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外泌体源性miR-124对创伤性脑损伤急性期小胶质细胞活化状态的作用研究

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中华神经医学杂志 2018年第12期17卷 1189-1194页

作者：杨永祥叶玉勤苏鑫洪张欣孔垂广白威贺晓生空军军医大学(第四军医大学)西京医院神经外科西安710032

目的探讨外泌体源性微小rna(miR)-124对创伤性脑损伤(TBI)大鼠急性期损伤区脑组织中小胶质细胞活化状态的作用,为TBI后神经炎症的干预提供实验依据.方法 (1)将体外培养的HEK293细胞分为miR-124转染组和对照组,分别转染载有miR-124的质... 详细信息

目的探讨外泌体源性微小rna(miR)-124对创伤性脑损伤(TBI)大鼠急性期损伤区脑组织中小胶质细胞活化状态的作用,为TBI后神经炎症的干预提供实验依据.方法 (1)将体外培养的HEK293细胞分为miR-124转染组和对照组,分别转染载有miR-124的质粒和空质粒,2~3周后分离出单克隆细胞系,继续培养2周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测2组细胞miR-124的含量;应用美国系统生物科技(SBI)试剂盒从2组细胞上清液中提取外泌体,电镜下观察外泌体的形态,应用Western blotting检测2组外泌体表面标记分子CD63的表达,RT-PCR检测2组外泌体内miR-124的含量.(2)60只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(n=12)、TBI组(n=24)和外泌体组(n=24),后2组大鼠应用控制性皮层撞击(CCl)法建立TBI模型.造模后24 h,外泌体组大鼠通过尾静脉注入外泌体(3×109个微粒),假手术组和TBI组大鼠注入等量溶剂.造模后3 d,应用RT-PCR检测3组大鼠损伤区脑组织miR-124的表达,流式细胞术(FCM)检测脑组织Iba-1^+/CD32+和Iba-1^+/CD206^+小胶质细胞所占百分比,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测脑组织促炎因子白介素(IL)-1、IL-6和抑炎因子IL-4、IL-10的表达.结果 (1)RT-PCR检测显示miR-124转染组细胞miR-124的表达高于对照组,差异有统计学意义(P微小颗粒,并有明显的膜性结构;Western blotting检测显示miR-124转染组外泌体表面标记分子CD63的表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P124转染组外泌体miR-124的含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P124的表达高于TBI组和假手术组,差异有统计学意义(P124可以促进TBI急性期损伤脑组织中小胶质细胞由M1型向M2型转化,从而减轻TBI的神经炎症.

关键词：外泌体微小rna-124 创伤性脑损伤小胶质细胞细胞活化

长链非编码rna XIST调控miR-124/STAT3轴参与糖尿病肾病纤维化的机制

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中国老年学杂志 2023年第24期43卷 6101-6108页

作者：赵积海张喜俊董效珍牛让花杨红嘉峪关市第一人民医院内分泌科甘肃嘉峪关735100 嘉峪关市第一人民医院检验科甘肃嘉峪关735100

目的探讨长链非编码(lnc)rna-XIST对微小rna(miR)-124/转录激活因子(STAT)3信号轴的调控作用及对糖尿病肾病(DKD)小鼠肾纤维化的影响。方法收集DKD患者肾穿刺活检标本及正常肾组织标本各6例,用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测... 详细信息

