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副猪格拉瑟菌与猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的诊断和防治

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中国兽医杂志 2023年第10期59卷 16-21页

作者：田梓翰吴昊阮胜男任文慧吴昊蔚何启盖华中农业大学动物医学院湖北武汉430000 华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430000 农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室湖北武汉430000

为了诊断某场育肥猪群突发呼吸系统疾病、高死亡率的病因,评估防治方案对该疫病的控制效果。本试验通过现场观察发病猪临床症状、濒死猪器官病变情况,结合实验室检测结果开展综合诊断;根据诊断结果制定了相应的防控方案并评价其效果。... 详细信息

为了诊断某场育肥猪群突发呼吸系统疾病、高死亡率的病因,评估防治方案对该疫病的控制效果。本试验通过现场观察发病猪临床症状、濒死猪器官病变情况,结合实验室检测结果开展综合诊断;根据诊断结果制定了相应的防控方案并评价其效果。结果显示,该场发病猪为副猪格拉瑟菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的混合感染。制定的防控方案为:群体给药酒石酸泰万菌素和复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液控制住细菌感染后,迅速接种PRRSV弱毒苗,隔离发病猪,加强环境和流动人员消毒,记录不同栋舍猪群的存栏量和周死淘率直至猪群出栏。实施紧急防控方案后,暴发栋舍周死淘率显著低于采取措施之前(P<0.05),相连栋舍未暴发疾病。结果表明,群体给药酒石酸泰万菌素和复方磺胺间甲氧嘧啶钠,免疫PRRSV弱毒苗,配合控制人员和物资流动、加强猪舍环境管理等防治措施,能够有效的控制副猪格拉瑟菌和PRRSV混合感染。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 副猪格拉瑟菌混合感染弱毒疫苗疾病诊断

七种猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗对类NADC30毒株的交叉保护性研究

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七种猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗对类NADC30毒株的交叉保护性...

