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山绿茶皂苷BF523抑制氧化低密度脂蛋白诱导泡沫细胞形成的作用机制研究

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中国中药杂志 2019年第13期44卷 2680-2685页

作者：王凌潇吴臻刘孜渝靳凤玉赵云芳屠鹏飞郑姣北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

动脉粥样硬化(AS)导致的心脑血管疾病严重危害人类健康。AS的发病过程十分复杂,其中氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱发的单核巨噬细胞向泡沫细胞的转化,被认为是AS过程中最重要的细胞学改变。课题组以'中药化学生物学'理论为指导,在系统表征... 详细信息

动脉粥样硬化(AS)导致的心脑血管疾病严重危害人类健康。AS的发病过程十分复杂,其中氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱发的单核巨噬细胞向泡沫细胞的转化,被认为是AS过程中最重要的细胞学改变。课题组以'中药化学生物学'理论为指导,在系统表征冬青属植物山绿茶化学成分的基础上,对其抗AS的药效物质进行系统的筛选,发现山绿茶皂苷BF523对泡沫细胞形成具有良好的抑制作用。因此该研究以山绿茶皂苷BF523为研究对象,研究其抑制泡沫细胞形成的作用机制,阐明山绿茶活性化合物改善AS的分子靶标。实验结果显示,山绿茶皂苷BF523显著抑制了ox LDL诱导的巨噬细胞泡沫化,并降低了巨噬细胞中脂质含量。其作用靶标是通过抑制清道夫受体CD36的mRNA和蛋白表达水平,抑制巨噬细胞对ox LDL的吞噬作用,从而抑制AS的发生和发展。该研究不仅阐明了山绿茶皂苷BF523抑制泡沫细胞形成的作用机制,也为'中药化学生物学'理论的充实提供有益探索。

关键词：山绿茶 BF523 泡沫细胞 CD36

HPLC-DAD测定不同采收期壮族药山绿茶中8种酚类成分含量

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中国中药杂志 2021年第19期46卷 5038-5043页

作者：肖萌李秀伟吴霞赵文文昝珂陈筱清首都医科大学中医药学院北京100069 中国食品药品检定研究院北京102629

建立HPLC-DAD同时测定壮族药山绿茶中绿原酸、2-羟甲基-3-羟基-1-丁烯-4-O-β-D-(6″-O-咖啡酰基)-葡萄糖苷、pubescenoside B、芦丁、华中冬青黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C等8种酚类成分含量。以上述8种... 详细信息

建立HPLC-DAD同时测定壮族药山绿茶中绿原酸、2-羟甲基-3-羟基-1-丁烯-4-O-β-D-(6″-O-咖啡酰基)-葡萄糖苷、pubescenoside B、芦丁、华中冬青黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C等8种酚类成分含量。以上述8种成分为对照品,采用Waters XBridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),0.5%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~8 min, 5%~12%B;8~18 min, 12%~18%B;18~30 min, 18%~25%B;30~40 min, 25%~30%B;40~42 min, 30%~80%B;42~45 min, 80%B),流速0.8 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长282、324、360 nm,进样量5μL。8批不同采收期山绿茶药材中绿原酸、2-羟甲基-3-羟基-1-丁烯-4-O-β-D-(6″-O-咖啡酰基)-葡萄糖苷、pubescenoside B、芦丁、华中冬青黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C分别为0.30~6.29、0.29~3.27、0.15~10.4、0.51~5.85、0.49~9.02、0.51~4.68、1.93~13.4、0.87~5.95 mg·g^(-1)。同时对不同月份采收的样品进行比较,10月份采收的样品中酚类成分含量较高。该研究可用于山绿茶药材中酚类成分的含量测定,为该药材质量标准的完善提供参考。

关键词：山绿茶 HPLC-DAD 酚类半萜苷含量测定采收期

HPLC-ELSD测定壮药山绿茶中3对三萜同分异构体含量

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中国中药杂志 2018年第8期43卷 1662-1666页

