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小鼠早期胚胎细胞中的网架状结构

分子细胞生物学报 1982年第4期 71-81页

作者：韩贻仁,蓝厚珍,刘玉章山东大学生物系山东大学生物系山东大学生物系

对小鼠受精卵至16细胞阶段的早期胚胎细胞做了电镜观察。这些阶段的细胞质中含有大量规则排列的网架状结构,在切面上表现为平行链。每条链是由颗粒物质串连而成,颗粒的直径约为210-230埃。自4细胞阶段以后,网架状结构中有的平行链弯曲... 详细信息

对小鼠受精卵至16细胞阶段的早期胚胎细胞做了电镜观察。这些阶段的细胞质中含有大量规则排列的网架状结构,在切面上表现为平行链。每条链是由颗粒物质串连而成,颗粒的直径约为210-230埃。自4细胞阶段以后,网架状结构中有的平行链弯曲成半圆形或指纹状,小弯侧之链转变成螺旋排列的多核糖体。这种转变反映出核糖体由储备状态变为活动状态。网架状结构在卵母细胞发育中形成。生长卵母细胞的细胞质嗜碱性减弱与网架状结构的形成和多核糖体数量的减少有着相应的关系。早期胚胎细胞的弱嗜碱性,可能仍系因含大量网架状结构和多核糖体较少所致。根据超微结构形态变化和染色反应表明,网架状结构是小鼠卵母细胞和早期胚胎细胞中核糖体的储备形式。这些母体来源的核糖体在早期胚胎发育中逐渐动用。

关键词：卵母细胞网架小鼠早期胚胎嗜碱性滤泡细胞细胞质胞浆

Rho激酶抑制剂Y-27632对小鼠早期胚胎发育的影响

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安徽农业科学 2010年第17期38卷 9021-9022,9025页

作者：赵虎张鹏吴兴龙李相运河北农业大学动物科技学院河北保定071001 河北省牛羊胚胎工程技术研究中心河北保定071001

[目的]研究Rho激酶特异抑制剂Y-27632对小鼠早期胚胎发育的影响。[方法]取小鼠早期胚胎2细-胞,经体外培养1~2 d后,进行细胞计数、受体移植,观测Rho激酶抑制剂Y-27632对细胞数目和胚胎着床效率的影响。[结果]早期胚胎经Y-27632处理后,胚... 详细信息

[目的]研究Rho激酶特异抑制剂Y-27632对小鼠早期胚胎发育的影响。[方法]取小鼠早期胚胎2细-胞,经体外培养1~2 d后,进行细胞计数、受体移植,观测Rho激酶抑制剂Y-27632对细胞数目和胚胎着床效率的影响。[结果]早期胚胎经Y-27632处理后,胚胎发育延迟,囊胚出腔脱带时间推后,试验组胚胎桑椹胚、囊胚发育率同对照组差异不显著（P〉0.05）,与同期胚胎相比细胞数目增加,差异显著（P〈0.05）,着床效率相当。[结论]Rho激酶特异抑制剂Y-27632对小鼠早期胚胎细胞数目增加和延迟着床具有重要作用。

关键词： Rho激酶特异抑制剂Y-27632 小鼠早期胚胎发育能力

Neuronatin（NNAT）在猪孤雌胎儿及小鼠早期胚胎中的表达模式研究

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Neuronatin（NNAT）在猪孤雌胎儿及小鼠早期胚胎中的表达模式研究

作者：陈仙菊吉林大学

学位级别：硕士

自然界中，孤雌生殖现象在无脊椎动物和低等脊椎动物中较常见，但在哺乳动物中无天然孤雌生殖发生。科学家们通过将MⅡ期卵母细胞经体外激活并移植入受体，发现孤雌胚胎可着床并发育至体节期。普遍认为，印迹基因的异常表达与哺乳动物... 详细信息

