度较高的精子细胞,但总的来说,存在异质性的麻烦。为了阐明精子形成过程中的相关机理,筛选出生精细胞特异表达的基因势在必行。因此分离处于不同发育阶段的单一的、高纯度的生殖细胞群是进行相关研究的首要任务。本课题组通过利用激光显微切割技术,从冰冻切片睾丸组织中成功捕获和分离到约3×104个小鼠的圆形精子细胞。同时用浮游法从小鼠附睾尾收集到了大量成熟的精子。并在此基础上从分离到的两种细胞中提取到了高质量的微量总RNA。RNA作为从父本把遗传信息传递到母本的中间载体,在好多方面的过程中都起着重要作用。作者采用最新发展起来的RNA-Seq技术对这两种细胞的转录组进行解析,并在转录组水平上研究精子形成过程中的相关机理问题。但是,由于小鼠精子作为精子发育成熟的终末最终细胞,其染色体由于鱼精蛋白的存在而高度浓缩,细胞核外只有一层细胞膜,并且细胞质非常少,RNA的含量极少,再加上激光显微切割所获得的细胞量也有限,所获得的RNA量根本无法满足RNA-Seq建库的需求,这就为我们的研究提出了一个挑战。本研究针对这一问题,我们对制备的总RNA中的mRNA采用了mRNA线性扩增技术,从而满足了建库所需要的RNA量。mRNA线性扩增技术导致扩增偏好型是极细微的,并且用aRNA进行基因表达研究的可重复性极高。本论文首先通过激光显微切割技术和浮游法分别获得了纯净的圆形精子细胞、成熟精子,然后通过对这两种细胞的总RNA进行mRNA线性扩增达到了RNA-Seq技术建库所需的RNA量,成功构建了这个两个样品的RNA-Seq文库,为下游的转录组测序分析奠定了基础。

关键词：圆形精子细胞成熟精子激光显微切割技术转录组测序技术

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隆线溞精子发生及成熟精子的超微结构

动物学报 2005年第4期51卷 710-717页

作者：张明凤赵云龙王群曾错赵艳民华东师范大学生命科学学院

用透射电镜和扫描电镜观察隆线精子的发生过程及成熟精子的超微结构。隆线精子发生经历精原细胞、精母细胞、精子细胞和成熟精子四个时期。精原细胞核染色质凝集成团,细胞质内有线粒体、粗面内质网分布。精母细胞核染色质分散,不均... 详细信息

用透射电镜和扫描电镜观察隆线精子的发生过程及成熟精子的超微结构。隆线精子发生经历精原细胞、精母细胞、精子细胞和成熟精子四个时期。精原细胞核染色质凝集成团,细胞质内有线粒体、粗面内质网分布。精母细胞核染色质分散,不均匀地分布于核中,细胞质内粗面内质网聚集。在精子细胞分化形成精子的早期,细胞纵向拉伸,核物质开始浓缩;中期精子细胞呈明显的长条形,精子细胞逐渐移入精巢管腔中央,外围包裹一厚层精子鞘;后期精子细胞已进入管腔中,核物质呈高度浓缩状,细胞质层较少,精子细胞间通过外围精子鞘相互粘连成片。成熟精子分散在精巢管腔中央,外形呈棒状,一端稍钝,一端稍尖,无鞭毛、棘突等附属物;核内染色质解聚,均匀分布在核中,具双层核膜,细胞质层很少,精子鞘为单层,无法确认顶体端。隆线雄性生殖细胞的结构及其发生过程均较高等甲壳动物简单和原始,但在功能上表现出相对的适应性。

关键词：隆线溞精子发生成熟精子超微结构粗面内质网精子细胞扫描电镜观察雄性生殖细胞发生过程精原细胞

Y染色体编码基因mRNA在成熟精子中保留情况的研究

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Y染色体编码基因mRNA在成熟精子中保留情况的研究

作者：雷庆上海交通大学

学位级别：硕士

自从上世纪中叶发现精子当中存在mRNA以来,对精子中的mRNA的研究取得巨大的进展。越来越多的研究发现成熟精子中存在有大量而复杂的mRNA群体,到目前为止,科学家们估计人正常射出的精子当中有3500-5000多种RNA,并且认为它们可能在染色体... 详细信息

自从上世纪中叶发现精子当中存在mRNA以来,对精子中的mRNA的研究取得巨大的进展。越来越多的研究发现成熟精子中存在有大量而复杂的mRNA群体,到目前为止,科学家们估计人正常射出的精子当中有3500-5000多种RNA,并且认为它们可能在染色体重新组装、基因印迹及精子发生过程中起着重要的作用。本文主要通过检测Y染色体编码基因在小鼠和人类成熟精子中的表达情况,从而探讨成熟精子对这些基因的mRNA保留机制,并进一步探讨精子mRNA可能执行的功能。本研究结合小鼠睾丸SAGE文库数据,选取小鼠Y染色体上10个重要基因并设计引物。然后采集小鼠附睾精子并获能,通过上游法纯化精子后提取总RNA,同时提取睾丸、雄脑及雌脑的总RNA,接着用这些基因相应的引物对四种RNA进行RT-PCR分析,检测这些基因在成熟精子及其他组织当中的表达情况。而在上面结果的基础上,我们又用荧光原位杂交的方法对Dby及Smcy在小鼠成熟精子当中存在的情况做了进一步对比与鉴定。此外,我们利用同种方法在人类射出的精子、睾丸、男性淋巴细胞和卵巢中对筛选的人类Y染色体编码的9个基因进行了类似的研究。 PT-PCR结果显示小鼠Y染色体编码的10个基因mRNA在雌脑中均无表达,雄脑中部分有表达,而在睾丸中都有表达,但在精子中只有Dby的mRNA能够被检测到。而对其中Dby和Smcy两基因进行荧光原位杂交之后,激光共聚焦结果显示,有一半的精子顶体后膜上有明显的Dby mRNA的信号,而作为对照的Smcy则检测不到任何信号。对人类的类似研究发现,Y染色体编码的9个基因在卵巢中均无表达,而在男性淋巴细胞中都有表达,睾丸当中有6个基因表达,其中精子中只检测到DBY、SRY、RPS4Y1的mRNA。以上结果说明成熟精子对Y染色体编码的基因mRNA是选择性保留的。在我们所选的10个基因当中,小鼠成熟精子仅保留了Dby的mRNA,激光共聚焦的结果也进一步证实了这一点。这预示着Dby可能对小鼠精子成熟以后受精的功能有着重要的作用。同时在人类成熟精子中保留了在睾丸中有表达的Y染色体编码的6个基因当中的3个,这些基因可能对受精后早期胚胎发育有着重要的作用。

