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小鼠肺泡巨噬细胞的分离及鉴定

中国生物制品学杂志 2016年第4期29卷 413-416页

作者：黄燕霞许娜赵红孙成彪刘洋陈华鑫万家余刘文森金宁一军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林医药学院吉林吉林132000

目的分离小鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM),并鉴定其纯度和吞噬活性。方法采用肺泡灌洗法分离小鼠AM,分别通过瑞氏-姬姆萨染色法和Diff-Quik染色法鉴定AM的纯度;将FITC标记的大肠埃希菌与AM按不同比例混合(10∶1、15∶1、20∶1... 详细信息

目的分离小鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM),并鉴定其纯度和吞噬活性。方法采用肺泡灌洗法分离小鼠AM,分别通过瑞氏-姬姆萨染色法和Diff-Quik染色法鉴定AM的纯度;将FITC标记的大肠埃希菌与AM按不同比例混合(10∶1、15∶1、20∶1)后孵育不同时间(20、25、30 min),荧光倒置显微镜下观察AM的吞噬活性。结果两种染色方法染色时,阳性细胞百分率均在94%以上,Diff-Quik染色法细胞阳性率略高于瑞氏-姬姆萨染色法,染色时间较瑞氏-姬姆萨染色法短,且背景干净无杂质。小鼠AM的吞噬率和吞噬指数随着FITC标记的细菌与AM比例的增加而增大,且随孵育时间的延长呈先升高再降低的趋势。当细菌与细胞比例为20∶1,孵育时间为25 min时,吞噬率和吞噬指数达最大,分别为(63.67±4.04)%和1.41±0.07。结论贴壁培养法可获得较高纯度的小鼠AM,Diff-Quik染色法鉴定巨噬细胞纯度优于瑞氏-姬姆萨染色法,其可代替瑞氏-姬姆萨染色法,成为一种快速、高效的鉴定巨噬细胞纯度的方法。

关键词：小鼠肺泡巨噬细胞 Diff-Quik染色法吞噬活性 FITC标记大肠埃希菌

小檗碱干预脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞MH-S分泌NO、IL-6等炎性介质的机制研究

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中国免疫学杂志 2020年第1期36卷 42-46页

作者：孙垚朱欢张跃南京医科大学附属儿童医院

目的:观察小檗碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞分泌炎性介质的影响,并探讨其可能的机制。方法:体外培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S,用终浓度为0.5μg/ml的LPS刺激后,加入不同浓度的小檗碱作用24 h。MTT法检测小檗碱对MH-S活力的影响;采... 详细信息

目的:观察小檗碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞分泌炎性介质的影响,并探讨其可能的机制。方法:体外培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S,用终浓度为0.5μg/ml的LPS刺激后,加入不同浓度的小檗碱作用24 h。MTT法检测小檗碱对MH-S活力的影响;采用NO测定试剂盒检测NO的含量,ELISA和RT-PCR法检测TNF-α、IL-6、IL-1及IL-12的蛋白和mRNA水平;Western blot法检测MH-S细胞中iNOS、TLR4、MyD88、IRAK-4及NF-κB p65的水平。结果:小檗碱在浓度不超过5μmol/L时,在24 h内对MH-S细胞的活力几乎无影响,在10μmol/L的浓度下对巨噬细胞的活力有抑制作用,并呈一定的时-效性。小檗碱能够显著降低MH-S细胞中NO的分泌量(P<0.05),并在蛋白和基因层面上剂量依赖性地降低TNF-α、IL-6、IL-1及IL-12的水平。小檗碱能够显著下调iNOS、TLR4、MyD88、IRAK-4及NF-κB p65的表达量(P<0.05)。结论:小檗碱能够抑制iNOS的活性,从而减少NO的分泌,同时通过抑制TLR4/MyD88/IRAK-4通路而抑制NF-κB的激活,进而发挥抗炎作用。

关键词：小檗碱小鼠肺泡巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶 TLR4/MyD88/IRAK-4信号通路核转录因子κB

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冷刺激对小鼠肺泡巨噬细胞表型的影响

中国生物制品学杂志 2023年第8期36卷 930-934,940页

作者：李倩茹周博文李鑫月逯静静徐彬杨焕民黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 嘉立荷唐山牧业有限公司河北唐山063000

目的探讨冷刺激对小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)表型的影响。方法将MH-S细胞置37℃培养24 h,于36、34、32℃分别冷刺激0、0.5、1、3、6、9、12 h,qRT-PCR法检测MH-S细胞中炎性因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及白介素-10(interl... 详细信息

