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恒定链的多功能研究新进展

畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 1824-1833页

作者：陈芳芳栗中华朱志伟李锦春刘翠艳安徽农业大学动物科技学院合肥230036

恒定链(invariant chain,Ii)是重要的免疫分子。研究发现Ii不仅是MHCII类分子的伴侣分子,而且具有多种功能。本文首先概述了Ii的基本结构、主要功能、胞内组装和转运、Ii作为载体的应用。其次,归纳和总结了近几年关于Ii的最新研究进展:I... 详细信息

恒定链(invariant chain,Ii)是重要的免疫分子。研究发现Ii不仅是MHCII类分子的伴侣分子,而且具有多种功能。本文首先概述了Ii的基本结构、主要功能、胞内组装和转运、Ii作为载体的应用。其次,归纳和总结了近几年关于Ii的最新研究进展:Ii与MHC分子互相作用的功能结构域及其在细胞的定位特征、调节T和B等免疫细胞的功能与途径、Ii与巨噬细胞迁移因子相互作用从而启动炎症反应的信号通路和相应结构域;与Ii关联的多种酶类和生物活性因子及其作用特点、与Ii相关的疾病;基于Ii结构的疫苗载体及其增强免疫的机理;以及我国在畜禽、鱼类上的研究成果。最后,展望了Ii在理论研究和畜牧兽医领域实际应用的发展趋势。本文从宏观和微观方面进行阐述,了解、认识Ii在动物免疫中的多功能作用及其机理的科学知识和最新进展,为推动相关研究提供有益借鉴和参考。

关键词：恒定链多功能免疫调节疫苗载体

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恒定链辅助肿瘤免疫逃逸的研究进展

中国免疫学杂志 2015年第6期31卷 846-848页

作者：刘雪兰许发芝安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室合肥230036

恒定链（Invariant chain,Ii）属于Ⅱ型跨膜糖蛋白,在MHCⅡ类分子与抗原肽复合物的装配过程中发挥重要作用。在内质网中,Ii在calnexin辅助下形成三聚体,然后与MHCⅡ类分子的α和β链形成九聚体,占据Ⅱ类分子的抗原肽结合槽,阻止内源性... 详细信息

恒定链（Invariant chain,Ii）属于Ⅱ型跨膜糖蛋白,在MHCⅡ类分子与抗原肽复合物的装配过程中发挥重要作用。在内质网中,Ii在calnexin辅助下形成三聚体,然后与MHCⅡ类分子的α和β链形成九聚体,占据Ⅱ类分子的抗原肽结合槽,阻止内源性抗原肽的结合,与MHCⅡ类分子聚合后将其靶向定位到内体中。此外,Ii还能与MHCⅠ类分子结合,辅助MHCⅠ类分子进行抗原的交叉呈递[1]。

关键词： Ⅱ类分子恒定链肿瘤免疫逃逸抗原肽 Ⅱ型跨膜糖蛋白九聚体肽结合槽靶向定位内源性抗原递呈

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应用RACE法克隆鸽恒定链基因的研究

遗传 2008年第1期30卷 77-80页

作者：刘岗仲大莲刘雪兰余为一安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室合肥230036

为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE... 详细信息

为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE扩增延长该片段。最后根据全基因的序列设计上、下游引物,获得大小为1050bp的全长cDNA。比较核苷酸序列,鸽与鸡的Ii链同源性达到82.8%,而与人等其它动物的同源性则在52.0%以上;其中633bp的开放阅读框编码211个氨基酸残基的前体蛋白。推导和分析氨基酸序列表明,分子结构与鸡恒定链相似,其中有些氨基酸残基表现出较高的保守性。

关键词：鸽恒定链 RACE 克隆

鸡和疣鼻栖鸭Ia-相关的恒定链交叉免疫原性研究

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第4期31卷 462-466页

作者：刘生杰陈德宇张秋妍叶红朱茂英阜阳师范学院生物与食品工程学院安徽阜阳236037 阜阳师范学院信息工程学院食品系安徽阜阳236037 安徽省医学科学研究院安徽合肥230061

目的探索鸡和疣鼻栖鸭Ia-相关的恒定链(CIi和MDIi)的交叉免疫原性。方法用间接ELISA检测抗CIi小鼠血清与原核表达MDIi的反应性、抗MDIi小鼠血清与原核表达CIi的反应性;通过荧光免疫组织化学法鉴定抗CIi小鼠血清与疣鼻栖鸭脾组织MDIi的... 详细信息