目的探讨长链非编码(lnc)rna-XIST对微小rna(miR)-124/转录激活因子(STAT)3信号轴的调控作用及对糖尿病肾病(DKD)小鼠肾纤维化的影响。方法收集DKD患者肾穿刺活检标本及正常肾组织标本各6例,用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测lncrna中的链锁X染色体特异性失活转录本(lncrna-XIST)、miR-124表达。取C57小鼠随机分为正常对照组、模型组、Si-lncrna-XIST(lncrna-XIST低表达腺病毒)组、Si-l-NC(Si-lncrna-XIST阴性对照)组、agomiR-124(miR-124激动剂)组、ago-NC(agomiR-124阴性对照)组,每组10只。除正常对照组外,其余各组均采用高脂饮食+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立小鼠DKD模型。检测小鼠24 h尿蛋白、血糖、血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平;电镜观察及Masson染色检测肾组织结构病变及纤维化进程;qRT-PCR法检测lncrna-XIST、miR-124表达;免疫组化法检测STAT3及纤连蛋白(FN)在肾组织中分布;双荧光素酶报告基因技术检测lncrna-XIST和miR-124之间是否存在直接作用;高糖条件下培养小鼠永生化足细胞,将Si-lncrna-XIST及Si-lncrna-NC,分别与miR-124低表达腺病毒(si-miR-124)及其阴性对照(Si-NC)共转染,分为空白组、高糖组、Si-lncrna-XIST+si-miR-124组、Si-lncrna-XIST+Si-NC组、Si-l-NC+si-miR-124组、Si-l-NC+Si-NC组,各组均于转染后24 h,qRT-PCR法检测lncrna-XIST、miR-124表达,Hoechst33258染色法检测足细胞损伤凋亡;免疫荧光法检测足细胞STAT3及FN阳性表达;Western印迹检测间质转分化(EMT)相关指标[转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)、纤维细胞特异蛋白(FSP)-1]相对表达水平。结果人DKD肾组织标本中,lncrna-XIST呈高表达,miR-124呈低表达状态,且与正常肾组织相比有明显差异(Prna-XIST沉默或miR-124上调后,小鼠肾结构损伤及纤维化沉积均明显减轻,尿蛋白、血清SCr、BUN、血糖水平、STAT3及FN阳性表达均明显低于模型组(Prna-XIST表达、STAT3、FN、TGF-β1、CollagenⅣ、FSP-1等EMT及纤维化相关指标表达明显升高,miR-124表达明显降低(P124可逆转Si-lncrna-XIST抑制足细胞凋亡及EMT、纤维化作用。双荧光素酶报告试验证实lncrna-XIST与miR-124存在靶向调控关系。结论沉默lncrna-XIST可能通过上调miR-124表达,抑制STAT3表达,进而降低足细胞损伤及EMT进程,来发挥抗DKD肾损伤及纤维化作用。

关键词：长链非编码rna-XIST 糖尿病肾病微小rna-124 转录激活因子3 纤维化

miR-124和miR-765对脑挫裂伤合并肺部感染预后的预测价值

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中华医院感染学杂志 2023年第20期33卷 3080-3084页

作者：曹金华孙芳芳彭国琴钱雅萍蒋晓金中国人民武装警察部队海警总队医院外三科浙江嘉兴314000 嘉兴市第一医院重症医学科浙江嘉兴314001

目的探讨微小rna-124(miR-124)、miR-765对脑挫裂伤合并肺部感染患者预后的预测价值。方法选取2019年1月-2021年5月中国人民武装警察部队海警总队医院治疗的脑挫裂伤合并肺部感染患者73例纳入研究组,并募集同期脑挫裂伤无肺部感染者85... 详细信息