作者：刘宗洋赵文文武婧悦吴霞陈筱清昝珂首都医科大学中医药学院中医络病研究北京市重点实验室北京100069 中国食品药品检定研究院北京100050

建立山绿茶中海南冬青皂苷D、冬青皂苷A1、3β,19α-dihydroxyolean-12-ene-24,28-dioic acid（命名为ilexhainanin E）、冬青素A、齐墩果酸、熊果酸等3对齐墩果烷型、乌苏烷型三萜同分异构体HPLC-ELSD含量测定方法,用于指导山绿茶药材... 详细信息

建立山绿茶中海南冬青皂苷D、冬青皂苷A1、3β,19α-dihydroxyolean-12-ene-24,28-dioic acid（命名为ilexhainanin E）、冬青素A、齐墩果酸、熊果酸等3对齐墩果烷型、乌苏烷型三萜同分异构体HPLC-ELSD含量测定方法,用于指导山绿茶药材的质量控制。以6种三萜成分为对照品,采用Waters XBridge C（18）色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,甲醇（A）-0.5%甲酸水溶液（B）为流动相,梯度洗脱（0～18 min,70%～85%A;18～20 min,85%～95%A;20～35 min,95%A）,流速1.0 m L·min^-1;柱温30℃;ELSD漂移管70℃,载气为N2,流速2.8 L·min^-1。进样量10μL。6批山绿茶药材中海南冬青皂苷D、冬青皂苷A1、ilexhainanin E、冬青素A、齐墩果酸、熊果酸质量分数分别为3.7～8.5,10.3～22.1,2.8～5.9,7.8～14.1,2.6～3.8,8.8～11.9 mg·g^-1。该研究可用于山绿茶药材中三萜成分的含量测定,为该药材质量标准的完善提供参考。

关键词：山绿茶 HPLC-ELSD 三萜同分异构体海南冬青皂苷D 冬青皂苷A1 冬青素A 含量测定

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山绿茶化学成分研究

中药材 2012年第8期35卷 1251-1254页

作者：彭博黄卫华赵静刘华钢中药质量研究国家重点实验室暨澳门大学中华医药研究院广西医科大学

目的:研究山绿茶叶片的化学成分。方法:采用多种柱色谱方法进行分离纯化,根据理化性质,质谱和NMR波谱数据鉴定结构。结果:从山绿茶中分离鉴定了10个化合物,分别为3β,19α-二羟基乌索-12-烯-24,28-二酸(1)、3β,19α-二羟基齐敦果-12-烯... 详细信息

目的:研究山绿茶叶片的化学成分。方法:采用多种柱色谱方法进行分离纯化,根据理化性质,质谱和NMR波谱数据鉴定结构。结果:从山绿茶中分离鉴定了10个化合物,分别为3β,19α-二羟基乌索-12-烯-24,28-二酸(1)、3β,19α-二羟基齐敦果-12-烯-24,28-二羧酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、3β,19α-二羟基乌索-12-烯-24,28-二羧酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、2-咖啡酰氧甲基-3-羟基-1-丁烯-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、芦丁(5)、北美圣草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、邻苯二甲酸二丁酯(7)、丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、(2E)-2-甲基-2-丁烯-1,4-二醇-4-O-β-D-(6″-O-咖啡酰基)-吡喃葡萄糖苷(9)、1-O-咖啡酰基-(2E)-2-甲基-2-丁烯-1,4-二醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)。结论:化合物4、7～10为首次从该植物中分离得到。

关键词：冬青属山绿茶化学成分

不同微波烘烤程度的山绿茶炮制品降血压作用比较研究

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中国现代应用药学 2020年第20期37卷 2465-2468页

作者：魏江存谢臻陈勇郑锡任李耀华马家宝韩倩广西国际壮医医院南宁530201 广西中医药大学南宁530200 广西中医药大学第一附属医院南宁530023

目的对广西特产药材山绿茶进行中药炮制实验研究,并考察其降血压作用。方法使用不同炮制方法对山绿茶进行炮制;采用尾动脉法测定山绿茶不同炮制品对原发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血压的影响。结果共得到5种山... 详细信息