作者：张思宇中国农业科学院

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)引起的一种危害严重的猪传染病,PRRS弱毒疫苗(Modified live-attenuated vaccine,MLV)是目前国内防控PRRS的主要手段之一。2014年从北美传入的类NADC30毒株是目前我国PRRSV的主要流行毒株,此类毒株与我国的弱毒疫苗株亲缘性较远,多份攻毒保护实验表明,不同商业弱毒疫苗对不同类NADC30毒株的交叉保护力差异较大。本研究选取了7款市场占有率较高的PRRS弱毒疫苗(匿名为MLV-HP1～4、MLV-C1～3)对断奶仔猪进行免疫,并通过免疫后仔猪的临床症状、日均增重、病毒血症、抗体水平、脏器病毒载量、外周T细胞亚群变化、病理学变化等指标系统评价和比较PRRS疫苗的免疫特性。结果显示,弱毒疫苗免疫后仔猪的临床表现和日均增重均无异常;在剖检仔猪的肺脏和免疫器官中未观察到肉眼可见的病理变化,但病理组织学观察中肺脏出现了轻度炎性细胞浸润;弱毒疫苗引起的病毒血症从7 dpv开始出现,部分猪持续到28 dpv(各组转阴率≤40%);免疫仔猪的肺脏、腹股沟淋巴结在28 dpv可检测到病毒;N蛋白抗体在14 dpv开始出现,在28 dpv绝大部分免疫仔猪的N蛋白抗体水平较高;流式细胞术结果显示,各免疫组外周血中的CD4/CD8T细胞(活化的辅助性T淋巴细胞和记忆性T细胞)和CD4/CD8T细胞(细胞毒性T细胞)亚群比例有不同程度增加,并且分别在14 dpv和21 dpv达到峰值。以上实验结果表明,7款PRRS弱毒疫苗在免疫仔猪体内成功建立了适应性免疫应答。弱毒疫苗接种28 d后使用HEB-108(类NADC30毒株)接种实验猪群以评价PRRS弱毒疫苗对临床流行毒株的保护效果。除上述指标外,我们建立了鉴别HEB-108和疫苗株的荧光定量PCR用于评价交叉保护性。结果显示,各免疫攻毒组的临床表现未出现异常,攻毒对照组出现了低热及日均增重的下降;免疫攻毒组的血清病毒载量低于攻毒对照组,且有2/3的免疫攻毒仔猪血清中未检测到HEB-108;免疫攻毒组N蛋白抗体水平缓慢下降,但在21 dpc时仍保持较高水平,而攻毒对照组N蛋白抗体最早出现于14 dpc,且21 dpc时抗体水平仍然较低;免疫攻毒组的CD4/CD8T细胞亚群比例在7 dpc迅速升高,其速度比攻毒对照组(14 dpc)更快;免疫攻毒组的CD4/CD8T细胞亚群比例缓慢下降,攻毒对照组的CD4/CD8T细胞亚群比例在7 dpc明显升高。以上实验结果表明,不同的商业弱毒疫苗对HEB-108表现出普遍的保护作用;攻毒后免疫仔猪体内产生了迅速的二次细胞免疫反应,但是没有观察到二次体液免疫反应。弱毒疫苗的免疫原性以及对类NADC30的交叉保护性存在差异。其中,MLV-HP2和MLV-C1所有免疫血清中均没有检测到HEB-108抗原;MLV-HP1免疫组的病毒血症、腹股沟淋巴结的病毒载量显著高于其他免疫组;MLV-HP3免疫组(n=5)在28 dpv时仍有2头仔猪呈抗体阴性,且其CD4/CD8T细胞亚群比例无明显变化。综上,本研究系统地评价和比较了商业化PRRS疫苗免疫原性以及对一种NADC30毒株(HEB-108)的交叉保护性。本研究可以对现地PRRS疫苗的应用提供指导,并为PRRS弱毒疫苗对类NADC30毒株的交叉保护性积累数据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合症弱毒疫苗类NADC30毒株免疫特性免疫保护

兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒弱毒疫苗的创制

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中国烟草科学 2023年第1期44卷 44-50页

作者：刘春菊杜传印魏军刘宏李斐方敏于成明原雪峰山东潍坊烟草有限公司山东潍坊261061 山东农业大学植物保护学院山东泰安271018

黄瓜花叶病毒(CMV)和马铃薯X病毒(PVX)在烟草中普遍存在、危害严重,对烟草产业健康发展有重大影响。为预防田间烟草上黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒,需要构建能够同时预防CMV和PVX的弱毒疫苗。本研究首先构建了CMV RNA2的2b蛋白提前终止突... 详细信息

黄瓜花叶病毒(CMV)和马铃薯X病毒(PVX)在烟草中普遍存在、危害严重,对烟草产业健康发展有重大影响。为预防田间烟草上黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒,需要构建能够同时预防CMV和PVX的弱毒疫苗。本研究首先构建了CMV RNA2的2b蛋白提前终止突变体pCB301-CMVFny-R2-2bPT,在此突变体中插入200 bp的PVX保守序列(5890-6089)获得突变体质粒pCB301-CMVFny-R2-2bPT-PVX5890-6089。该突变体质粒与含野生型CMVFny RNA1和CMVFny RNA3的质粒等量混合后通过农杆菌浸润方法分别接种中烟100、红花大金元和林烟草,接种后烟草症状与野生型CMVFny-RNA1+RNA2+RNA3混合接种烟草症状相比显示弱侵染性。疫苗遗传稳定性检测证实疫苗载体中插入的PVX 200 bp保守片段稳定存在,CMV和PVX强毒株系攻毒试验表明该弱毒疫苗在中烟100上对CMV和PVX同时具备交叉保护作用。

关键词：交叉保护黄瓜花叶病毒马铃薯X病毒弱毒疫苗

弱毒疫苗中污染的禽腺病毒基因组分析及其与新城疫弱毒疫苗LaSota株的协同致病作用

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弱毒疫苗中污染的禽腺病毒基因组分析及其与新城疫弱毒疫苗LaSota...