目的探讨微小rna-124(miR-124)、miR-765对脑挫裂伤合并肺部感染患者预后的预测价值。方法选取2019年1月-2021年5月中国人民武装警察部队海警总队医院治疗的脑挫裂伤合并肺部感染患者73例纳入研究组,并募集同期脑挫裂伤无肺部感染者85例为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测患者血浆miR-124和miR-765水平;根据住院期间神经功能恢复情况,分为良好组和不良组;根据住院期间病死情况,分为存活组和病死组;分析血浆miR-124和miR-765在脑挫裂伤合并肺部感染患者预后中的预测价值。结果研究组患者血浆miR-124、miR-765水平高于对照组(P124、miR-765水平和入院时急性生理和慢性健康状况评估Ⅱ(APACHEⅡ)评分低于不良组,入院时格拉斯哥昏迷(GCS)评分高于不良组(P124、miR-765、入院时APACHEⅡ评分及入院时GCS评分预测患者神经功能恢复情况曲线下面积(AUC)分别为0.749、0.780、0.603和0.761,上述指标联合预测AUC为0.880,敏感度为83.33%,特异度为83.72%;存活组患者血浆miR-124、miR-765水平和入院时APACHEⅡ评分低于病死组,入院时GCS评分高于病死组(P124、miR-765、入院时APACHEⅡ评分及入院时GCS评分预测患者存活的AUC分别为0.722、0.774、0.794和0.763,上述指标联合预测AUC为0.914,敏感度为76.47%,特异度为98.21%。结论脑挫裂伤合并肺部感染患者血浆miR-124、miR-765水平异常升高,对患者预后有良好的预测价值。

关键词：脑挫裂伤肺部感染微小rna-124 微小rna-765 预后预测价值

老年帕金森病患者血清miR-124、miR-494表达及其临床意义

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中华行为医学与脑科学杂志 2021年第4期30卷 294-298页

作者：李江涛尹永锋王润青张平赵杰刘荣丽陈园园郑州大学附属郑州中心医院神经内科 450000 新乡医学院第一附属医院神经内科 453100

目的探讨老年帕金森病(Parkinson disease,PD)患者血清微小rna-124(miR-124)、微小rna-494(miR-494)表达水平及其临床意义。方法选取2018年3月~2020年4月在郑州大学附属郑州中心医院住院治疗的90例PD患者(PD组);同期选择在医院体检中心... 详细信息

目的探讨老年帕金森病(Parkinson disease,PD)患者血清微小rna-124(miR-124)、微小rna-494(miR-494)表达水平及其临床意义。方法选取2018年3月~2020年4月在郑州大学附属郑州中心医院住院治疗的90例PD患者(PD组);同期选择在医院体检中心检查且与PD患者年龄、性别相匹配的100名非PD老年人作对照组。所有研究对象空腹12 h后取清晨静脉血4 ml,采用帕金森等级量表(unified Parkinson disease rating scale,UPDRS)对所有PD组患者从精神状态、行为和情感、生活质量、运动检查进行评分,利用帕金森病Hoehn-Yahr分级量表对PD患者进行分级;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测血清miR-124和miR-494表达水平;作ROC曲线判断miR-124、miR-494对PD患者的诊断价值。结果UPDRS评分≤60分的PD患者Hoehn-Yahr分级明显低于UPDRS>60分的患者[(2.47±0.43)分,(3.42±0.47)分],差异有统计学意义(t=9.055,P124、miR-494表达水平差异无统计学意义[miR-124:(0.72±0.14),(0.70±0.12);miR-494:(1.17±0.19),(1.18±0.22)](t=0.633,0.230,P=0.529,0.819);与对照组相比,PD组血清miR-124表达下调[(0.71±0.20),(1.05±0.24)],miR-494表达上调[(1.18±0.26),(0.96±0.22)](t=10.542,6.315,均P124、miR-494诊断PD的曲线下面积(AUC)分别为0.847,0.760,截断值分别为0.901,1.126,灵敏度分别为86.67%、61.11%,特异度分别为75.03%、79.00%;二者联合诊断PD的AUC为0.898,灵敏度和特异度分别为85.56%、85.00%。结论PD患者血清miR-124呈低表达,miR-494呈高表达,提示二者的水平变化可能与PD的发生、发展有关。二者均对PD有一定的诊断价值,且联合诊断价值更高。

关键词：帕金森病老年人微小rna-124 微小rna-494 诊断价值

Microrna-124通过下调TRAF6降低海马区促炎因子水平改善单程长时应激模型大鼠的行为学异常

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MicroRNA-124通过下调TRAF6降低海马区促炎因子水平改善单程长时...