目的对广西特产药材山绿茶进行中药炮制实验研究,并考察其降血压作用。方法使用不同炮制方法对山绿茶进行炮制;采用尾动脉法测定山绿茶不同炮制品对原发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血压的影响。结果共得到5种山绿茶炮制品;与模型组比较,不同山绿茶炮制品均有明显的降血压效果。不同微波炮制品中,以60 g药材微波11 min组降压作用最佳。结论山绿茶最佳微波炮制工艺为60 g药材微波11 min,此方法炮制出的山绿茶药材对SHR的降压效果最好。

关键词：山绿茶中药炮制原发性高血压大鼠药效微波

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山绿茶中黄酮类成分提取纯化工艺研究

药物生物技术 2014年第5期21卷 449-452页

作者：尹睿卓王嘉仡孟宪生包永睿王帅辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 辽宁省食品药品检验所辽宁沈阳110023

采用正交试验设计,以总黄酮、芦丁提取率和出膏率为指标,优选山绿茶中黄酮类成分的提取工艺;以总黄酮、芦丁的静态吸附与解吸试验优选大孔吸附树脂型号,动态吸附与解吸试验优选黄酮类成分的纯化工艺。确定最佳提取工艺为15倍量50%乙醇... 详细信息

采用正交试验设计,以总黄酮、芦丁提取率和出膏率为指标,优选山绿茶中黄酮类成分的提取工艺;以总黄酮、芦丁的静态吸附与解吸试验优选大孔吸附树脂型号,动态吸附与解吸试验优选黄酮类成分的纯化工艺。确定最佳提取工艺为15倍量50%乙醇回流提取2次,每次1 h;最佳纯化工艺为用D101树脂,药材树脂用量比1∶2(1 g药材∶2 m L湿树脂),以2 BV/h的体积流量上样,上样液p H 3,用7 BV 50%以2 BV/h乙醇洗脱,得到精制品中总黄酮含量50.22%,芦丁含量0.52%。该工艺准确客观,重复性好,可为工业生产提供参考。

关键词：山绿茶黄酮正交试验提取大孔吸附树脂纯化工艺优选

山绿茶降压胶囊药代动力学及初步作用机制研究

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山绿茶降压胶囊药代动力学及初步作用机制研究

作者：张丽敏辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的山绿茶降压胶囊是由山绿茶单味药材经醇提、精制后制成的中药制剂,具有清热解毒、平肝潜阳的功效,用于眩晕耳鸣、头痛头胀及高血压、高血脂等症。为控制山绿茶降压胶囊的质量,为后期深入研究奠定基础,本课题在实验室前期对山绿茶组... 详细信息

