山绿茶降压胶囊药代动力学及初步作用机制研究

作     者：张丽敏 

作者单位：辽宁中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王嘉仡

授予年度：2017年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：山绿茶 质量控制 山绿茶降压胶囊 药代动力学 作用机制 

摘      要：目的山绿茶降压胶囊是由山绿茶单味药材经醇提、精制后制成的中药制剂,具有清热解毒、平肝潜阳的功效,用于眩晕耳鸣、头痛头胀及高血压、高血脂等症。为控制山绿茶降压胶囊的质量,为后期深入研究奠定基础,本课题在实验室前期对山绿茶组分提取及药效研究基础上,针对山绿茶降压胶囊中原料药山绿茶药材进行质量控制,进而保证制剂的质量,并对山绿茶降压胶囊的药代动力学进行初步研究,初步推断有效组分在大鼠体内的变化过程,且从代谢组学、相关基因角度对山绿茶降压胶囊药效机制进行初步研究,从中药多组分、多靶点、多通路的作用特点进行阐释,为山绿茶降压胶囊临床合理应用及进一步开发奠定基础。材料与方法1.采用UPLC-Q-TOF-MS技术,通过质谱信息与对照品、相关文献和相关数据库进行比对、整合、解析,开展山绿茶药材化学成分的表征研究。同时采用HPLC法结合Matlab全时段多波长融合技术,得到同时反映山绿茶有效组分双波长信息的全时段双波长融合指纹图谱,并对山绿茶药材中多指标成分进行含量测定;采用ICP-MS技术,对其所含无机元素进行含量测定;并通过灰色关联度分析软件,对山绿茶有机、无机成分进行关联分析,更加全面对山绿茶药材进行质量控制研究。2.采用HPLC法,测定山绿茶降压胶囊中有效组分在大鼠血浆中不同时间点的血药浓度,DAS3.0软件得到药代动力学参数。3.建立L-NNA致大鼠高血压模型,以大鼠收缩压与舒张压及脏器指数为指标,考察山绿茶降压胶囊对高血压大鼠的药理药效作用。4.采用UPLC-Q-TOF-MS技术,并使用Agilent Mass Hunter Profinder、Agilent Mass Profiler Professional 12.0软件及HMDB、KEGG等数据库,对山绿茶降压胶囊干预的高血压大鼠血清样本为实验对象,通过观察体内内源性代谢产物的变化,寻找药物作用后潜在的生物标志物与代谢通路,开展基于代谢组学对山绿茶降压胶囊抗高血压作用机制的研究。5.采用RT-PCR技术,检测山绿茶降压胶囊对高血压大鼠治疗后相关通路基因的表达量,从基因的角度阐释中药制剂山绿茶降压胶囊抗高血压的作用机制。结果1.通过LC-MS对山绿茶中所含化学成分分析,共鉴定了27个化学成分。建立了10个不同采收期山绿茶药材全时段双波长融合指纹图谱,相似度评价分析表明,不同采收期的中药山绿茶指纹图谱与参照图谱相比相似度均大于0.9,说明其化学组成一致性较好。同时测定山绿茶中黄酮及酚酸共6个成分的含量测定的方法,并对山绿茶药材中22个无机元素进行了全定量检测。相关性结果表明药材中所含6个成分与所含无机元素Na、Mg、Al、Mn、Fe、Zn、Ba关联度较高。2.大鼠灌胃山绿茶降压胶囊后得到3个原形入血的成分,即绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A。绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A浓度分别在0.1080-3.455μg/m L、0.2516-8.050μg/m L、0.0800-2.5600μg/m L范围内线性关系良好(r=0.9990,0.9992,0.9953),回收率、精密度和准确度、稳定性,符合生物样品要求。可用于山绿茶降压胶囊中绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A的药代动力学研究。3.体内药效结果表明,与模型组相比,山绿茶降压胶囊给药组对高血压大鼠有明显的降压作用,且能降低心指数,对心脏有很好的保护作用。4.通过研究山绿茶降压胶囊干预高血压大鼠血清中代谢物的变化,共找到18个潜在生物标志物,主要代谢通路为能量代谢、氨基酸代谢、鞘脂类代谢。5.山绿茶降压胶囊不同程度的使高血压大鼠心脏组织中e NOS、PKG m RNA表达量升高。结论1.对山绿茶化学成分进行鉴定,为山绿茶化学物质基础研究提供快速有效的手段,基于全时段双波长融合技术构建的山绿茶指纹图谱,有效融合中药材指标成分的谱图信息,同时基于全时段双波长融合指纹图谱建立了山绿茶多指标成分的定量方法,从而较完善地反映中药材的内在质量,并测定山绿茶中无机成分含量,从无机、有机等不同方面综合评价中药及其制剂的质量提供有力补充,更全面的完善山绿茶降压胶囊的质量控制方法,后期深入研究山绿茶降压胶囊药代动力学和药效机制奠定基础。2.采用HPLC法测定山绿茶降压胶囊中有效组分的血药浓度,并对其药动学特征进行初步探索。3.山绿茶降压胶囊对L-NNA致高血压动物有很好的药理药效作用,并为后续研究山绿茶降压胶囊的降压机制奠定基础。4.从代谢组学角度研究表明山绿茶降压胶囊干预后高血压大鼠血清中的内源性代谢物变化及参与氨基酸代谢通路、鞘脂类代谢通路、能量代谢、NO/c GMP/PKG信号通路发挥药效。从基因角度检测验证相关靶点e NOS、PKG m RNA表达量变化,从多角度多方面阐释山绿茶降压胶囊治疗高血压的作用机制。