绿原酸通过调控miR-223/NLRP3轴减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的机制

作     者：刘畅 程晓丹 孙家安 张少华 张强 LIU Chang;CHENG Xiaodan;SUN Jia’an;ZHANG Shaohua;ZHANG Qiang

作者机构：郑州大学附属郑州中心医院急诊科郑州450007 中山大学附属第七医院急诊科广东深圳518107 

出 版 物：《中南大学学报（医学版）》 (Journal of Central South University ：Medical Science)

年 卷 期：2022年第47卷第3期

页      面：280-288页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：河南省医学科技攻关计划联合共建项目(LHGJ20191051) 河南省高等学校重点科研项目(20B320024)。 

主　　题：绿原酸 急性肺损伤 微RNA-233 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 脂多糖 

摘      要：目的:绿原酸具有抗菌、抗炎、抗病毒等多种生理活性,研究显示绿原酸可缓解急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠机体炎症反应,但具体作用机制尚不明确。本研究旨在探讨绿原酸是否通过调控微RNA-223(microRNA-223,miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)轴来减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠ALI。方法:将SPF级BALBc雄性小鼠随机分为对照组、模型组、绿原酸组、绿原酸+miR-223阴性对照(miR-223 NC)组、绿原酸+miR-223抑制物(miR-223 antagomir)组,每组10只,除对照组,其余各组均通过气道滴入4 mg/kg的LPS制备ALI小鼠模型,造模成功后绿原酸组小鼠使用绿原酸(100 mg/kg)连续灌胃7 d。绿原酸+miR-223 NC组、绿原酸+miR-223 antagomir组每天灌胃100 mg/kg的绿原酸后分别经尾静脉注射10μL的miR-223 NC(0.5 nmol/μL)、miR-223 antagomir(0.5 nmol/μL),连续7 d。对照组和模型组用生理盐水替代。取小鼠肺组织,测定肺湿/干重比(W/D);收集小鼠肺泡灌洗液,采用ELISA试剂盒测定炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的水平;于光学显微镜下统计嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)、淋巴细胞、中性粒细胞的数量;行HE染色后观察小鼠肺组织病理学变化并进行肺损伤评分;采用qRT-PCR法测定小鼠肺组织中miR-223的表达水平,蛋白质印迹法测定小鼠肺组织中NLRP3蛋白质的表达水平;采用荧光素酶报告实验分析miR-223与NLRP3的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组小鼠肺W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平显著升高(均P0.05),肺组织炎症细胞浸润严重,肺泡空间明显增加,肺泡壁显著增厚,肺泡灌洗液中EOS、淋巴细胞、中性粒细胞数量显著增加(均P0.05),肺组织中miR-223表达水平显著降低、NLRP3蛋白质表达水平显著升高(均P0.05)。与模型组相比,绿原酸组、绿原酸+miR-223 NC组、绿原酸+miR-223 antagomir组小鼠肺W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平显著降低(均P0.05),肺组织损伤减轻,肺泡灌洗液中EOS、淋巴细胞、中性粒细胞数量显著减少(均P0.05),肺组织中miR-223表达水平显著升高,NLRP3蛋白质表达水平显著降低(均P0.05)。与绿原酸组相比,绿原酸+miR-223 antagomir组小鼠肺W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平显著升高(均P0.05),肺组织损伤加重,肺泡灌洗液中EOS、淋巴细胞、中性粒细胞数量显著增加(均P0.05),肺组织中miR-223表达水平显著降低,NLRP3蛋白质表达水平显著升高(均P0.05)。荧光素酶报告实验结果显示miR-223与NLRP3存在靶向关系。结论:绿原酸可能通过提高miR-223水平,靶向抑制NLRP3表达,降低LPS诱导的ALI小鼠炎症反应,缓解肺组织病理损伤。