目的山绿茶降压胶囊是由山绿茶单味药材经醇提、精制后制成的中药制剂,具有清热解毒、平肝潜阳的功效,用于眩晕耳鸣、头痛头胀及高血压、高血脂等症。为控制山绿茶降压胶囊的质量,为后期深入研究奠定基础,本课题在实验室前期对山绿茶组分提取及药效研究基础上,针对山绿茶降压胶囊中原料药山绿茶药材进行质量控制,进而保证制剂的质量,并对山绿茶降压胶囊的药代动力学进行初步研究,初步推断有效组分在大鼠体内的变化过程,且从代谢组学、相关基因角度对山绿茶降压胶囊药效机制进行初步研究,从中药多组分、多靶点、多通路的作用特点进行阐释,为山绿茶降压胶囊临床合理应用及进一步开发奠定基础。材料与方法1.采用UPLC-Q-TOF-MS技术,通过质谱信息与对照品、相关文献和相关数据库进行比对、整合、解析,开展山绿茶药材化学成分的表征研究。同时采用HPLC法结合Matlab全时段多波长融合技术,得到同时反映山绿茶有效组分双波长信息的全时段双波长融合指纹图谱,并对山绿茶药材中多指标成分进行含量测定;采用ICP-MS技术,对其所含无机元素进行含量测定;并通过灰色关联度分析软件,对山绿茶有机、无机成分进行关联分析,更加全面对山绿茶药材进行质量控制研究。2.采用HPLC法,测定山绿茶降压胶囊中有效组分在大鼠血浆中不同时间点的血药浓度,DAS3.0软件得到药代动力学参数。3.建立L-NNA致大鼠高血压模型,以大鼠收缩压与舒张压及脏器指数为指标,考察山绿茶降压胶囊对高血压大鼠的药理药效作用。4.采用UPLC-Q-TOF-MS技术,并使用Agilent Mass Hunter Profinder、Agilent Mass Profiler Professional 12.0软件及HMDB、KEGG等数据库,对山绿茶降压胶囊干预的高血压大鼠血清样本为实验对象,通过观察体内内源性代谢产物的变化,寻找药物作用后潜在的生物标志物与代谢通路,开展基于代谢组学对山绿茶降压胶囊抗高血压作用机制的研究。5.采用RT-PCR技术,检测山绿茶降压胶囊对高血压大鼠治疗后相关通路基因的表达量,从基因的角度阐释中药制剂山绿茶降压胶囊抗高血压的作用机制。结果1.通过LC-MS对山绿茶中所含化学成分分析,共鉴定了27个化学成分。建立了10个不同采收期山绿茶药材全时段双波长融合指纹图谱,相似度评价分析表明,不同采收期的中药山绿茶指纹图谱与参照图谱相比相似度均大于0.9,说明其化学组成一致性较好。同时测定山绿茶中黄酮及酚酸共6个成分的含量测定的方法,并对山绿茶药材中22个无机元素进行了全定量检测。相关性结果表明药材中所含6个成分与所含无机元素Na、Mg、Al、Mn、Fe、Zn、Ba关联度较高。2.大鼠灌胃山绿茶降压胶囊后得到3个原形入血的成分,即绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A。绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A浓度分别在0.1080-3.455μg/m L、0.2516-8.050μg/m L、0.0800-2.5600μg/m L范围内线性关系良好(r=0.9990,0.9992,0.9953),回收率、精密度和准确度、稳定性,符合生物样品要求。可用于山绿茶降压胶囊中绿原酸、异槲皮苷和异绿原酸A的药代动力学研究。3.体内药效结果表明,与模型组相比,山绿茶降压胶囊给药组对高血压大鼠有明显的降压作用,且能降低心指数,对心脏有很好的保护作用。4.通过研究山绿茶降压胶囊干预高血压大鼠血清中代谢物的变化,共找到18个潜在生物标志物,主要代谢通路为能量代谢、氨基酸代谢、鞘脂类代谢。5.山绿茶降压胶囊不同程度的使高血压大鼠心脏组织中e NOS、PKG m RNA表达量升高。结论1.对山绿茶化学成分进行鉴定,为山绿茶化学物质基础研究提供快速有效的手段,基于全时段双波长融合技术构建的山绿茶指纹图谱,有效融合中药材指标成分的谱图信息,同时基于全时段双波长融合指纹图谱建立了山绿茶多指标成分的定量方法,从而较完善地反映中药材的内在质量,并测定山绿茶中无机成分含量,从无机、有机等不同方面综合评价中药及其制剂的质量提供有力补充,更全面的完善山绿茶降压胶囊的质量控制方法,后期深入研究山绿茶降压胶囊药代动力学和药效机制奠定基础。2.采用HPLC法测定山绿茶降压胶囊中有效组分的血药浓度,并对其药动学特征进行初步探索。3.山绿茶降压胶囊对L-NNA致高血压动物有很好的药理药效作用,并为后续研究山绿茶降压胶囊的降压机制奠定基础。4.从代谢组学角度研究表明山绿茶降压胶囊干预后高血压大鼠血清中的内源性代谢物变化及参与氨基酸代谢通路、鞘脂类代谢通路、能量代谢、NO/c GMP/PKG信号通路发挥药效。从基因角度检测验证相关靶点e NOS、PKG m RNA表达量变化,从多角度多方面阐释山绿茶降压胶囊治疗高血压的作用机制。

