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山绿茶降压胶囊药代动力学及初步作用机制研究

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山绿茶降压胶囊药代动力学及初步作用机制研究

作者：张丽敏辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的山绿茶降压胶囊是由山绿茶单味药材经醇提、精制后制成的中药制剂,具有清热解毒、平肝潜阳的功效,用于眩晕耳鸣、头痛头胀及高血压、高血脂等症。为控制山绿茶降压胶囊的质量,为后期深入研究奠定基础,本课题在实验室前期对山绿茶组... 详细信息

目的山绿茶降压胶囊是由山绿茶单味药材经醇提、精制后制成的中药制剂,具有清热解毒、平肝潜阳的功效,用于眩晕耳鸣、头痛头胀及高血压、高血脂等症。为控制山绿茶降压胶囊的质量,为后期深入研究奠定基础,本课题在实验室前期对山绿茶组分提取及药效研究基础上,针对山绿茶降压胶囊中原料药山绿茶药材进行质量控制,进而保证制剂的质量,并对山绿茶降压胶囊的药代动力学进行初步研究,初步推断有效组分在大鼠体内的变化过程,且从代谢组学、相关基因角度对山绿茶降压胶囊药效机制进行初步研究,从中药多组分、多靶点、多通路的作用特点进行阐释,为山绿茶降压胶囊临床合理应用及进一步开发奠定基础。材料与方法1.采用UPLC-Q-TOF-MS技术,通过质谱信息与对照品、相关文献和相关数据库进行比对、整合、解析,开展山绿茶药材化学成分的表征研究。同时采用HPLC法结合Matlab全时段多波长融合技术,得到同时反映山绿茶有效组分双波长信息的全时段双波长融合指纹图谱,并对山绿茶药材中多指标成分进行含量测定;采用ICP-MS技术,对其所含无机元素进行含量测定;并通过灰色关联度分析软件,对山绿茶有机、无机成分进行关联分析,更加全面对山绿茶药材进行质量控制研究。2.采用HPLC法,测定山绿茶降压胶囊中有效组分在大鼠血浆中不同时间点的血药浓度,DAS3.0软件得到药代动力学参数。3.建立L-NNA致大鼠高血压模型,以大鼠收缩压与舒张压及脏器指数为指标,考察山绿茶降压胶囊对高血压大鼠的药理药效作用。4.采用UPLC-Q-TOF-MS技术,并使用Agilent Mass Hunter Profinder、Agilent Mass Profiler Professional 12.0软件及HMDB、KEGG等数据库,对山绿茶降压胶囊干预的高血压大鼠血清样本为实验对象,通过观察体内内源性代谢产物的变化,寻找药物作用后潜在的生物标志物与代谢通路,开展基于代谢组学对山绿茶降压胶囊抗高血压作用机制的研究。5.采用RT-PCR技术,检测山绿茶降压胶囊对高血压大鼠治疗后相关通路基因的表达量,从基因的角度阐释中药制剂山绿茶降压胶囊抗高血压的作用机制。结果1.通过LC-MS对山绿茶中所含化学成分分析,共鉴定了27个化学成分。建立了10个不同采收期山绿茶药材全时段双波长融合指纹图谱,相似度评价分析表明,不同采收期的中药山绿茶指纹图谱与参照图谱相比相似度均大于0.9,说明其化学组成一致性较好。同时测定山绿茶中黄酮及酚酸共6个成分的含量测定的方法,并对山绿茶药材中22个无机元素进行了全定量检测。相关性结果表明药材中所含6个成分与所含无机元素Na、Mg、Al、Mn、Fe、Zn、Ba关联度较高。2.大鼠灌胃山绿茶降压胶囊后得到3个原形入血的成分,即绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A。绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A浓度分别在0.1080-3.455μg/m L、0.2516-8.050μg/m L、0.0800-2.5600μg/m L范围内线性关系良好(r=0.9990,0.9992,0.9953),回收率、精密度和准确度、稳定性,符合生物样品要求。可用于山绿茶降压胶囊中绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A的药代动力学研究。3.体内药效结果表明,与模型组相比,山绿茶降压胶囊给药组对高血压大鼠有明显的降压作用,且能降低心指数,对心脏有很好的保护作用。4.通过研究山绿茶降压胶囊干预高血压大鼠血清中代谢物的变化,共找到18个潜在生物标志物,主要代谢通路为能量代谢、氨基酸代谢、鞘脂类代谢。5.山绿茶降压胶囊不同程度的使高血压大鼠心脏组织中e NOS、PKG m RNA表达量升高。结论1.对山绿茶化学成分进行鉴定,为山绿茶化学物质基础研究提供快速有效的手段,基于全时段双波长融合技术构建的山绿茶指纹图谱,有效融合中药材指标成分的谱图信息,同时基于全时段双波长融合指纹图谱建立了山绿茶多指标成分的定量方法,从而较完善地反映中药材的内在质量,并测定山绿茶中无机成分含量,从无机、有机等不同方面综合评价中药及其制剂的质量提供有力补充,更全面的完善山绿茶降压胶囊的质量控制方法,后期深入研究山绿茶降压胶囊药代动力学和药效机制奠定基础。2.采用HPLC法测定山绿茶降压胶囊中有效组分的血药浓度,并对其药动学特征进行初步探索。3.山绿茶降压胶囊对L-NNA致高血压动物有很好的药理药效作用,并为后续研究山绿茶降压胶囊的降压机制奠定基础。4.从代谢组学角度研究表明山绿茶降压胶囊干预后高血压大鼠血清中的内源性代谢物变化及参与氨基酸代谢通路、鞘脂类代谢通路、能量代谢、NO/c GMP/PKG信号通路发挥药效。从基因角度检测验证相关靶点e NOS、PKG m RNA表达量变化,从多角度多方面阐释山绿茶降压胶囊治疗高血压的作用机制。