作者：柳晓锋山东农业大学

学位级别：硕士

禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属,是鸡、鸭等禽体内常见的传染性病毒。根据不同的特异性抗原将FAdV分为3个群,目前鸡群中主要流行Ⅰ亚群FAdV。2013年以来,在我国山东、河南等省的部分地区鸡群中发生了以心包积液... 详细信息

禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属,是鸡、鸭等禽体内常见的传染性病毒。根据不同的特异性抗原将FAdV分为3个群,目前鸡群中主要流行Ⅰ亚群FAdV。2013年以来,在我国山东、河南等省的部分地区鸡群中发生了以心包积液和包涵体肝炎为特征的鸡心包积液-肝炎综合征,大量流行病学调查证实该病病原为Ⅰ亚群血清4型的FAdV(FAdV-4)。究竟是什么原因造成了FAdV-4的在我国的流行和爆发目前还没有确切的定论,本实验前期研究在鸡新城疫弱毒中鉴定到FAdV-4的污染,推测疫苗污染可能是该病传播的重要原因之一。那么弱毒疫苗中污染的FAdV-4与流行毒株是否一致?其基因组特点是怎样的?FAdV广泛存在于多种禽类的消化道和呼吸道中,可保持潜伏感染,一般情况下不表现发病,但是当受到应激或者有其他病原存在时便很容易出现症状,在生产中我们发现某些疑似感染FAdV的鸡群在免疫鸡新城疫弱毒疫苗等疫苗后反而出现发病,弱毒疫苗免疫对FAdV在体内的发病存在何种影响?针对上述问题,本研究在解析FAdV-4疫苗污染株基因组基础上通过系统的动物实验观察了新城疫弱毒疫苗LaSota株与FAdV在鸡体内的协同致病作用。为了研究弱毒疫苗中污染的FAdV-4分离株的全基因组特点,本研究通过扩增测序得到了全基因组序列后,应用MEGA、Editseq等生物信息学软件对FAdV-N22分离株的遗传进化关系以及编码区部分序列进行分析。结果显示,该毒株共有43段蛋白质编码区(CDS),全基因组遗传进化树显示与血清4型属于同一分支,并且分析Hexon、Fiber 1、Fiber 2和Penton这些基因和其他毒株之间的差异。其中,Hexon的基因同源性为98.5%-99.9%,Fiber 1的基因同源性为95.9%-99.8%,Fiber 2的基因同源性为96.8%-99.7%,Penton的基因同源性达到了99.2%-99.6%,并且系统进化树分析显示,该毒株与国内流行的SD1601、NIVD2、GX-1等毒株具有极高的同源性,同时处于同一进化分支。为观察垂直传播感染的FAdV-4和新城疫弱毒疫苗在体内存的协同致病作用,本研究随机选择50枚SPF鸡胚通过卵黄囊接种模拟FAdV-4垂直传播感染,同时选取等量SPF鸡胚通过相同方式接种PBS用作对照。待孵化出雏后,于接毒组和对照组各取20只SPF鸡于7日龄免疫新城疫IV系弱毒疫苗(LaSota株),同时各组其余鸡以相同方式接种等量PBS作为对照。结果显示FAdV-4感染的雏鸡在免疫LaSota株后更容易发生严重的生长抑制和免疫器官损伤,造成了更高的死亡率,说明免疫LaSota株能显著提升垂直传播感染的FAdV-4致病性。本研究证明免疫LaSota弱毒疫苗后疫苗株与垂直传播感染的FAdV-4在鸡体内的协同作用不仅增强了FAdV-4对SPF鸡的致病力,对LaSota疫苗的免疫保护力也产生了一定的不良影响,提示我们对于疾病的控制不能仅仅依赖疫苗免疫,还要加强对种源的疾病净化。