关键词：山绿茶质量控制山绿茶降压胶囊药代动力学作用机制

山绿茶中Ilexgenin A诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其相关机制研究

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时珍国医国药 2014年第2期25卷 306-309页

作者：程齐来李洪亮黄志勤赣南医学院药学院江西赣州341000 湖南中医药大学湖南长沙410208

目的研究山绿茶中的乌苏烷型三萜化合物Ilexgenin A对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其相关机制。方法建立人宫颈癌HeLa细胞体外培养体系,采用CCK-8法检测细胞活力,MTT法测定LDH,免疫比色法检测细胞增殖情况,DAPI荧光染色观察细胞凋... 详细信息

目的研究山绿茶中的乌苏烷型三萜化合物Ilexgenin A对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其相关机制。方法建立人宫颈癌HeLa细胞体外培养体系,采用CCK-8法检测细胞活力,MTT法测定LDH,免疫比色法检测细胞增殖情况,DAPI荧光染色观察细胞凋亡形态学变化,Western blot检测Caspase-3/7和NF-κB蛋白表达水平。结果用IA处理过的HeLa细胞,LDH释放增加,呈剂量和时间依赖性。在CCK-8和BrdU测定过程中,IA比标准药物抗HeLa活性更强,随浓度和作用时间的增加,细胞的活性不断下降,对HeLa增殖的抑制作用明显。DAPI染色观察用IA处理过的HeLa细胞浓缩明显,细胞核分散,染色质凝聚。Western blot结果显示用IA处理过的HeLa细胞Caspase-3/7的活性显著增加,NF-κB蛋白表达水平下降。结论 Ilexgenin A具有诱导HeLa细胞凋亡的作用,其机制可能与激活Caspase-3/7和抑制NF-κB蛋白表达有关。

关键词：山绿茶 Ilexgenin A HeLa细胞凋亡 NF—κB

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山绿茶种子萌发特性研究

种子 2015年第3期34卷 47-50页

作者：姚绍嫦蓝祖栽谭文明刘丽辉利荣欢广西壮族自治区药用植物园南宁530023 广西万寿堂药业有限公司南宁530219

目的:研究山绿茶种子萌发特性,找到种子萌发的最佳条件,为山绿茶规范化、规模化种植提供种苗繁育途径和方法。方法:测定山绿茶种子形态、千粒重和含水量,研究在不同浸种时间、不同光照、不同温度条件下的发芽率,并进一步比较它们之间的... 详细信息

目的:研究山绿茶种子萌发特性,找到种子萌发的最佳条件,为山绿茶规范化、规模化种植提供种苗繁育途径和方法。方法:测定山绿茶种子形态、千粒重和含水量,研究在不同浸种时间、不同光照、不同温度条件下的发芽率,并进一步比较它们之间的相关性,同时比较不同贮藏时间下的发芽率、发芽指数、始发芽粒数和发芽天数的差异。结果:山绿茶种子平均长度为2.84 mm,宽度为1.11 mm,长宽比为2.50,千粒重平均为0.716 9 g,平均含水量为12.36%。在光照、温度等因素相同的条件下,种子浸种24 h发芽率最高;在较适宜的浸种时间和温度条件下,种子在光照下培养的发芽率极显著高于在黑暗下培养的发芽率;随着温度的增加,种子发芽率先升后降,30℃最适合种子萌发;不同的贮藏时间对山绿茶种子发芽率、发芽指数、始发芽粒数和发芽天数均有影响,4℃低温贮藏3个月的发芽率(96.33%)和发芽指数(13.78)均最高,且始发芽粒数最多(24粒),发芽所需天数最短(28 d)。结论:低温贮藏3个月,浸种24 h,30℃,光照条件,最适宜山绿茶种子的萌发。

关键词：山绿茶种子萌发最佳条件