关键词：山绿茶质量控制山绿茶降压胶囊药代动力学作用机制

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不同炮制工艺山绿茶药材特征图谱的比较

中国实验方剂学杂志 2014年第23期20卷 56-59页

作者：谢臻张龙陈勇郑锡任李耀华农莉刘鼎李怡萱广西中医药大学药学院南宁530001 柳州市人民医院广西柳州545006

目的:采用HPLC研究不同炮制工艺山绿茶药材特征图谱的变化,为科学评价和控制其质量提供有效的方法。方法:以70%乙醇为提取溶剂,采用加热回流的方法提取制备供试样品。以Phenomenon C18色谱柱为固定相,流动相乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱,检... 详细信息

目的:采用HPLC研究不同炮制工艺山绿茶药材特征图谱的变化,为科学评价和控制其质量提供有效的方法。方法:以70%乙醇为提取溶剂,采用加热回流的方法提取制备供试样品。以Phenomenon C18色谱柱为固定相,流动相乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱,检测波长330 nm,柱温25℃,进样量10μL,流速1.0 m L·min-1,进行HPLC特征图谱检测。以芦丁为对照品,检测不同炮制工艺山绿茶药材中芦丁含量变化。结果:不同炮制工艺药材中共确定9个主要共有特征峰。研究发现特征图谱中主要色谱峰发生了显著改变,与炮制前相比峰面积显著降低。表明山绿茶药材经炮制处理后,主要化学成分含量明显减少。结论:该HPLC特征图谱检测方法重复性、精密度良好,可用于山绿茶药材及其炮制品的质量控制。

关键词：山绿茶炮制工艺芦丁特征图谱

不同采收期山绿茶药材绿原酸和芦丁的含量比较

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中国实验方剂学杂志 2013年第18期19卷 65-67页

作者：郑锡任张龙陈勇农莉刘鼎李怡萱广西中医药大学药学院南宁530001

目的：考察不同采收期山绿茶药材中绿原酸和芦丁的含量及其变化规律,为探索山绿茶最佳采收期提供依据。方法：从2011年7月至2012年5月,每隔单月采摘药材1次,共6次。采用HPLC测定,Phenomenex Gemini C18色谱柱（4.6mm×250 mm,5μm）,以... 详细信息

目的：考察不同采收期山绿茶药材中绿原酸和芦丁的含量及其变化规律,为探索山绿茶最佳采收期提供依据。方法：从2011年7月至2012年5月,每隔单月采摘药材1次,共6次。采用HPLC测定,Phenomenex Gemini C18色谱柱（4.6mm×250 mm,5μm）,以乙腈和0.1%磷酸进行梯度洗脱,检测波长330 nm,柱温30℃,流速1.0 mL·min-1。结果：绿原酸和芦丁分别在0.10-2.00μg,0.25~5.00μg峰面积与进样量呈良好的线性关系,回归方程分别为Y=4 027X＋5.262（r=1.000 0）,Y=1 258X-1.406（r=1.000 0）,平均回收率分别为97.18%和99.36%,RSD分别为1.27%和1.91%。1月份采收的山绿茶药材绿原酸和芦丁含量较高,7月份采收的山绿茶药材绿原酸和芦丁含量较低,山绿茶药材的合理采收时间可定为1月。结论：HPLC测定山绿茶中的绿原酸和芦丁含量的方法分离度良好,快速、准确、稳定、重复性好,可用于山绿茶药材及其炮制品的质量控制。山绿茶在生长发育过程中,绿原酸和芦丁含量会发生变化且有一定规律。