关键词：禽腺病毒全基因组弱毒疫苗 LaSota 协同致病

嘌呤合成关键基因purC对胸膜肺炎放线杆菌毒力影响的研究

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嘌呤合成关键基因purC对胸膜肺炎放线杆菌毒力影响的研究

作者：汤嘉华中农业大学

学位级别：硕士

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是重要的动物病原菌,可引起高发病率和死亡率的猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)。由于APP的血清型众多,且随着耐药性不断增强,本病的防控与清除愈加... 详细信息

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是重要的动物病原菌,可引起高发病率和死亡率的猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)。由于APP的血清型众多,且随着耐药性不断增强,本病的防控与清除愈加困难。嘌呤的从头合成作为重要的基本代谢途径之一,参与病原菌毒力的调节。阻断嘌呤的从头合成过程会影响病原菌毒力蛋白的合成和分泌、铁摄取、信号转导等多种途径进而影响细菌毒力。完整的嘌呤从头合成途径对于多种病原菌的致病性和胞内存活起着至关重要的作用。目前,嘌呤的从头合成途径在胸膜肺炎放线杆菌毒力调节过程中发挥的作用尚无报道。本研究以胸膜肺炎放线杆菌一型菌株4074为亲本菌株,采用同源重组等技术敲除嘌呤从头合成过程中的转录调节基因purR和编码磷酸酰氨基咪唑核苷酸羧酰胺合酶的关键基因purC,以探究嘌呤的从头合成过程对APP毒力的影响,主要研究内容和结果如下:(1)PurR在APP中对嘌呤从头合成过程发挥着负调控作用,purR基因缺失使嘌呤从头合成的相关基因表达量升高2-20倍,但对APP的生长、毒力以及应激耐受能力无显著影响。(2)ΔpurC突变株在完全培养基中的生长特性与野生株4074无显著差异,但在腺嘌呤缺失的限制性培养基中,野生株正常增殖而ΔpurC突变株无法存活,说明缺失purC基因阻断了嘌呤的从头合成过程。(3)体外模拟高渗透压及氧化应激环境,探究ΔpurC突变株在不良环境下的存活能力。结果表明,ΔpurC突变株的渗透压及氧化应激耐受能力较野生株显著下降。(4)用purC基因缺失株感染小鼠,探究其毒力变化情况。缺失株感染组小鼠状态良好,存活率为83.33%,而野生株和互补株感染组全部死亡,说明缺失purC会导致APP的致病性显著下降。为探究缺失株的体内增殖能力,对小鼠的血液及肺脏进行活菌计数,在感染后的24 h,ΔpurC感染组小鼠肺部的APP几乎完全被清除且可以降低APP感染后促炎因子的转录水平。(5)细胞试验表明,ΔpurC突变株对猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)毒性显著下降;被3D4/21吞噬细胞的清除速度显著加快,对新生猪气管上皮细胞(NPTr)的黏附能力显著下降。(6)将ΔpurC作为弱毒疫苗免疫小鼠,对其免疫保护效果进行评估,结果显示,弱毒疫苗抑制了野生株感染引起的组织损伤,免疫保护率可达70%。综上所述,本研究缺失purC基因阻断了嘌呤的从头合成过程,利用小鼠实验和细胞毒性实验证明阻断嘌呤的从头合成会导致APP的毒力显著下降,缓解APP感染造成的肺部炎症反应,降低APP在不良环境下的存活能力、细胞黏附能力和胞内存活能力,同时,ΔpurC作为疫苗可为同血清型APP感染提供较好的免疫保护效果,为APP疫苗的开发提供参考。

关键词：毒力嘌呤从头合成 purC 弱毒疫苗胸膜肺炎放线杆菌

鸡传染性支气管炎病毒河北株WQ2的全基因组测序及疫苗的免疫效力评价

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鸡传染性支气管炎病毒河北株WQ2的全基因组测序及疫苗的免疫效力...