目的探索鸡和疣鼻栖鸭Ia-相关的恒定链(CIi和MDIi)的交叉免疫原性。方法用间接ELISA检测抗CIi小鼠血清与原核表达MDIi的反应性、抗MDIi小鼠血清与原核表达CIi的反应性;通过荧光免疫组织化学法鉴定抗CIi小鼠血清与疣鼻栖鸭脾组织MDIi的荧光反应强度、抗MDIi小鼠血清与鸡肝组织CIi的荧光反应强度。结果抗MDIi小鼠血清与原核表达CIi的反应滴度为1∶8000,抗CIi小鼠血清与原核表达MDIi的反应滴度为1∶16 000;采用抗MDIi小鼠血清、抗CIi小鼠血清进行免疫荧光组织化学染色,均能检测异种鸟类组织内的Ii抗原,但荧光染色强度均弱于同种鸟类Ii抗原组织的荧光反应强度。结论 CIi和MDIi具有交叉免疫原性,CIi和MDIi的序列保守性是形成共同抗原表位的分子基础,从免疫学角度揭示了鸟类Ii的高度保守性。

关键词：疣鼻栖鸭鸡恒定链 ELISA 荧光免疫组织化学共同抗原

疣鼻栖鸭恒定链(MDIi)多克隆抗体制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第6期30卷 623-626页

作者：刘生杰朱茂英陈德宇吴超倪庆胜余为一阜阳师范学院生命科学学院安徽阜阳236037 安徽农业大学安徽省人畜共患病重点实验室安徽合肥230036

目的制备抗疣鼻栖鸭恒定链(MDIi)多克隆抗体,鉴定其与组织抗原MDIi的反应性。方法以PCR扩增获得MDIi序列构建原核表达载体pET-32a/MDIi,转化大肠杆菌进行表达;对表达产物鉴定后,免疫小鼠制备抗MDIi多克隆抗体;间接ELISA测定抗体效价,Wes... 详细信息

目的制备抗疣鼻栖鸭恒定链(MDIi)多克隆抗体,鉴定其与组织抗原MDIi的反应性。方法以PCR扩增获得MDIi序列构建原核表达载体pET-32a/MDIi,转化大肠杆菌进行表达;对表达产物鉴定后,免疫小鼠制备抗MDIi多克隆抗体;间接ELISA测定抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,间接ELISA检测抗体与疣鼻栖鸭组织MDIi的反应强度。结果成功构建了pET-32a/MDIi原核表达载体,诱导表达了相对分子质量(Mr)约40 000的包涵体形式的MDIi重组蛋白,免疫小鼠获得效价为1∶128 000的特异性多克隆抗体,抗体与疣鼻栖鸭组织中的MDIi反应滴度为1∶32 000。结论成功制备了高效价的特异性抗MDIi多克隆抗体,抗体与组织抗原有较强的免疫反应性。

关键词：疣鼻栖鸭恒定链多克隆抗体组织抗原

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恒定链分子结构与功能研究进展

安徽农业科学 2008年第7期36卷 2662-2663页

作者：王艳萍董林沈志强胡晓苗山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽合肥230031

综述恒定链(invariant chain,Ii chain)的分子结构、功能在体内的表达与分布及其与疾病的关系。

关键词：恒定链分子伴侣 MHC-Ⅱ

鸡恒定链功能片段跨物种增强小鼠对新城疫F2抗原免疫作用的研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2014年第5期42卷 33-38页

作者：王琛刘雪兰陈芳芳余为一安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室安徽合肥230036

【目的】研究恒定链（Invariant chain,Ii）功能片段作为载体的跨物种免疫增强作用及其潜在机制。【方法】构建基于鸡Ii功能片段与新城疫病毒抗原表位F2的嵌合体（Ii-F2、Cyt/Tm/Ii-key/F2/AP、Tm/Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2/AP、Ii-key/F... 详细信息

【目的】研究恒定链（Invariant chain,Ii）功能片段作为载体的跨物种免疫增强作用及其潜在机制。【方法】构建基于鸡Ii功能片段与新城疫病毒抗原表位F2的嵌合体（Ii-F2、Cyt/Tm/Ii-key/F2/AP、Tm/Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2）,将其定向克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta（DE3）并用IPTG诱导表达,嵌合体融合蛋白纯化后免疫小鼠,用ELISA法测定血清抗体效价。同时,分别构建含鸡Ii和小鼠MHCⅡ类分子基因的真核表达载体,并将其共转染COS7细胞,通过激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的共定位。【结果】用F2与Ii-key等Ii功能片段连接的融合蛋白免疫的试验组小鼠的抗体效价,较单独用F2抗原肽免疫的对照组小鼠产生的抗体效价提高了1.5~3倍。显微观察发现,鸡Ii和小鼠MHCⅡ分子在细胞内可以共定位。【结论】Ii具有跨越物种限制增强免疫的作用。

