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布鲁菌病44例临床特征分析

中国感染与化疗杂志 2019年第5期19卷 495-498页

作者：刘青华胡春岭张颖齐文晶宋宇付宝庆大庆油田总医院感染性疾病科黑龙江大庆163001 大庆油田总医院检验科黑龙江大庆163001 厦门大学附属翔安医院检验科

目的分析大庆地区44例布鲁菌病患者临床表现及实验室相关指标的变化,为临床诊治提供依据。方法回顾性分析大庆油田总医院2014年2月-2018年8月44例布鲁菌病患者的临床特征。结果大庆地区布鲁菌病患者以农牧民(25例,56.8%)和30岁以上患者(... 详细信息

目的分析大庆地区44例布鲁菌病患者临床表现及实验室相关指标的变化,为临床诊治提供依据。方法回顾性分析大庆油田总医院2014年2月-2018年8月44例布鲁菌病患者的临床特征。结果大庆地区布鲁菌病患者以农牧民(25例,56.8%)和30岁以上患者(31~69岁,93.2%)为主,临床主要表现为贫血30例(68.2%)、发热23例(52.3%)、胆囊疾病9例(20.5%)、脾肿大9例(20.5%)、胃炎7例(15.9%)、关节炎关节痛6例(13.6%)、睾丸附睾炎4例(9.1%)、心包积液4例(9.1%)、全血细胞减少2例(4.5%)、胸壁脓肿1例(2.3%)。实验室相关指标中,降钙素原(PCT)升高31例(31/32,96.9%),C反应蛋白(CRP)升高33例(33/35,94.3%),红细胞沉降率(ESR)增快11例(11/13,84.6%),44患者中白蛋白减少37例(84.1%),肝功能异常27例(61.4%),单核细胞增多23例(52.3%),白细胞升高10例(22.7%),血小板减少7例(15.9%)。结论布鲁菌病随受累器官不同临床表现多样,除常见症状外,胆囊病变也是其可能出现的临床特征;在实验室相关指标中,可出现单核细胞增多及血小板减少,PCT普遍升高且以轻度升高为主。临床医师应加强对该病的认识,以做到早期诊断和治疗。

关键词：布鲁菌病布鲁菌胆囊疾病单核细胞增多血小板减少

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布鲁菌致感染性腹主动脉瘤2例

中国感染与化疗杂志 2016年第3期16卷 379-382页

作者：高丽丽马季娜鲍晓利大连医科大学附属第一医院呼吸科内科辽宁大连116011

布鲁菌病是常见的人畜共患传染病,全世界每年约有500 000余人患病,但布鲁菌脓毒血症引起的感染性腹主动脉瘤临床非常少见。我院在2014年8月、2015年1月分别经血培养及腹主动脉CT血管造影（CTA）、血培养及腹主动脉增强CT确诊2例布鲁菌... 详细信息

布鲁菌病是常见的人畜共患传染病,全世界每年约有500 000余人患病,但布鲁菌脓毒血症引起的感染性腹主动脉瘤临床非常少见。我院在2014年8月、2015年1月分别经血培养及腹主动脉CT血管造影（CTA）、血培养及腹主动脉增强CT确诊2例布鲁菌致感染性腹主动脉瘤患者,现报道如下。

关键词：布鲁菌布鲁菌病感染性动脉瘤诊断治疗

布鲁菌重要毒力调控基因在环境刺激和细胞侵染过程中的转录研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第10期28卷 919-924页

作者：王玉飞乔凤钟志军汪舟佳杜昕颖于雅琴陈泽良黄留玉军事医学科学院疾病预防控制所北京100071 吉林大学公共卫生学院人畜共患病教育部重点实验室长春130021

目的了解dnaK、htrA、ribR和gntR等布鲁菌的重要毒力调控基因的功能。方法本研究利用定量RT—PCR的方法分析了dnaK、htrA、vjbR和gntR在酸等体外刺激条件下和巨噬细胞感染过程中的转录变化。结果这些毒力调控基因在体外刺激条件下、侵... 详细信息