作者：赵鸿洁河北科技师范学院

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB),是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis virus,IBV)所引发的一种急性、热性、高接触性传染病。产蛋鸡感染会导致产蛋量下降,蛋品质的降低,甚至对输卵管造成永久性的... 详细信息

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB),是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis virus,IBV)所引发的一种急性、热性、高接触性传染病。产蛋鸡感染会导致产蛋量下降,蛋品质的降低,甚至对输卵管造成永久性的损伤;IB现在尚无有效的治疗方法。对于IB的防控主要以疫苗免疫为主,但由于IBV血清型复杂,变异程度高,变异速度快,不同血清型之间几乎不具备交叉保护作用,使IB的防控工作存在较大的困难。实验室前期研究发现,河北地区IBV流行毒株为QX,为进一步评估本地区IBV的致病性,了解其分子生物学特征及遗传进化规律,并评估弱毒疫苗和灭活疫苗对本地区流行株的保护效果,针对河北地区IBV流行株WQ2做了如下研究:1.河北地区IBV流行株WQ2全基因组测序及致病性研究为掌握河北地区IBV流行株WQ2的遗传进化情况,本研究对WQ2株进行全基因组测序,结果显示IBV WQ2基因组全长27241 bp,共编码14268个氨基酸;与32株参考毒株及疫苗株全基因组序列进行相似性比对发现,分离株WQ2与LX4型毒株的相似性在87.8%～90.6%之间,同属一群。分析发现IBV WQ2株存在2个重组事件,重组断点位于3418 bp～3507 bp和5863 bp～5903 bp,表明WQ2株可能是LX4型不同毒株的基因重组变异而来。为进一步了解WQ2株的致病性,对雏鸡进行攻毒试验,结果显示WQ2株攻毒5 d后雏鸡出现明显的呼吸道症状,经RT-PCR检测病死鸡器官IBV均为阳性,发病率为100%,表明IBV WQ2株对雏鸡有较强的致病力。2.商品弱毒疫苗对IBV WQ2的免疫保护效果为评价商品弱毒疫苗对河北地区IBV流行株WQ2的免疫保护效果,本研究选择3种市售弱毒疫苗QX、H120和4/91免疫雏鸡,攻毒试验结果显示,4/91组免疫后能刺激鸡体产生较高的特异性抗体水平,在首免后28 d达到高峰,并与H120组与QX组的抗体水平存在显著差异(p疫苗4/91的免疫保护力较好,保护率为85%,免疫后刺激机体产生的抗体S/P值达0.5799;疫苗H120与疫苗QX的免疫保护力分别为60%和70%。3.以WQ2为疫苗株研制灭活疫苗对WQ2的免疫保护效果为研发针对本地区流行株的灭活疫苗,以QX型毒株WQ2作为疫苗株研制灭活疫苗,经测定安全无毒性,稳定性好;对鸡只进行免疫攻毒试验结果显示,二免后14 d,灭活疫苗的抗体水平达到峰值,其中,以4×灭活疫苗(高剂量)的抗体水平较高,S/P值达0.566,与M41免疫组的抗体水平相比显著不差异(p>0.05),表明IBV灭活疫苗免疫后可产生较高的抗体水平,且对同株产生很好的保护效果。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒全基因组测序弱毒疫苗灭活疫苗免疫保护率

Aeromonas veronii TH0426株hisJ基因缺失株培养条件优化及其对鲫免疫保护效果评价

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Aeromonas veronii TH0426株hisJ基因缺失株培养条件优化及其对鲫...

