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细胞外基质刚度通过FAK/ROCK-1/YAP通路调控尿道成纤维细胞活化

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中华实验外科杂志 2022年第3期39卷 500-502页

作者：陈烨辉陈佳茵朱君明陈航柯志滨林菲薛学义魏勇郑清水许宁福建医科大学附属第一医院泌尿外科福州350005

目的探讨基质刚度对尿道成纤维细胞(UFBs)活化的影响及其机制。方法2020年6月至2021年2月从福建医科大学附属第一医院泌尿外科手术患者获得的尿道瘢痕组织中提取原代UFBs;用聚二甲基矽氧烷分别以60∶1(Soft)、40∶1(Moderate)、30∶1(St... 详细信息

目的探讨基质刚度对尿道成纤维细胞(UFBs)活化的影响及其机制。方法2020年6月至2021年2月从福建医科大学附属第一医院泌尿外科手术患者获得的尿道瘢痕组织中提取原代UFBs;用聚二甲基矽氧烷分别以60∶1(Soft)、40∶1(Moderate)、30∶1(Stiff)的比例加入固化剂,制备不同刚度的基质凝胶,将UFBs接种其上培养。倒置显微镜观察在不同刚度基质凝胶上生长的UFBs形态学特点;蛋白质印迹法(Western blot)检测UFBs活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)表达水平;进一步检测FAK/ROCK-1/YAP通路标志蛋白表达水平,并观察整合素抑制剂Cilengtide(20 ng/ml)对其影响,探索基质刚度是否通过此通路影响UFBs活化;采用方差分析和独立样本t检验比较组间差异。结果随着基质凝胶刚度的增加,接种其上的UFBs形态由椭圆形转变为偏梭形,细胞伪足增长、增多;Soft、Moderate、Stiff组UFBs的α-SMA相对表达量分别为(0.140±0.004、0.815±0.030和1.385±0.051,F=989.247,P细胞外基质刚度通过整合素介导的FAK/ROCK-1/YAP通路调控人尿道成纤维细胞活化。

关键词：尿道成纤维细胞 FAK/ROCK-1/YAP通路尿道狭窄

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法舒地尔通过抑制兔尿道成纤维细胞Rho/ROCK通路激活减少尿道损伤后狭窄的发生

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中国病理生理杂志 2016年第12期32卷 2266-2271页

作者：许宁瞿根义陈少豪陈慧军吴宇鹏李晓东林云知魏勇郑清水黄金杯薛学义福建医科大学附属第一医院泌尿外科福建福州350005

目的:研究法舒地尔对创伤后兔尿道狭窄发生的影响及机制,观察兔尿道成纤维细胞活力、迁移以及细胞外基质合成情况。方法:利用显微外科技术建立兔尿道创伤动物模型,分为5组:假手术组,手术组,不同剂量(3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg)法舒... 详细信息

目的:研究法舒地尔对创伤后兔尿道狭窄发生的影响及机制,观察兔尿道成纤维细胞活力、迁移以及细胞外基质合成情况。方法:利用显微外科技术建立兔尿道创伤动物模型,分为5组:假手术组,手术组,不同剂量(3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg)法舒地尔组,术后3个月逆行尿道造影测量狭窄直径。从兔尿道瘢痕组织提取成纤维细胞进行传代培养,培养液中分别加入TGF-β1(10μg/L)和/或法舒地尔(12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L)。MTT比色法检测细胞活力;用Transwell小室实验检测细胞迁移能力;Western blot法检测各组Rho相关激酶(ROCK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的表达情况。结果:法舒地尔显著减少尿道损伤后狭窄发生(P成纤维细胞的活力受到抑制,细胞迁移能力逐渐减弱,ROCK、α-SMA以及胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的表达受到抑制;法舒地尔对兔尿道成纤维细胞外基质及ROCK表达起抑制作用,并呈剂量依赖性(P尿道成纤维细胞Rho/ROCK通路,抑制细胞外基质形成,减少尿道损伤后狭窄的发生。

关键词：法舒地尔 Rho相关激酶尿道成纤维细胞尿道损伤尿道狭窄

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RNA干扰LIMK1基因对法舒地尔抑制尿道成纤维细胞增殖和迁移能力的影响

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RNA干扰LIMK1基因对法舒地尔抑制尿道成纤维细胞增殖和迁移能力的...

作者：刘章奇福建医科大学

学位级别：硕士

目的LIMK1是调控细胞骨架的重要分子,课题组之前的研究表明,Rho激酶抑制剂法舒地尔可以下调成纤维细胞骨架运动相关蛋白LIM激酶1(LIM kinase,LIMK-1)的表达,从而抑制成纤维细胞的增殖和迁移,本研究旨在通过研究RNA干扰LIMK1对法舒地尔... 详细信息

