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绿原酸通过调控miR-223/NLRP3轴减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的机制

中南大学学报（医学版） 2022年第3期47卷 280-288页

作者：刘畅程晓丹孙家安张少华张强郑州大学附属郑州中心医院急诊科郑州450007 中山大学附属第七医院急诊科广东深圳518107

目的:绿原酸具有抗菌、抗炎、抗病毒等多种生理活性,研究显示绿原酸可缓解急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠机体炎症反应,但具体作用机制尚不明确。本研究旨在探讨绿原酸是否通过调控微rna-223(microrna-223,miR-223)/核苷酸结合... 详细信息

目的:绿原酸具有抗菌、抗炎、抗病毒等多种生理活性,研究显示绿原酸可缓解急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠机体炎症反应,但具体作用机制尚不明确。本研究旨在探讨绿原酸是否通过调控微rna-223(microrna-223,miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)轴来减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠ALI。方法:将SPF级BALBc雄性小鼠随机分为对照组、模型组、绿原酸组、绿原酸+miR-223阴性对照(miR-223 NC)组、绿原酸+miR-223抑制物(miR-223 antagomir)组,每组10只,除对照组,其余各组均通过气道滴入4 mg/kg的LPS制备ALI小鼠模型,造模成功后绿原酸组小鼠使用绿原酸(100 mg/kg)连续灌胃7 d。绿原酸+miR-223 NC组、绿原酸+miR-223 antagomir组每天灌胃100 mg/kg的绿原酸后分别经尾静脉注射10μL的miR-223 NC(0.5 nmol/μL)、miR-223 antagomir(0.5 nmol/μL),连续7 d。对照组和模型组用生理盐水替代。取小鼠肺组织,测定肺湿/干重比(W/D);收集小鼠肺泡灌洗液,采用ELISA试剂盒测定炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的水平;于光学显微镜下统计嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)、淋巴细胞、中性粒细胞的数量;行HE染色后观察小鼠肺组织病理学变化并进行肺损伤评分;采用qRT-PCR法测定小鼠肺组织中miR-223的表达水平,蛋白质印迹法测定小鼠肺组织中NLRP3蛋白质的表达水平;采用荧光素酶报告实验分析miR-223与NLRP3的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组小鼠肺W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平显著升高(均P<0.05),肺组织炎症细胞浸润严重,肺泡空间明显增加,肺泡壁显著增厚,肺泡灌洗液中EOS、淋巴细胞、中性粒细胞数量显著增加(均P<0.05),肺组织中miR-223表达水平显著降低、NLRP3蛋白质表达水平显著升高(均P<0.05)。与模型组相比,绿原酸组、绿原酸+miR-223 NC组、绿原酸+miR-223 antagomir组小鼠肺W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平显著降低(均P<0.05),肺组织损伤减轻,肺泡灌洗液中EOS、淋巴细胞、中性粒细胞数量显著减少(均P<0.05),肺组织中miR-223表达水平显著升高,NLRP3蛋白质表达水平显著降低(均P<0.05)。与绿原酸组相比,绿原酸+miR-223 antagomir组小鼠肺W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平显著升高(均P<0.05),肺组织损伤加重,肺泡灌洗液中EOS、淋巴细胞、中性粒细胞数量显著增加(均P<0.05),肺组织中miR-223表达水平显著降低,NLRP3蛋白质表达水平显著升高(均P<0.05)。荧光素酶报告实验结果显示miR-223与NLRP3存在靶向关系。结论:绿原酸可能通过提高miR-223水平,靶向抑制NLRP3表达,降低LPS诱导的ALI小鼠炎症反应,缓解肺组织病理损伤。

关键词：绿原酸急性肺损伤微RNA-233 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 脂多糖

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