作者：王璇吉林农业大学

学位级别：硕士

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)是一种人-兽-水生动物共患病原菌,广泛存在于我们熟悉的环境里,近年来,由于A.veronii引发的疾病逐年增加,给水产养殖户、公共环境及人身健康带来极大的威胁。his J基因影响了A.veronii TH0426鞭毛的脱... 详细信息

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)是一种人-兽-水生动物共患病原菌,广泛存在于我们熟悉的环境里,近年来,由于A.veronii引发的疾病逐年增加,给水产养殖户、公共环境及人身健康带来极大的威胁。his J基因影响了A.veronii TH0426鞭毛的脱落、毒力、生物膜的形成、黏附和侵袭,并且与毒力密切相关,在A.veronii TH0426的致病性中起着至关重要的作用。基因缺失株属于弱毒性活疫苗,成本较低,而且能长久的作用于机体,令机体产生较为强烈的免疫反应。为了预防治疗鱼类疾病,养殖户滥用抗生素的报道屡见不鲜,这对水体环境和人们的身体健康都造成了极大的危害,随着绿色健康理念的深入人心,用疫苗防治鱼类疾病的方法得到了快速的发展。在本文研究中,通过对维氏气单胞菌TH0426株his J基因缺失株的培养基与培养条件优化,选出最佳的培养基种类及浓度和最适培养条件,在此基础上,对鲫(Carassius auratus)进行免疫及后续试验,具体结果如下:1.最佳培养基为:胰蛋白胨13.92 g/L、可溶性淀粉2.4 g/L、磷酸氢二钾9.42 g/L。2.最佳培养条件为:接种量5%,p H7.6,温度38℃,转速220 r·min,盐度1%。3.优化后培养的缺失株的与鞭毛相关毒力基因fli C、fli E、flg B、flg C、flg E、mot A表达量均较优化前上调,心、肝、脾、肾组织载菌量也比优化前下降,优化前免疫保护率为66.67%,优化后免疫保护率为77.78%,优化后较优化前的免疫保护率上升,Ig M、SOD、ALP、C3免疫相关指标较优化前得到了上升。综上所述,本试验通过单因素试验与响应面分析的方法,得到了维氏气单胞菌TH0426株his J基因缺失株的最佳培养基和最适培养条件,提高了菌液浓度与有效活菌数。将优化前和优化后的维氏气单胞菌TH0426株his J基因缺失株分别免疫鲫,结果显示优化后比优化前的缺失株毒力降低,免疫保护率上升,为A.veronii弱毒疫苗的规模化生产提供理论依据。

关键词：维氏气单胞菌 hisJ基因培养基优化培养条件优化弱毒疫苗

一株鲤疱疹病毒Ⅱ型弱毒株作为活疫苗候选株效果评价研究

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一株鲤疱疹病毒Ⅱ型弱毒株作为活疫苗候选株效果评价研究

作者：孙雨雨盐城工学院

学位级别：硕士

鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2)感染引起的病毒性造血坏死病是一种高死亡率疾病,对金鱼、鲫鱼养殖造成巨大的经济损失。在本研究中,通过鎏金金鱼鳍条细胞Ryu F-2和异育银鲫鳍条细胞系Gi CF,获得了Cy HV-2 G-RP7的弱毒株。作为弱毒疫苗候选株,... 详细信息

鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2)感染引起的病毒性造血坏死病是一种高死亡率疾病,对金鱼、鲫鱼养殖造成巨大的经济损失。在本研究中,通过鎏金金鱼鳍条细胞Ryu F-2和异育银鲫鳍条细胞系Gi CF,获得了Cy HV-2 G-RP7的弱毒株。作为弱毒疫苗候选株,浸泡或腹腔注射G-RP7株的异育银鲫没有临床症状。浸泡和腹腔注射GPR7免疫异育银鲫,用强毒株攻毒后的保护率分别为92%和100%。鱼体各组织中病毒DNA的动态分布在接种G-RP7后1、3和5天内增加,随后在7和14天内减少并趋于稳定。此外,通过ELISA检测,在接种G-RP7后第21天,浸泡免疫和注射免疫的鱼都被检测到抗病毒抗体滴度增加。这些结果表明,G-RP7可能是一种很有前途的针对该疾病的弱毒活疫苗候选物。在毒力返强实验中,通过腹腔注射接种鱼的肾脏和脾脏混合匀浆液,将候选疫苗在异育银鲫体内传代六次。在异育银鲫体内传代过程中,未观察到接种鱼的异常和死亡率,病毒DNA拷贝数从第一代到第六代保持较低水平。在异育银鲫体外传播实验中,健康鱼的安全性很高。在水平传播实验中,验证得到G-RP7可能有在水中传播的风险。为了解疫苗候选株接种异育银鲫后在鱼体内的免疫机制,以注射和浸泡的方式给异育银鲫接种G-RP7株进行免疫,在第3天、7天和14天取异育银鲫的肾脏进行转录组测序,通过转录组数据筛选获得了大量免疫相关通路的关键基因,分析了异育银鲫的特异性免疫基因和非特异性免疫基因的显著性,选取了STAT2、IL-8和C3等3个免疫基因进行定量验证,结果显示,C3补体在注射组中参与了特异性免疫,而在浸泡组中没有刺激特异性免疫。IL-8在异育银鲫感染G-RP7后,在第3天和第七天持续上调表达,发挥了促炎作用。在14天时仍有显著差异,说明IL-8促进了特异性免疫应激起。无论是浸泡组还是注射组均在3天开始出现显著差异,在7天和14天没有发生差异,说明STAT2发挥了非特性免疫的作用。

关键词： CyHV-2 弱毒疫苗保护率毒力返强转录组免疫基因

罗非鱼无乳链球菌弱毒疫苗不同免疫途径最适宜免疫温度的研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第8期 104-109页

作者：王瑞莫玉萍雷爱莹黄婷陈明李莉萍广西壮族自治区水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟水产种质资源综合开发与利用重点实验室(部省共建)南宁530021 南宁市高新技术产业开发区动物疫病预防控制中心南宁530007

为了获得罗非鱼无乳链球菌弱毒疫苗不同接种途径最适宜的免疫温度,试验将罗非鱼(Oreochromis niloticus)饲养于4个水温(22℃、26℃、30℃、35℃)中,每个饲养水温分为4组,分别为浸泡组、注射组、口服组和空白对照组,每组40尾。浸泡组罗... 详细信息

为了获得罗非鱼无乳链球菌弱毒疫苗不同接种途径最适宜的免疫温度,试验将罗非鱼(Oreochromis niloticus)饲养于4个水温(22℃、26℃、30℃、35℃)中,每个饲养水温分为4组,分别为浸泡组、注射组、口服组和空白对照组,每组40尾。浸泡组罗非鱼链球病疫苗浸泡浓度为1×10^(7)cfu/mL,浸泡时间为15 min;注射组腹腔注射疫苗,疫苗菌液浓度为1×10^(8)cfu/mL,0.2 mL/尾;口服组将疫苗均匀喷洒至饲料表面,晾干投喂,分别于试验第1,3,7天口服接种,疫苗菌液浓度为1×10^(8)cfu/mL,0.2 mL/尾。于免疫后第5,10,15天每组随机选取3尾采集血液及脏器组织,检测免疫后疫苗抗原组织分布、血清抗体水平和溶菌酶活性,计算疫苗相对免疫保护率。结果表明:注射组免疫后第5,10,15天罗非鱼脾脏组织均可检测到疫苗抗原;饲养水温为35℃时,注射组免疫后第5,10,15天血清抗体水平极显著高于空白对照组(P疫苗浸泡免疫接种最适饲养水温为22℃,注射免疫接种最适饲养水温为35℃,口服免疫接种最适饲养水温为26℃。

关键词：罗非鱼无乳链球菌接种途径免疫温度弱毒疫苗