目的LIMK1是调控细胞骨架的重要分子,课题组之前的研究表明,Rho激酶抑制剂法舒地尔可以下调成纤维细胞骨架运动相关蛋白LIM激酶1(LIM kinase,LIMK-1)的表达,从而抑制成纤维细胞的增殖和迁移,本研究旨在通过研究RNA干扰LIMK1对法舒地尔抑制尿道成纤维细胞迁移的影响,以阐明LIMK1是成纤维细胞迁移过程中重要的信号分子。材料和方法取原代兔尿道成纤维细胞进行体外培养,并采用RNAi技术抑制LIMK1基因的表达,RT-PCR和Western blot检测干扰效率。实验分RNA干扰组(LIMK1抑制组)和未干扰组(LIMK1正常表达组),分别加入TGF-β1(10ng/m L)和法舒地尔(50μmol/L)进行干预,共8个亚组。采用细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测各组成纤维细胞迁移能力;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western-blot检测各组α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin,以及I和III胶原蛋白表达情况。结果LIMK1基因抑制:Western blot结果显示与正常对照组比较,R1-R3组si RNA分别使LIMK1蛋白的表达水平降低了52%、70%、90%,R3组si RNA抑制最明显(P细胞划痕和Transwell小室实验显示:RNA干扰组在24h的细胞迁移距离和穿膜细胞数要显著少于未干扰组(P细胞数要少于对照组(P细胞仪检测显示:RNA干扰组的细胞早期凋亡率高于未干扰组(P细胞凋亡(P纤维蛋白表达,抑制成纤维细胞发生增殖和迁移,并增强法舒地尔抑制兔尿道成纤维细胞增殖和迁移能力。LIMK1可以做为治疗尿道瘢痕的一个潜在新靶点。

关键词：法舒地尔 RNA干扰尿道成纤维细胞 p-Cofilin LIMK-1

法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响

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局解手术学杂志 2021年第6期30卷 463-468页

作者：冯欢黄小兵付卫华朱景振李佳杨凤霞陆军军医大学第二附属医院泌尿外科中心重庆400037

目的探究法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响。方法无菌条件下获得家兔尿道瘢痕组织,采用酶解法提取原代尿道成纤维细胞,用10 ng/mL TGF-β或者联合不同浓度(0,25,50μM)法舒地尔处理后,通过Western b... 详细信息

目的探究法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响。方法无菌条件下获得家兔尿道瘢痕组织,采用酶解法提取原代尿道成纤维细胞,用10 ng/mL TGF-β或者联合不同浓度(0,25,50μM)法舒地尔处理后,通过Western blot检测α-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和自噬以及迁移相关蛋白的表达。采用Transwell实验和MTT实验分别检测成纤维细胞迁移以及增殖能力。结果Western blot结果显示,TGF-β明显上调了α-SMA蛋白、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ,法舒地尔下调了胞外基质蛋白表达(P细胞迁移数量和细胞活性(P细胞迁移数量(P细胞活性(P细胞自噬从而抑制TGF-β诱导的成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成,其作用与促进AKT/mTOR信号通路相关。

关键词：法舒地尔尿道成纤维细胞 TGF-β 自噬尿道狭窄

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法舒地尔对尿道瘢痕成纤维细胞细胞外基质合成的作用及机制

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法舒地尔对尿道瘢痕成纤维细胞细胞外基质合成的作用及机制

作者：林文福建医科大学

学位级别：硕士

目的本研究通过Rho激酶抑制剂—法舒地尔对TGF-β1体外刺激下尿道成纤维细胞的增殖、细胞外基质合成以及参与尿道疤痕收缩的细胞骨架运动相关蛋白，如α-肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化肌球蛋白轻链（myosin light chain phosphorylation，p-... 详细信息

目的本研究通过Rho激酶抑制剂—法舒地尔对TGF-β1体外刺激下尿道成纤维细胞的增殖、细胞外基质合成以及参与尿道疤痕收缩的细胞骨架运动相关蛋白，如α-肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化肌球蛋白轻链（myosin light chain phosphorylation，p-MLC）、 LIM激酶1(LIM kinase， LIMK-1)、磷酸化丝切蛋白(Cofilinphosphorylation，p-Cofilin)，以及I和III胶原蛋白的影响,进一步揭示尿道瘢痕发病机理，为各种纤维化疾病的发病机制提供新的理论和方法。方法取原代人尿道瘢痕成纤维细胞进行培养。实验分成8个组，培养液中分别加入TGF-β1(10ng/ml)，法舒地尔（12.5μmol/L，25μmol/L，50μmol/L），TGF-β1（10ng/ml）+法舒地尔（12.5μmol/L，25μmol/L，50μmol/L）以及正常对照组。用MTT比色法检测细胞活力;用流式细胞仪检测细胞的凋亡率;用Western-blot检测各组α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin，以及I和III胶原蛋白的表达。结果TGF-β1能显著增加尿道成纤维细胞活力，能诱导α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin，以及I和III胶原蛋白的表达，且随TGF-β1浓度的升高其诱导作用呈逐渐增强趋势。随着法舒地尔干预浓度增加，尿道成纤维细胞活力减弱;α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin，以及I和III胶原蛋白的表达下降;流式细胞仪检测显示在无TGF-β1作用下，较高浓度法舒地尔组早期凋亡率高于对照组(P尿道成纤维细胞早期凋亡有明显的浓度依赖性。结论法舒地尔可能通过Rho/Rock信号通路抑制TGF-β1诱导的人尿道成纤维细胞的增殖、转化和分泌细胞外基质（ECM）等生物学行为，并诱导其早期凋亡。使细胞骨架运动相关蛋白α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin表达下降，且成剂量依赖性。

关键词：法舒地尔 Rho激酶抑制剂尿道成纤维细胞 p-MLC LIMK-1