作者：陈耀中国医科大学

学位级别：硕士

目的:探究微小rna-124-3p(mi R-124)通过结合肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)抑制中枢神经炎症,上调突触相关蛋白的表达从而影响神经元形态和功能,最终改善PTSD大鼠恐惧记忆消退障碍和行为异常的分子机制,为治疗PTSD开辟新的防治靶点... 详细信息

目的:探究微小rna-124-3p(mi R-124)通过结合肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)抑制中枢神经炎症,上调突触相关蛋白的表达从而影响神经元形态和功能,最终改善PTSD大鼠恐惧记忆消退障碍和行为异常的分子机制,为治疗PTSD开辟新的防治靶点提供理论依据。研究方法:(1)实验分组:将78只8-12周龄的雄性(Sprague-Dawley,SD)大鼠随机分成4组:对照组(Control)24只、应激组(SPS)24只、mi R-124组(SPS+mi R-124)15只和mi R-NC组(SPS+mi R-NC)15只。(2)PTSD模型制备:采用单程长时应激(SPS)的方法制备PTSD模型,mi R-124组及mi R-NC组的大鼠通过侧脑室(注射位置:A/P:-1.2 mm,M/L:+1.8 mm,D/V:-4 mm)分别注射Lv-mi R-124或Lv-mi R-NC。(3)行为学实验:采用旷场实验、高架十字迷宫实验,强迫游泳实验和条件恐惧实验检测各组大鼠的行为学改变。(4)免疫荧光染色或Western blotting:检测各组大鼠海马中TRAF6、NF-κB p65、IL-1β、IL-6、TNF-α、i NOS、IL-10、PSD95和Synapsin I的表达水平。(5)RT-q PCR:检测Control及SPS组大鼠海马中TRAF6 m rna和mi R-124-3p的表达水平。(6)细胞实验:利用神经生长因子诱导PC-12细胞成神经元样细胞,并进行如下实验:(1)mi R-124病毒感染神经元样细胞,通过Western blotting检测细胞中TRAF6蛋白表达水平;(2)si rna-TRAF6转染神经元样细胞,通过Western blotting检测细胞中NF-κB p65蛋白表达水平。(7)高尔基染色法:检测各组大鼠海马区神经元树突棘密度和各类型树突棘的数量百分比。(8)透射电镜:观察各组大鼠海马区突触的超微结构。(9)双荧光素酶报告基因实验和FISH实验:验证mi R-124-3p和TRAF6的结合及共定位情况。结果:(1)SPS模型大鼠海马组织中mi R-124表达水平显著低于Control组,而TRAF6表达水平显著升高。(2)在行为学实验中,侧脑室注射mi R-124显著改善SPS模型大鼠的抑郁样、焦虑样行为和记忆损害等异常。(3)SPS模型大鼠海马中TRAF6和NF-κB p65的表达水平显著高于Control组,侧脑室注射mi R-124显著降低这两种蛋白的表达水平。(4)SPS模型大鼠海马中IL-1β、IL-6、TNF-α、i NOS的水平显著高于Control组,而IL-10的表达水平显著降低。侧脑室注射mi R-124能显著逆转这些炎性因子的表达。(5)SPS模型大鼠海马中PSD95和Synapsin I表达水平显著低于Control组,侧脑室注射mi R-124能显著升高这两种蛋白的表达。(6)SPS模型大鼠海马CA1区中神经元树突棘密度和成熟树突棘比例显著低于Control组,侧脑室注射mi R-124能逆转该趋势。(7)透射电镜结果显示SPS模型大鼠海马神经元PSD厚度显著低于Control组,侧脑室注射mi R-124能逆转该趋势。(8)双荧光素酶报告基因检测表明,TRAF6和mi R-124存在靶向结合位点;FISH实验结果显示,TRAF6和mi R-124均表达于海马神经元。结论:mi R-124可以显著减轻SPS大鼠的PTSD样行为,此作用可能与mi R-124通过靶向结合TRAF6负向调控NF-κB信号通路从而降低大鼠海马区促炎性细胞因子水平进而影响神经元形态和功能实现。