关键词：恒定链肽载体嵌合体异种免疫

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鸳鸯鸭恒定链两异构体组织转录模式研究

畜牧兽医学报 2014年第12期45卷 2034-2042页

作者：刘生杰吴超倪庆胜余为一阜阳师范学院生物与食品工程学院阜阳236041 安徽农业大学安徽省人畜共患病重点实验室合肥230036

为探索鸳鸯鸭恒定链(MDIi)两种异构体MDIi-1和MDIi-2在不同组织或器官中的转录模式,建立了检测MDIi-1和MDIi-2组织转录的实时相对定量PCR方法,检测并分析了MDIi-1和MDIi-2在不同组织或器官中的转录特点。结果显示MDIi-1在法氏囊底部的... 详细信息

为探索鸳鸯鸭恒定链(MDIi)两种异构体MDIi-1和MDIi-2在不同组织或器官中的转录模式,建立了检测MDIi-1和MDIi-2组织转录的实时相对定量PCR方法,检测并分析了MDIi-1和MDIi-2在不同组织或器官中的转录特点。结果显示MDIi-1在法氏囊底部的转录水平为各组织或器官中最低(设为校正器);和校正器比较,MDIi-1在脾和小肠黏膜呈最高水平转录,而法氏囊颈部、肝、肾、胸腺和血液也呈较高水平转录,其他器官均低水平转录;MDIi-2在脾、法氏囊颈部和小肠黏膜也呈超过校正器的高水平转录,胸腺、肺和肾的转录水平仅略低于校正器,其他组织或器官转录水平都远低于校正器,呈极低水平转录。同一组织或器官中MDIi-1转录水平远高于MDIi-2,但MDIi-1和MDIi-2在所有被检组织或器官中转录具有很高的相关性,相关性系数达0.850 7。MDIi-1和MDIi-2共转录于所有被检组织或器官中,每一组织或器官中MDIi-1是主要转录形式,在所有被检组织或器官中两异构体均高转录于具有免疫防御功能的器官或组织,MDIi-1和MDIi-2差异性转录的试验结果为后续两异构体功能机制和基于MDIi的基因疫苗研究提供了基础资料。

关键词：鸳鸯鸭恒定链异构体实时相对定量PCR 特异性转录

应用Pull-down方法获得鸡B-LB分子中结合恒定链的活性片段

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农业生物技术学报 2016年第10期24卷 1474-1481页

作者：储稳罗兰芳吕邑旺余为一陈芳芳安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室

本研究旨在探明鸡(Gallus gallus)主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子(B分子)中与恒定链(invariant chain,Ii)结合的活性片段,以了解和深入研究Ⅱ类分子与Ii在递呈抗原肽中的作用机理。从实验室保存的... 详细信息

本研究旨在探明鸡(Gallus gallus)主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子(B分子)中与恒定链(invariant chain,Ii)结合的活性片段,以了解和深入研究Ⅱ类分子与Ii在递呈抗原肽中的作用机理。从实验室保存的B-LB基因的c DNA克隆了3个结构片段分别插入原核和真核表达质粒,再将其分别转染或者与Ii共转染工程菌Rosetta(DE3),诱导表达后先后用亲和层析和拉下法(pull-down)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测其纯度和形成的复合物。然后用免疫印迹(Western blot)验证复合物的性质以及真核表达验证这些片段在细胞内的表达和定位。首先,构建的3个重组质粒p GEX-4T-1-B-LB-Sβ1、p GEX-4T-1-B-LB-β1和p GEX-4T-1-B-LB-β2TC均能单一表达目的蛋白B-LB-Sβ1、B-LB-β1和B-LB-β2TC,并被纯化。其次,在共表达和pull-down中,B-LB-Sβ1和B-LB-β1能够与Ii形成复合物,而B-LB-β2TC不能与Ii结合,因为免疫印迹的结果表明,特异性抗体能识别在poll-down中被结合的这两个目的蛋白。最后在真核表达系统中,也证实B-LB-Sβ1、B-LB-β1能保持B-L分子在293T细胞的浆膜系统定位的功能,而B-LB-β2TC却丧失了该定位功能。本研究结果首次提供了Ⅱ类分子结合Ii的活性片段的证据。

关键词：恒定链 B-LB片段 Pull-down 表达复合物