目的探讨冷刺激对小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)表型的影响。方法将MH-S细胞置37℃培养24 h,于36、34、32℃分别冷刺激0、0.5、1、3、6、9、12 h,qRT-PCR法检测MH-S细胞中炎性因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及白介素-10(interleukin-10,IL-10)基因mRNA转录水平。将MH-S细胞置37℃培养24 h,于34℃冷刺激0.5 h,qRT-PCR法检测MH-S细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶(Arginase1,Arg1)基因mRNA转录水平(以冷刺激0 h为对照);免疫荧光法检测iNOS和Arg1的表达情况(以37℃培养0.5 h的MH-S细胞为阴性对照);Western blot法检测iNOS、TNF-α及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的表达水平(以37℃培养0.5 h的MH-S细胞为阴性对照)。结果 34℃培养0.5 h条件下,MH-S细胞中IL-1β及IL-10基因mRNA转录水平最高,因此采用该条件建立MH-S细胞的冷刺激模型。与0 h比较,34℃培养0.5 h的MH-S细胞中iNOS、TNF-α和Arg1基因mRNA转录水平均明显升高(t分别为3.733、12.190、6.793,P均细胞中iNOS及Arg1的荧光表达强度均有所增强,其中iNOS增强更为明显。与阴性对照组比较,刺激组MH-S细胞中iNOS和TNF-α蛋白表达水平升高,但差异无统计学意义(t分别为0.675和1.514,P均> 0.05);NF-κB表达水平明显升高(t=3.092,P 细胞中IL-1β、IL-10、TNF-α、iNOS、Agr1、NF-κB等炎性相关因子的表达,可激活MH-S细胞中的NF-κB信号通路,诱导炎症蛋白表达,促进细胞活化。

关键词：冷刺激小鼠肺泡巨噬细胞 MH-S细胞炎性因子

绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因缺失对小鼠肺泡巨噬细胞感染的影响

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中国预防兽医学报 2023年第3期45卷 295-301页

作者：操义恒王子杰王巧梅党士荣张丽媛马雪张乾义周霞黄新张星星吴桐忠钟发钢石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆石河子832000 中国兽医药品监察所北京100081

为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用,本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照,通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏... 详细信息

为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用,本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照,通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平,结果显示,与XJ10WT相比,XJ10ΔcyaA在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平在感染后0和6 h时均极显著降低(P细胞情况,采用细胞和细菌共培养方式分析XJ10ΔcyaA对MH-S细胞的黏附及侵袭能力,并通过CCK-8法分析细菌对MH-S细胞增殖的抑制情况。结果显示,XJ10ΔcyaA和XJ10WT在感染后3 h黏附MH-S细胞的活菌数量达峰值并持续至5 h,随后逐渐下降,在感染后1 h~5 h的时间段内,XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞的活菌数量均极显著低于XJ10WT(P细胞的活菌数量随着感染时间的延长逐渐升高,5 h时达到峰值,后持续下降,XJ10ΔcyaA在感染后1 h~10 h侵袭MH-S细胞的活菌数量均显著或极显著低于XJ10WT。在感染MH-S细胞后的3 h~6 h,XJ10ΔcyaA对细胞增殖的抑制率均极显著低于XJ10WT(P细胞的黏附与侵袭,抑制MH-S细胞增殖。本研究为绵羊肺源***致病机制的研究奠定了基础。

关键词：绵羊肺源大肠杆菌 cyaA基因小鼠肺泡巨噬细胞黏附及侵袭细胞增殖抑制率

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染的小鼠肺泡巨噬细胞TLR7信号转导通路的影响

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中华中医药杂志 2013年第5期28卷 1410-1412页

作者：戴启刚汪受传李佳曦徐建亚梁晓鑫南京中医药大学中医儿科研究所南京210029

目的:研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的小鼠肺泡巨噬细胞(RAW264.7)Toll样受体7(TLR7)信号转导通路的影响,探讨其可能的抗病毒机制。方法:RSV感染培养的RAW264.7细胞,用金欣口服液含药血清进行干预,24h后收集细胞及... 详细信息

目的:研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的小鼠肺泡巨噬细胞(RAW264.7)Toll样受体7(TLR7)信号转导通路的影响,探讨其可能的抗病毒机制。方法:RSV感染培养的RAW264.7细胞,用金欣口服液含药血清进行干预,24h后收集细胞及上清液,Western Blot法检测RAW264.7细胞TLR7、髓样分化因子-88(MyD88)、核因子(NF-κB)、干扰素调节因子7(IRF7)蛋白表达,ELISA法检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-α(IFN-α)的含量。结果:金欣口服液含药血清能降低RSV感染24h后TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达水平(P细胞上清液中的TNF-α表达(P<0.01),IFN-α未能测出。结论:金欣口服液含药血清可能通过抑制TLR7/MyD88/NF-κB/TNF-α通路发挥抗RSV作用。