关键词：创伤后应激障碍神经炎症微小rna-124 肿瘤坏死因子受体相关因子6 海马

大鼠脑缺血再灌注中microrna-124表达变化与细胞自噬的关系

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大鼠脑缺血再灌注中microRNA-124表达变化与细胞自噬的关系

作者：王彤华北理工大学

学位级别：硕士

目的探讨microrna-124在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中调控细胞自噬的机制。方法选取重量250-280 g之间的8周龄雄性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型。实验大鼠随机分为对照组、假手术组(sham组)、脑... 详细信息

目的探讨microrna-124在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中调控细胞自噬的机制。方法选取重量250-280 g之间的8周龄雄性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型。实验大鼠随机分为对照组、假手术组(sham组)、脑缺血再灌注组(CI/R组)(分再灌注3h,6h,12h,24h)、CI/R+mirna-124激动剂组(CI/R+miR124 agomir组)、CI/R+mirna-124抑制剂组(CI/R+miR124 antagomir组)、CI/R+mirna对照组(CI/R+miR-control组)及STAT3抑制剂组(STAT3 inhibitor组)和STAT3对照组。运用TTC染色和Zea Longa神经功能缺损评分法评估造膜效果,HE染色检测大鼠脑组织病理学改变,采用RT-qPCR技术检测大鼠脑组织microrna-124表达变化,运用western blot技术及免疫组化方法分析大鼠脑组织中细胞自噬相关蛋白的表达及分布,采用荧光素酶报告基因技术验证microrna-124的作用靶点。结果1 microrna-124在神经细胞中有一定表达(1.00±0.10),且随脑缺血再灌注不同时间点呈现动态变化:于大鼠脑缺血再灌注3h即开始明显增加(2.86±0.40),再灌注12h达峰值(6.68±0.78);Western blot结果显示再灌注3h,Beclin1(0.946±0.010)、LC3II/LC3I(0.535±0.006)均明显增加,于再灌注24h达最高。Bcl-2在再灌注3h时(0.704±0.011)显著增加,至再灌注12小时(1.286±0.037)达峰值,之后开始下降(0.815±0.002)。免疫组化显示,Beclin1、LC3和Bcl-2主要分布在细胞质;HE染色显示,与对照组神经缺血细胞阳性数(0.40±0.55)比较,再灌注3h组神经缺血细胞数(4.00±0.70)明显增多,差异有统计学意义(P124 agomir组中神经功能缺损评分(1.00±0.00 vs 3.00±0.00)和脑组织切片神经缺血细胞计数(4.00±1.00 vs 14.33±1.15)均明显降低(P124 antagomir组结果相反。3与STAT3阴性对照比较,STAT3-WT组荧光强度明显降低(P124 agomir组中STAT3(0.426±0.012vs 0.800±0.029)、p-STAT3(0.140±0.019 vs 0.736±0.036)水平均明显降低(Prna-124上调自噬的作用减弱,STAT3inhibitor组与miR-124 agomir组相比,Bcl-2表达水平明显降低(0.769±0.076 vs0.436±0.021)(Prna-124通过作用STAT3提高细胞自噬水平,达到神经细胞保护作用。为临床治疗脑缺血再灌注损伤提供了新的思路和方向。图27幅;表17个;参148篇。

关键词：脑缺血再灌注损伤微小rna-124 信号转导与转录激活因子3 细胞自噬自噬微管相关蛋白轻链3 Beclin1

大鼠脑缺血再灌注早期microrna-124表达变化与细胞焦亡的关系

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大鼠脑缺血再灌注早期microRNA-124表达变化与细胞焦亡的关系