关键词：成熟精子 Y染色体 mRNA RT-PCR 保留

温度、光照和保存液对大鲵成熟精子存活状况的影响

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水产科学 2004年第3期23卷 10-12页

作者：乔志刚李学军李效宇徐存栓河南师范大学生命科学学院河南新乡453002

本文对人工催产得到的大鲵精子,在不同温度、光照和保存液中的存活状况进行了观察研究。结果表明:15℃条件下体外保存大鲵精子原液,有光照时精子存活5h,无光照时存活10h;相同温度下精子原液经0.9%生理盐水、鱼用任氏液、蒸馏水、山泉水... 详细信息

本文对人工催产得到的大鲵精子,在不同温度、光照和保存液中的存活状况进行了观察研究。结果表明:15℃条件下体外保存大鲵精子原液,有光照时精子存活5h,无光照时存活10h;相同温度下精子原液经0.9%生理盐水、鱼用任氏液、蒸馏水、山泉水稀释后,精子在鱼用任氏液中存活时间最长,但与原液中保存精子的存活时间相比较有明显的缩短;通过对大鲵精子活力级别的判定,认为大鲵精子在水温20～25℃时受精能力最强。

关键词：大鲵成熟精子存活状况温度光照保存液两栖纲

可生育男性成熟精子mRNA的基因系列表达分析

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可生育男性成熟精子mRNA的基因系列表达分析

第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会

作者：乔中东赵仰星王朝霞王莲芸王一飞上海交通大学生命科学与技术学院上海交通大学医学院

早在50多年前,精子中是否存在 RNA,以及在这些细胞中是否有基因表达曾经是最热门的议题。近年来,随着分子生物学分析技术的发展,人们对精子中 RNA 存在的兴趣又重新燃起,以满足在男性不孕不育研究中,找到一个不损伤睾丸或非侵入性诊断... 详细信息

早在50多年前,精子中是否存在 RNA,以及在这些细胞中是否有基因表达曾经是最热门的议题。近年来,随着分子生物学分析技术的发展,人们对精子中 RNA 存在的兴趣又重新燃起,以满足在男性不孕不育研究中,找到一个不损伤睾丸或非侵入性诊断方法。本研究以基因系列表达分析技术 (serial analysis of gene expression,SAGE)再现了正常可生育男性成熟精子中 mRNA 的

关键词：成熟精子 mRNA 表达谱基因系列表达分析男性生殖

来源： cnki会议评论

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昆明犬成熟精子超微结构的研究

中国工作犬业 2007年第10期 11-13页

作者：万九生强京宁黎立光彭建国李细牯程鲁光汪斌徐虎公安部昆明警犬基地 650204

应用透射电镜技术,对3头昆明犬精子的超微结构进行了观察。结果表明,昆明犬精子头部呈卵圆形,长约5.05μm,宽约0.91μm。颈部和尾部横切近圆形。颈部很短,长约0.92μm,直径为0.63μm。尾部中段长约15.02μm,直径约0.86μm;轴丝为9+2型... 详细信息

应用透射电镜技术,对3头昆明犬精子的超微结构进行了观察。结果表明,昆明犬精子头部呈卵圆形,长约5.05μm,宽约0.91μm。颈部和尾部横切近圆形。颈部很短,长约0.92μm,直径为0.63μm。尾部中段长约15.02μm,直径约0.86μm;轴丝为9+2型。中段与主段套管式连接。终段轴丝为9×2+2形式。通过观察,没有发现昆明犬精子的独征。同时,冷冻对一些精子细胞膜和顶体造成损害,表现为细胞肿胀,头部和尾部主段、终段质膜变薄、皱褶、破损或丢失;顶体肿胀,顶体外膜囊泡化或不连续,个别出现顶体全脱;中段线粒体较完整,冷冻对昆明犬精子的损害并不十分严重。

关键词：成熟精子超微结构昆明犬透射电镜技术精子头部细胞膜顶体尾部

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纹藤壶精子发生和成熟精子的超微结构

动物学报 1999年第3期45卷 355-358页

作者：王艺磊张子平李少菁集美大学水产学院养殖系厦门361021 香港城市大学生物与化学系厦门大学海洋学系厦门361005

甲壳动物的精子形态各异.其中3个亚纲的精子具鞭毛,能运动,其它5个亚纲的精子无鞭毛且不运动.

关键词：精子发生成熟精子超微结构纹藤壶