目的了解dnaK、htrA、ribR和gntR等布鲁菌的重要毒力调控基因的功能。方法本研究利用定量RT—PCR的方法分析了dnaK、htrA、vjbR和gntR在酸等体外刺激条件下和巨噬细胞感染过程中的转录变化。结果这些毒力调控基因在体外刺激条件下、侵染过程中可特异的诱导表达，但是它们在这些刺激条件和胞内不同时期的转录丰度不同。结论dnaK、htrA、vjbR和gntR在布鲁菌感染过程的不同环节发挥作用。

关键词：布鲁菌转录基因表达

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布鲁菌BP26基因的克隆、表达及纯化

中国生物制品学杂志 2007年第12期20卷 887-889页

作者：闫广谋王兴龙张辉刘锴庞盼娇王学理高健勇李晓燕张付贤王俊霞吉林大学兽医畜牧学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所5室长春130062

目的克隆布鲁氏菌BP26基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化BP26蛋白。方法提取布鲁氏菌基因组DNA,用PCR扩增出BP26基因,并克隆到pMD18-T载体上,测序正确后,再亚克隆至pET-28a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经组氨... 详细信息

目的克隆布鲁氏菌BP26基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化BP26蛋白。方法提取布鲁氏菌基因组DNA,用PCR扩增出BP26基因,并克隆到pMD18-T载体上,测序正确后,再亚克隆至pET-28a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经组氨酸结合树脂柱纯化,并对纯化后的表达产物进行Western blot鉴定。结果重组质粒pETBP26经Nde I与Sal I酶切后,可见大小分别为5400和700bp的片段,与理论值相符。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,37℃诱导4h,经SDS-PAGE分析,高效表达出带有His-tag标签的融合蛋白BP26,纯化后的蛋白纯度达96%,经Western blot分析,目的蛋白具有抗原特异性。结论已成功克隆了BP26基因,且表达并纯化了布鲁氏菌BP26蛋白。

关键词：布鲁菌 BP26蛋白基因克隆原核表达纯化

布鲁菌半胱氨酸水解酶在甲硫氨酸循环中的催化活性研究

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南京农业大学学报 2017年第4期40卷 697-702页

作者：徐达吴小卡荆雅玮左佳坤米荣升黄燕陈兆国王成明韩先干中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 扬州大学兽医学院江苏扬州225009 奥本大学兽医学院美国阿拉巴马州368495519

[目的]细菌的sah H基因编码S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(Sah H),该酶参与细菌的甲硫氨酸循环(AMC),调控细菌的多种生理功能。[方法]通过构建重组表达质粒p ET28a-Bru-sah H和p ET28a-Pse-sah H,分别表达布鲁菌(Brucella abortus)S2308株... 详细信息

[目的]细菌的sah H基因编码S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(Sah H),该酶参与细菌的甲硫氨酸循环(AMC),调控细菌的多种生理功能。[方法]通过构建重组表达质粒p ET28a-Bru-sah H和p ET28a-Pse-sah H,分别表达布鲁菌(Brucella abortus)S2308株和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1株的Sah H重组蛋白Bru-Sah H和Pse-Sah H。将纯化后的Bru-Sah H、Pse-Sah H以及我们前期表达纯化的禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的Pfs和Lux S蛋白,分别在体外催化S-腺苷同型半胱氨酸(SAH),通过对产物同型半胱氨酸(HCY)的浓度测定,评价不同重组蛋白的催化活性,并对催化底物时产生的自诱导分子2(AI-2)活性进行检测。[结果]Bru-Sah H和Pse-Sah H分别催化1 mmol·L-1SAH生成38和47μmol·L-1HCY,而APEC的Pfs和Lux S蛋白能催化相同浓度的SAH产生401μmol·L-1HCY。运用哈维弧菌BB170检测上述底物的AI-2活性,结果表明只有同时采用AEPC的Pfs和Lux S蛋白催化SAH,才能形成有活性的AI-2分子,而Bru-Sah H和Pce-Sah H均不能催化SAH形成活性AI-2分子。[结论]Bru-Sah H能催化SAH生成HCY,为进一步研究sah H在布鲁菌感染过程中的作用提供依据。