作者：李敬敬华北理工大学

学位级别：硕士

目的探讨micro rna-124在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其对细胞焦亡的调控机制。方法选取8周龄雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组(control组)、假手术组(sham组)、脑缺血再灌注组(分再灌注3、6、12、24小时)、溶剂对照组(NC组)、mic... 详细信息

目的探讨micro rna-124在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其对细胞焦亡的调控机制。方法选取8周龄雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组(control组)、假手术组(sham组)、脑缺血再灌注组(分再灌注3、6、12、24小时)、溶剂对照组(NC组)、micro rna-124激动剂组(ago-mi rna-124组)、micro rna-124抑制剂组(antago-mi rna-124组)、STAT3抑制剂组(S31-201组),每组8只。采用改良Zea-Longa线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。运用HE、TTC染色和神经功能评分法在细胞、组织、行为学水平对脑损伤程度进行评估;运用q RT-PCR技术分析脑组织中micro rna-124相对表达变化;采用荧光素酶报告基因技术和Western blot技术验证micro rna-124下游靶基因(STAT3);运用免疫组化和Western blot技术进一步分析脑组织中焦亡相关蛋白Caspase-1、Gasdermin D和促炎因子IL-1β、IL-18的表达及分布。结果1与正常对照组比较,假手术组的神经功能评分、micro rna-124及细胞焦亡相关蛋白的表达量无明显差异,模型组不同时间点的神经功能评分、micro rna-124及细胞焦亡相关蛋白前体及活性体的表达量均明显升高(Prna-124的表达量于再灌注后12小时达高峰,24小时下降,Caspase-1、IL-18前体及活性体的表达量在24小时内呈现递增趋势(Prna-124高表达组的脑梗死面积明显减小(17.37±1.47 vs38.30±3.44,Prna-124抑制剂组的上述指标均明显升高(Prna-124+野生型STAT3质粒组细胞中萤光素酶活性明显下降(0.50±0.02 vs 1.00±0.05,Prna-124+突变型STAT3质粒组的荧光素酶活性未出现明显变化(0.95±0.03 vs 1.00±0.04,P>0.05);Western blot实验结果显示,与溶剂对照组比较,micro rna-124高表达组STAT3及p-STAT3的表达量均明显下降(0.27±0.02 vs 0.47±0.02;0.38±0.02 vs 0.46±0.03,Prna-124可通过负向调控STAT3降低脑缺血再灌注损伤中细胞焦亡的发生进而发挥神经保护作用,为micro rna-124应用于临床治疗脑缺血再灌注损伤提供新的靶点。图31幅;表14个;参140篇。

关键词：脑缺血再灌注损伤细胞焦亡微小rna-124 信号转导和转录激活因子3

血清Lncrna MALAT1和microrna-124水平检测对非小细胞肺癌患者预后的评估价值

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现代肿瘤医学 2024年第7期32卷 1254-1259页

作者：梁亚海李金媚彭晓霞张丽花刘美莲郑伟珍杨志雄赖振南广东医科大学附属医院肺部肿瘤专科广东湛江524000

目的:探究长链非编码rna-转移相关肺腺癌转录本1(Lncrna MALAT1)和微小rna-124(microrna-124)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的预测效能。方法:选取2020年06月至2022年06月我院收治的124例NSCLC患者作为研究对象,入院后,收集患者的病历... 详细信息