关键词：山绿茶绿原酸芦丁采收时间含量测定

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不同炮制品山绿茶药材降血压药效实验研究

中华中医药学刊 2020年第1期38卷 32-35页

作者：曾海生郑锡任谢臻魏江存林国彪陈勇右江民族医学院第一附属医院广西百色533000 广西中医药大学广西南宁530200 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023 广西国际壮医医院广西南宁530201

目的对广西特产药材山绿茶Ilex hainanensis Merr.进行中药炮制实验研究,并对其进行降血压实验研究。方法使用不同炮制方法对山绿茶进行炮制;采用尾动脉法测原发性高血压大鼠(SHR)血压,对不同炮制品山绿茶进行降血压实验研究。结果通过... 详细信息

目的对广西特产药材山绿茶Ilex hainanensis Merr.进行中药炮制实验研究,并对其进行降血压实验研究。方法使用不同炮制方法对山绿茶进行炮制;采用尾动脉法测原发性高血压大鼠(SHR)血压,对不同炮制品山绿茶进行降血压实验研究。结果通过不同炮制方法、不同烘烤程度药材炮制,共得到11种炮制药材;与模型组比较,不同炮制品、不同炮制工艺山绿茶均有明显的降血压效果。不同方法炮制山绿茶药材,以传统炮制品降压作用最佳,不同烘烤炮制品,以200℃烘烤30 min组降压作用最佳。结论初步确定山绿茶最佳炮制方法为传统炮制法,此方法炮制出的山绿茶药材对SHR血压的作用效果最好。

关键词：山绿茶中药炮制原发性高血压大鼠药效

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正交试验法优选山绿茶中乌苏酸提取工艺

光谱实验室 2012年第2期29卷 1013-1016页

作者：程齐来李洪亮赵琛赣南医学院药学院江西省赣州市341000 江西省赣州市市立医院药剂科江西省赣州市341000

筛选山绿茶中乌苏酸的最佳提取工艺。采用正交设计L9(34)考察液固比、提取时间、乙醇浓度和提取次数4个因素,用高效液相色谱法测定山绿茶中乌苏酸的含量。山绿茶中乌苏酸的最佳提取工艺为A2B3C3D1,即选择液固比(mL/g)10∶1、提取时间4h... 详细信息

筛选山绿茶中乌苏酸的最佳提取工艺。采用正交设计L9(34)考察液固比、提取时间、乙醇浓度和提取次数4个因素,用高效液相色谱法测定山绿茶中乌苏酸的含量。山绿茶中乌苏酸的最佳提取工艺为A2B3C3D1,即选择液固比(mL/g)10∶1、提取时间4h、乙醇浓度90%、提取次数1次。本法工艺合理,质量稳定,适宜于工业化生产。

关键词：山绿茶乌苏酸提取工艺正交试验设计

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山绿茶的降压作用

中草药 1983年第4期14卷 27-30页

作者：陈一黄凤娇钟正贤欧阳平平广西壮族自治区中医药研究所

静注山绿茶提取物（IAE）0.25g/kg使麻醉犬血压迅速下降,峰值可达50.6%,持续10～40分钟,心率减慢。对两肾型Goldblatt高血压大鼠,IAE0.5g/kg灌胃有明显的降压作用。IAE的降压作用可能是通过中枢和外周两方面的作用。IAE对小鼠腹腔注射的... 详细信息

静注山绿茶提取物（IAE）0.25g/kg使麻醉犬血压迅速下降,峰值可达50.6%,持续10～40分钟,心率减慢。对两肾型Goldblatt高血压大鼠,IAE0.5g/kg灌胃有明显的降压作用。IAE的降压作用可能是通过中枢和外周两方面的作用。IAE对小鼠腹腔注射的LD50=5.13±0.459g/kg,犬静滴致死量为5.54±0.25g/kg,家兔以临床剂量（0.6g/日）的10、20倍连续口服给药三周,未见明显毒副反应。

关键词：降压作用麻醉犬山绿茶 IAE 升压反应