一株鲤疱疹病毒Ⅱ型弱毒株作为活疫苗候选株效果评价研究

作     者：孙雨雨 

作者单位：盐城工学院 

学位级别：硕士

导师姓名：李强;魏畅

授予年度：2023年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 10[医学] 

主      题：CyHV-2 弱毒疫苗 保护率 毒力返强 转录组 免疫基因 

摘      要：鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2)感染引起的病毒性造血坏死病是一种高死亡率疾病,对金鱼、鲫鱼养殖造成巨大的经济损失。在本研究中,通过鎏金金鱼鳍条细胞Ryu F-2和异育银鲫鳍条细胞系Gi CF,获得了Cy HV-2 G-RP7的弱毒株。作为弱毒疫苗候选株,浸泡或腹腔注射G-RP7株的异育银鲫没有临床症状。浸泡和腹腔注射GPR7免疫异育银鲫,用强毒株攻毒后的保护率分别为92%和100%。鱼体各组织中病毒DNA的动态分布在接种G-RP7后1、3和5天内增加,随后在7和14天内减少并趋于稳定。此外,通过ELISA检测,在接种G-RP7后第21天,浸泡免疫和注射免疫的鱼都被检测到抗病毒抗体滴度增加。这些结果表明,G-RP7可能是一种很有前途的针对该疾病的弱毒活疫苗候选物。在毒力返强实验中,通过腹腔注射接种鱼的肾脏和脾脏混合匀浆液,将候选疫苗在异育银鲫体内传代六次。在异育银鲫体内传代过程中,未观察到接种鱼的异常和死亡率,病毒DNA拷贝数从第一代到第六代保持较低水平。在异育银鲫体外传播实验中,健康鱼的安全性很高。在水平传播实验中,验证得到G-RP7可能有在水中传播的风险。为了解疫苗候选株接种异育银鲫后在鱼体内的免疫机制,以注射和浸泡的方式给异育银鲫接种G-RP7株进行免疫,在第3天、7天和14天取异育银鲫的肾脏进行转录组测序,通过转录组数据筛选获得了大量免疫相关通路的关键基因,分析了异育银鲫的特异性免疫基因和非特异性免疫基因的显著性,选取了STAT2、IL-8和C3等3个免疫基因进行定量验证,结果显示,C3补体在注射组中参与了特异性免疫,而在浸泡组中没有刺激特异性免疫。IL-8在异育银鲫感染G-RP7后,在第3天和第七天持续上调表达,发挥了促炎作用。在14天时仍有显著差异,说明IL-8促进了特异性免疫应激起。无论是浸泡组还是注射组均在3天开始出现显著差异,在7天和14天没有发生差异,说明STAT2发挥了非特性免疫的作用。