关键词：金欣口服液含药血清呼吸道合胞病毒小鼠肺泡巨噬细胞 TLR7信号转导通路

长链非编码RNA LINC00943对结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞迁移能力的影响及机制

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中国老年学杂志 2021年第21期41卷 4788-4791页

作者：朱杰华杜文胜陈莉陈光红罗军敏遵义医科大学附属医院医学检验科贵州遵义563000 遵义医科大学检验医学院遵义医科大学基础医学院免疫学教研室

目的探究长链非编码RNA LINC00943对结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞迁移能力的影响及机制。方法取小鼠巨噬细胞MH-S随机分为对照组和模型组,对照组常规培养,模型组细胞使用感染复数为10的结核分枝杆菌H37Ra感染,随后将LINC00943小干... 详细信息

目的探究长链非编码RNA LINC00943对结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞迁移能力的影响及机制。方法取小鼠巨噬细胞MH-S随机分为对照组和模型组,对照组常规培养,模型组细胞使用感染复数为10的结核分枝杆菌H37Ra感染,随后将LINC00943小干扰RNA设为si-LINC00943组,阴性对照小干扰RNA设为si-NC组,miR-125b-5p模拟物设为miR-125b-5p mi组,阴性对照寡核苷酸设为miR-NC组转染至模型组细胞中。采用激光共聚焦显微镜观察细胞内细菌荧光强度及细胞感染比例;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶实验验证LINC00943与miR-125b-5p的结合关系;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-125b-5p的表达水平。结果与对照组相比,模型组细胞内的细菌荧光强度及细胞感染比例显著增加(P细胞感染H37Ra菌株的模型建立成功;敲低LINC00943可降低细胞内的细菌荧光强度、细胞感染比例及细胞迁移率;双荧光素酶实验证实LINC00943可与miR-125b-5p靶向结合;敲低LINC00943可促进miR-125b-5p的表达。结论敲低LINC00943可抑制结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞的迁移,其作用机制可能与上调miR-125b-5p的表达有关。

关键词：长链非编码RNA LINC00943 结核分枝杆菌小鼠肺泡巨噬细胞迁移

结核杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞铁代谢的调控作用及其机制研究

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结核杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞铁代谢的调控作用及其机制研究

作者：庄睿石河子大学

学位级别：硕士

目的：通过构建结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞模型，探讨研究不同毒力的结核分枝杆菌对小鼠肺泡巨噬细胞铁代谢调控作用机制。方法：分别将结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株（H37Rv）、卡介苗菌株（BCG）以及无菌生理盐水（... 详细信息

目的：通过构建结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞模型，探讨研究不同毒力的结核分枝杆菌对小鼠肺泡巨噬细胞铁代谢调控作用机制。方法：分别将结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株（H37Rv）、卡介苗菌株（BCG）以及无菌生理盐水（空白对照）通过小鼠尾静脉，注入小鼠体内建立小鼠的感染模型，并在感染后的1d、3d、5d、7d、9d、11d、13d、15d提取小鼠肺泡巨噬细胞总蛋白，利用ELISA方法于模型建立成功后1d、3d、5d、7d、9d、11d、13d、15d检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内铁蛋白、转铁蛋白受体、膜铁转运蛋白、乳铁蛋白的表达，并分析其时相性变化，应用Western blot技术比较分析各组小鼠肺泡巨噬细胞内铁蛋白、转铁蛋白受体于上述各时间点蛋白表达水平的时相性变化。结果： 1.感染组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量随时间延长逐渐降低，在感染后7d、9d、11d最低，差异明显，具有统计学意义（P小鼠肺泡巨噬细胞内的TfR表达量逐渐增高，于感染后7d、9d、11d最高，并且H37Rv组高于BCG组表达量，差异具有统计学意义（P小鼠肺泡巨噬细胞内FPN的表达量逐渐降低，于感染后5d、7d、9d最明显，差异具有统计学意义（P小鼠肺泡巨噬细胞分泌较高水平的Lf，与对照组比较在感染后7d、9d、11d升高最明显，差异均具有统计学意义（P小鼠肺泡巨噬细胞内Fn含量下降，提示感染导致细胞内铁离子含量的下降。 2.小鼠肺泡巨噬细胞巨噬细胞内TfR及Lf含量的升高，提示结核杆菌的感染导致巨噬细胞内摄铁通路的开放。 3.小鼠肺泡巨噬细胞巨噬细胞内FPN含量下降，提示结核杆菌的感染导致巨噬细胞内铁释放通路的关闭。

关键词：铁蛋白转铁蛋白受体膜铁转运蛋白乳铁蛋白结核分枝杆菌小鼠肺泡巨噬细胞

激素和SB203580对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-10的影响及分子机制

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激素和SB203580对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-10的影...