关键词：布鲁菌甲硫氨酸循环 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶催化活性信号分子AI-2

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布鲁菌干扰MФ泛素依赖型自噬通路的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2012年第9期32卷 798-802页

作者：陈冬志洪洋李春晓李娜曹志然王家鑫孟明河北大学医学部保定071002 河北农业大学动物科技学院

目的探讨布鲁菌减毒株S1330对于小鼠巨噬细胞（MФ）泛素依赖型自噬通路的影响。方法应用布鲁菌S1330株作用于小鼠MФ构建体外感染模型。观察M中内的吞噬过程、泛素化水平及自噬水平。实验设立巨噬细胞正常组、感染组、自噬诱导对照组... 详细信息

目的探讨布鲁菌减毒株S1330对于小鼠巨噬细胞（MФ）泛素依赖型自噬通路的影响。方法应用布鲁菌S1330株作用于小鼠MФ构建体外感染模型。观察M中内的吞噬过程、泛素化水平及自噬水平。实验设立巨噬细胞正常组、感染组、自噬诱导对照组、自噬诱导感染组，应用吉姆萨染色法、免疫荧光法、Westernblot法分别观察不同时间点、不同组MФ内泛素化蛋白含量及自噬水平变化。结果布鲁菌感染MФ0．5h胞内出现泛素化菌体蛋白，随着感染时间的延长，胞内泛素化蛋白聚集持续增多，12hMФ死亡；与之相对应的自噬体标记物LC3B蛋白表达严重不足，而自噬诱导的感染组MФ内泛素化的菌体蛋白比例减少。结论布鲁菌S1330株感染MФ启动胞内泛素化机制，却干扰泛素依赖型自噬通路的成熟，使泛素化菌体蛋白大量聚集不能有效清除，最终导致了MФ功能障碍而死亡。

关键词：巨噬细胞布鲁菌泛素化自噬

布鲁菌对不同分化类型巨噬细胞JAK-STAT6信号通路的影响

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中国预防兽医学报 2017年第10期39卷 836-841页

作者：王月丽易继海王震唐燕童志霞徐锦凤张辉陈创夫石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 石河子大学生命科学学院新疆石河子832000

为研究布鲁菌侵染巨噬细胞过程中,对后者不同分化类型细胞中JAK-STAT6信号通路和细胞因子表达变化的影响,本研究利用小鼠巨噬细胞系RAW264.7,经40 ng/m L的IL-4体外作用24 h将其诱导为M2型巨噬细胞,采用细胞免疫荧光方法,检测M2巨噬细... 详细信息

为研究布鲁菌侵染巨噬细胞过程中,对后者不同分化类型细胞中JAK-STAT6信号通路和细胞因子表达变化的影响,本研究利用小鼠巨噬细胞系RAW264.7,经40 ng/m L的IL-4体外作用24 h将其诱导为M2型巨噬细胞,采用细胞免疫荧光方法,检测M2巨噬细胞极化状态;通过荧光定量PCR(q RT-PCR)方法,检测布鲁菌疫苗株M5侵染不同类型(M0和M2型)巨噬细胞中JAK1、STAT6基因mRNA转录情况;采用ELISA方法检测M5侵染不同类型巨噬细胞上清中IL-10、INF-γ的表达情况。细胞免疫荧光检测结果显示,IL-4诱导24 h后,巨噬细胞表面标志CD206荧光表达量超过90%,表明巨噬细胞极化为M2型;q RT-PCR结果显示,M5侵染M0型巨噬细胞后能够引起JAK1、STAT6 mRNA转录水平持续降低,在24 h和48 h时其转录水平最低,二者差异极显著(p0.05),而IL-10的表达量上调且在侵染48 h达到最大值,差异显著(p布鲁菌M5侵染M0型巨噬细胞中JAK1、STAT6的转录水平下调,但上调M2型巨噬细胞JAK1、STAT6的转录水平并促进下游细胞因子IL-10的分泌。本研究为探究布鲁菌引起持续感染的机制研究奠定了基础,同时为布鲁菌病药物靶标开拓了新的研究方向。