目的:探究长链非编码rna-转移相关肺腺癌转录本1(Lncrna MALAT1)和微小rna-124(microrna-124)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的预测效能。方法:选取2020年06月至2022年06月我院收治的124例NSCLC患者作为研究对象,入院后,收集患者的病历资料,检测入院时外周血Lncrna MALAT1、microrna-124的相对表达量。电话随访12个月记录患者的死亡率,分为生存组和死亡组,分析NSCLC患者预后的影响因素,评估血清Lncrna MALAT1、microrna-124对NSCLC患者预后的预测效能。结果:死亡组患者的IV期占比及Lncrna MALAT1相对表达量高于生存组,microrna-124相对表达量低于生存组。Logistic遂步分析显示,病理分期IV期(OR=12.342,95%CI:4.295~36.765)、Lncrna MALAT1(OR=5.371,95%CI:1.836~15.714)及microrna-124(OR=0.257,95%CI:0.089~0.752)是NSCLC患者死亡的影响因素(Prna MALAT1与microrna-124呈负相关(Prna MALAT1及microrna-124单一及联合预测NSCLC患者预后的灵敏度分别为0.741(95%CI:0.601~0.846)、0.759(95%CI:0.621~0.861)、0.815(95%CI:0.682~0.903),特异度分别为0.825(95%CI:0.705~0.906)、0.762(95%CI:0.635~0.856)、0.841(95%CI:0.723~0.917),曲线下面积(AUC)分别为0.781、0.760、0.839。联合预测效能更高(Prna MALAT1及microrna-124可用于预测NSCLC患者的预后,且预测效能良好。

关键词：非小细胞肺癌长链非编码rna 转移相关肺腺癌转录本1 微小rna-124 预后预测

miR-124通过调控早期生长反应因子1对紫杉醇致神经病理性疼痛的机制研究

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环境与健康杂志 2024年第9期41卷 768-776,F0003页

作者：王文康李恒昌李湘莲冯杜杭张汉裕张庆文朱瑞燕侯春玲广州市白云区第二人民医院麻醉科广东510450 广州市第一人民医院麻醉科

目的探讨微小rna-124(microrna-124,miR-124)的表达对紫杉醇诱导的神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)的影响机制,以及其对早期生长反应因子1(early growth response 1,EGR1)的调控机制。方法将P12细胞分别暴露于0μmol/L(对照)、0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L的紫杉醇溶液培养48 h;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)PCR实验、双荧光素酶实验以及蛋白质免疫共沉淀实验检测miR-124和EGR1的mrna的表达以及两者之间的关系。将50只8~10周龄SD雄性大鼠分别在第1天、第3天、第5天、第7天腹腔注射2 mg/kg的紫杉醇,构建大鼠NPP模型;将大鼠随机分为假手术组、模型组、对照(agomiR-124-NC+pcDNA3.1-EGR1-NC)组、激动剂(agomiR-124)组、过表达(pcDNA3.1-EGR1)组,每组10只;其中,假手术组大鼠在造模过程中腹腔注射等剂量的生理盐水;在造模成功后,对照组大鼠尾静脉注射agomiR-124-NC+pcDNA3.1-EGR1-NC;激动剂组大鼠尾静脉注射agomiR-124+pcDNA3.1-EGR1;过表达组大鼠尾静脉注射agomiR-124+pcDNA3.1-EGR1,每日注射一次,连续注射14 d。测定大鼠的械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TdT-mediated dUTPnick end labelling,TUNEL)染色检测脊髓组织中神经元的细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-4和IL-10的水平;免疫荧光检测脊髓组织中小胶质细胞的表型转换;采用Western blot法检测各组脊髓组织中EGR1蛋白的表达。结果在紫杉醇诱导的P12细胞损伤模型中,miR-124的表达明显降低(均Prna的表达明显升高(均P124靶向调控EGR1的表达;动物实验中,与假手术组相比,模型组、对照组、激动剂组、过表达组大鼠的MWT和TWL、脊髓组织中M2型小胶质细胞的比例以及脊髓组织Bcl-2的表达明显降低(P0.05)。结论在紫杉醇诱导的神经病理性疼痛模型中,miR-124的表达明显降低,EGR1 mrna的表达明显升高,miR-124靶向EGR1的表达,过表达miR-124后能明显促进脊髓组织中小胶质细胞向M2型转换,降低神经元的细胞凋亡率,减轻动物脊髓组织的病理损伤,缓解其疼痛。

关键词：微小rna-124 早期生长反应因子1 紫杉醇神经病理性疼痛小胶质细胞的表型转换