作者：王宾河北医科大学

学位级别：硕士

目的：长期以来糖皮质激素(glucocorticoids, GCs)作为重要抗炎药物用于炎症性肺病(inflammatory lung disease, ILD)的治疗。ILD是由于炎症、免疫等各种因素导致肺及支气管内大量巨噬细胞、中性粒细胞等炎症细胞浸润，释放大量炎症介... 详细信息

目的：长期以来糖皮质激素(glucocorticoids, GCs)作为重要抗炎药物用于炎症性肺病(inflammatory lung disease, ILD)的治疗。ILD是由于炎症、免疫等各种因素导致肺及支气管内大量巨噬细胞、中性粒细胞等炎症细胞浸润，释放大量炎症介质产生瀑布级联，进而引起肺内炎性介质和抗炎介质失衡造成的肺脏疾病。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)，可以通过刺激机体各种免疫细胞产生大量的细胞炎性介质，进而诱发ILD。肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages，AMs)是LPS的主要效应细胞，释放内源性炎症因子产生瀑布级联是导致炎症发生、发展的根本原因。信号转导转录激活子-3(Signal transducers and activators of transcription-3,STAT3)的激活在调控ILD起着关键的作用。抑制丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号转导通路能减少致炎症细胞因子的释放。本实验以小鼠AM为研究对象，观察激素与p38MAPK特异性抑制剂SB203580对LPS刺激的上述细胞分泌TNF-α、IL-10的影响，分析两者是否存在协同作用并进一步探讨STAT信号途径在其中的作用，为临床应用激素及p38MAPK抑制剂治疗ILD提供理论基础。方法： ***检测LPS刺激细胞上清液中的TNF-α浓度。培养MH-S细胞株，调节细胞浓度到1×10/ml，于24孔板中培养过夜，随机分组：①对照组：加入与各实验组体积相同的无血清RPMI1640培养液;②LPS+Dex组：终浓度为1×10mol/L的DEX预孵育2h后LPS刺激2h、6h、12h;③Dex组：终浓度为1×10mol/L的DEX刺激2h、6h、12h;④Dex+SB203580+LPS组：终浓度为1×10mol/L的DEX预孵育2h后，终浓度为10μmol/L的SB203580预孵育20min后LPS刺激2h、6h、12h;⑤LPS+SB203580组：终浓度为10μmol/L的SB203580预孵育20min后LPS刺激2h、6h、12h;⑥LPS组：终浓度为100ng/ml的LPS刺激2h、6h、12h。各组细胞刺激成功后取上清液， ELISA测定细胞上清液中TNF-α的含量。 2. ELISA检测LPS刺激细胞上清液中的IL-10浓度。方法及分组同TNF-α测定。 3.免疫细胞化学法检测MH-S细胞中p-STAT3的表达。将MH-S细胞于24孔板中进行爬片，调节细胞浓度到1×106/ml，培养过夜，随机分组：①对照组：加入与各实验组体积相同的无血清RPMI1640培养液;②LPS+Dex组：终浓度为1×10mol/L的DEX预孵育2h后，LPS刺激30min;③Dex组：终浓度为1×10mol/L的DEX刺激30min;④Dex+SB203580+LPS组：终浓度为1×10mol/L的DEX预孵育2h后，终浓度为10μmol/L的SB203580预孵育20min后，LPS刺激30min;⑤LPS+SB203580组：终浓度为10μmol/L的SB203580预孵育20min后，LPS刺激30min;⑥LPS组：终浓度为100ng/ml的LPS刺激30min。各组MH-S细胞刺激成功后，用免疫细胞化学法检测各组细胞中的p-STAT3表达变化。 *** blot方法检测MH-S细胞内p-STAT3、STAT3的表达。实验分组同免疫细胞化学法，于6孔板中上述各组细胞刺激成功后收集细胞，检测细胞内p-STAT3、STAT3表达。数据以均数±标准差()表示，各组比较用单因素方差分析(Oneway ANOVA)，各组之间进一步用Student-Newman-Keuls(SNK-q)检验进行两两比较分析是否有显著性差异，P细胞上清液中TNF-α含量的变化：LPS刺激MH-S细胞后，细胞上清液中TNF-α含量在2h已经开始升高，6h达高峰，12h稍下降，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);DEX预处理后，抑制LPS诱导的TNF-α增加，与LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05);SB203580预处理后，抑制LPS诱导的TNF-α增加，与LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05);DEX和SB203580共同预处理后发挥协同作用，进一步抑制LPS诱导的TNF-α增加，与DEX+LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05)，与SB+LPS组在2h、6h、12h分别比较差异也有统计学意义(P<0.05)。