关键词：布鲁菌巨噬细胞极化 JAK-STAT6信号通路

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布鲁菌分子分型方法应用研究进展

中国人兽共患病学报 2015年第2期31卷 163-168页

作者：刘志国崔步云刘日宏王妙解新霞李晓琳夏咸柱内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 乌兰察布市卫生局乌兰察布012000 乌兰察布市地方病防治中心乌兰察布012000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所长春130122

布鲁菌属细菌是布病的病原菌。当前,用于布鲁菌属细菌分型的方法有多种,而布鲁菌分子分型方法在布病的分子流行病学调查、病原菌的快速分型鉴定、病原菌的溯源分析和菌株之间差异关系的分析过程中被广泛应用并具有十分重要的作用。本文... 详细信息

布鲁菌属细菌是布病的病原菌。当前,用于布鲁菌属细菌分型的方法有多种,而布鲁菌分子分型方法在布病的分子流行病学调查、病原菌的快速分型鉴定、病原菌的溯源分析和菌株之间差异关系的分析过程中被广泛应用并具有十分重要的作用。本文就常用的布鲁菌的核酸探针技术(DNA probes)、聚合酶链式反应(PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、16SrDNA鉴定、PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、单核苷酸多态性分析(SNP)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)、多位点串联重复序列分析(VNTR/MLVA)等分子分型方法的应用研究进展予以综述。

关键词：布鲁菌分子分型进展

布鲁菌缺失疫苗株M5-ΔznuA和M5-Δbp26-ΔznuA的构建及毒力和免疫原性的评估

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华南农业大学学报 2015年第5期36卷 18-25页

作者：刘翠翠马思思王佳莹吴云燕易琳赵明秋陈金顶华南农业大学兽医学院广东广州510642

【目的】利用分子生物学技术,通过同源重组的方法构建了新型的羊种布鲁菌Brucella melitensis减毒活疫苗株,为布鲁菌的防治提供新的选择.【方法】以羊种布鲁菌减毒活疫苗M5株及缺失bp26基因的M5-Δbp26缺失突变株为亲本株,利用电击转化... 详细信息

【目的】利用分子生物学技术,通过同源重组的方法构建了新型的羊种布鲁菌Brucella melitensis减毒活疫苗株,为布鲁菌的防治提供新的选择.【方法】以羊种布鲁菌减毒活疫苗M5株及缺失bp26基因的M5-Δbp26缺失突变株为亲本株,利用电击转化法,将含有znuA基因上下游同源臂的自杀质粒转入到亲本株中,通过同源重组敲除znuA基因.对构建的新型基因缺失株进行生物学特性及毒力的鉴定与分析.【结果和结论】PCR及核苷酸序列测序结果表明,羊种布鲁菌减毒活疫苗znuA单基因缺失株和bp26、znuA双基因缺失株均构建成功,分别将其命名为M5-ΔznuA和M5-Δbp26-ΔznuA.与亲本株相比,2种缺失突变株的生物学特性没有显著性差异;体外连续传至20代后,菌落PCR和核苷酸测序结果显示M5-ΔznuA和M5-Δbp26-ΔznuA株具有良好的遗传稳定性.小鼠脾脏质量和脾脏菌落数表明,M5-Δbp26-ΔznuA双基因缺失株毒力最弱,单基因缺失株M5-ΔznuA和M5-Δbp26次之.血清中抗体水平的监测显示,znuA基因的缺失对布鲁菌减毒活疫苗诱导机体体液免疫的能力没有影响.获得了免疫原性保持良好而毒力减弱的羊种布鲁菌减毒活疫苗基因突变株M5-ΔznuA和M5-Δbp26-ΔznuA.

关键词：布鲁菌 znuA基因基因缺失株毒力免疫原性