关键词：炎症性肺病 p38MAPK抑制剂糖皮质激素小鼠肺泡巨噬细胞信号转导及转录活化子-3 肿瘤坏死因子-α 白介素-10 脂多糖

STAT3在地塞米松对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞功能变化中的作用

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STAT3在地塞米松对LPS刺激小鼠肺泡巨噬细胞功能变化中的作用

作者：刘登昌河北医科大学

学位级别：硕士

目的:炎症性肺病以肺内大量炎症细胞浸润,炎症介质释放,进而引起促炎/抗炎系统失衡为特征的肺脏疾病。长期以来糖皮质激素(glucocorticoids,GC)作为抗炎药用于炎症性肺病的治疗,但其个体疗效存在差异,其信号转导机制尚未明了。肺泡巨噬... 详细信息

目的:炎症性肺病以肺内大量炎症细胞浸润,炎症介质释放,进而引起促炎/抗炎系统失衡为特征的肺脏疾病。长期以来糖皮质激素(glucocorticoids,GC)作为抗炎药用于炎症性肺病的治疗,但其个体疗效存在差异,其信号转导机制尚未明了。肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)是主要炎症细胞之一,在炎症性肺病发生发展过程中起重要作用。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性杆菌产生的内毒素的主要活性成分,能够刺激机体免疫细胞产生炎症介质,促进炎症性肺病的发展。信号转导转录激活子-3(Signal transducers and activators of transcription-3,STAT3)的激活可以抑制炎症细胞因子的产生。本实验以小鼠AM为研究对象,观察地塞米松(dexamethasone, DEX)对LPS刺激的上述细胞分泌TNF-α、IL-10的影响,初步探讨STAT3在地塞米松对小鼠AM分泌TNF-α及IL-10影响中的作用,为临床应用糖皮质激素治疗炎症性肺病提供理论基础。方法:1. ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α的浓度。培养MH-S细胞株,调节细胞浓度为5×106/ml,随机分组:①对照组:加入与实验组同体积的无血清RPMI1640培养液;②LPS组:终浓度为100ng/ml的LPS刺激2h、6h、12h;③DEX10-6mol/L +LPS组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX孵育后2h用LPS刺激2h、6h、12h;④DEX10-8mol/L +LPS组:终浓度为1×10-8mol/L的DEX孵育后2h用LPS刺激2h、6h、12h;⑤DEX10-6mol/L组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX刺激2h、6h、12h;⑥DEX10-8mol/L组:加入终浓度为1×10-8mol/L的DEX刺激2h、6h、12h。各组刺激成功后取细胞上清液,用ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α的含量。2. ELISA试剂盒检测细胞细胞上清液中IL-10的浓度。方法及分组同TNF-α测定。3.免疫细胞化学法检测MH-S细胞中p-STAT3的表达。将MH-S细胞于培养板中进行爬片,调节细胞浓度为5×106/ml,随机分组:①对照组:加入与实验组同体积的无血清RPMI1640培养液;②LPS组:终浓度为100ng/ml的LPS分别刺激30min、2h、4h;③DEX+LPS组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX孵育2h后,用LPS分别刺激30min、2h、4h;④DEX组:终浓度为1×10-6mol/L的DEX分别刺激30min、2h、4h。各组细胞刺激成功后,用免疫细胞化学法检测各组MH-S细胞中STAT3表达的变化。数据以均数±标准差( )表示,各组比较用单因素方差分析(One way ANOVA),有显著性进一步用Student-Newman-Keuls(SNK-q)检验,P细胞上清液中TNF-α含量的变化: LPS刺激2h(164.29±0.44)pg/ml、6h(532.90±0.99)pg/ml、12h(350.78±10.29)pg/ml均明显高于对照组(30.81±3.81)pg/ml (P0.05);DEX10﹣8 mol/L +LPS12h组低于LPS12h组(P0.05)。2.细胞上清液中IL-10含量的变化:对照组(23.21±0.35)pg/ml。LPS刺激2(h24.89±0.24)pg/ml较对照组

关键词：炎症性肺病糖皮质激素小鼠肺泡巨噬细胞信号转导及转录活化子-3 肿瘤坏死因子-α 白介素-10 脂多糖