自然界中，孤雌生殖现象在无脊椎动物和低等脊椎动物中较常见，但在哺乳动物中无天然孤雌生殖发生。科学家们通过将MⅡ期卵母细胞经体外激活并移植入受体，发现孤雌胚胎可着床并发育至体节期。普遍认为，印迹基因的异常表达与哺乳动物孤雌的发育阻滞相关。已有研究对小鼠、人、牛等物种的配子以及早期胚胎的多种印迹进行甲基化动态检测。母源印迹基因NNAT，最早发现于新生大鼠的大脑中，在神经生长和代谢调控中发挥重要作用。为探讨NNAT对孤雌发育及早期胚胎发育的影响，本研究以猪孤雌PA（parthenogenetic）胎儿和小鼠早期胚胎为研究对象，对NNAT的转录水平以及甲基化水平进行检测。本实验首先通过体外孤雌激活技术和人工授精方法分别获得怀孕28天（D28）的猪PA和正常胎儿，以及猪精子和MⅡ期（Metaphase Ⅱ）卵母细胞作为实验研究对象。通过Q-PCR（quantitative real-time PCR）和BSP（bisulfitesequencing PCR）方法比较了NNAT基因在PA和对照样品中的表达水平以及启动子的甲基化模式。结果发现，与正常胎儿样品相比，NNAT在PA样品中表达缺失（P 早期阶段猪孤雌发育失败相关。 Q-PCR检测发现，NNAT的mRNA在成年小鼠脑中表达，而在肝中无表达（P小鼠NNAT的DMR。小鼠配子的CpG3甲基化分析表明，与NNAT在猪MⅡ期卵母细胞高甲基化状态不同，在小鼠MⅡ卵母细胞中为低甲基化水平。推测NNAT的表达模式可能存在种间差异。通过超排的方法获得小鼠受精胚胎，用KSOM进行体外培养收集不同时期胚胎，检测NNAT CpG3的甲基化水平。结果显示，以4细胞期和桑葚胚为转折点，NNAT CpG3的甲基化水平呈升高降低又升高的动态变化。而CpG3的1，2，4-6，8，10，12-14号位点在不同胚胎时期以及组织中有较明显的甲基化程度变化，推测这几个位点可能是小鼠NNAT调控区的关键位点。本研究揭示了猪NNAT启动子CpG岛高甲基化介导的基因表达沉默可能与早期阶段猪孤雌发育失败相关。并首次在小鼠早期胚胎中进行NNAT甲基化动态检测，为NNAT在哺乳动物发育中的功能研究奠定基础。

关键词： NNAT DMR 猪孤雌胎儿小鼠早期胚胎 CpG3 启动子甲基化

ICR小鼠早期胚胎暴露于工作状态下1.5T MRI的安全性研究

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ICR小鼠早期胚胎暴露于工作状态下1.5T MRI的安全性研究

作者：王静浙江大学

学位级别：硕士

目的近年来,磁共振(Magnetic Resonance Imaging, MRI)发展十分迅速,已广泛应用于临床并得到了社会认可。但同时MRI的安全问题也越来越受关注,特别是妊娠期妇女MRI暴露后是否会影响胚胎／胎儿的生长发育观点不一。已有大量的研究表明,... 详细信息

目的近年来,磁共振(Magnetic Resonance Imaging, MRI)发展十分迅速,已广泛应用于临床并得到了社会认可。但同时MRI的安全问题也越来越受关注,特别是妊娠期妇女MRI暴露后是否会影响胚胎／胎儿的生长发育观点不一。已有大量的研究表明,妊娠中晚期暴露后(主要是胎儿磁共振)对胎儿没有明显不利影响。但胚胎早期发育是生命形成最关键阶段,也是对外环境影响最敏感和最易触发非生理变化的时期。该阶段的生命进程一旦受到外界环境的干扰,将可能导致流产或胎儿宫内发育异常或出生子代迟发性异常。 MRI的安全隐患来源于三大磁场,强大的静磁场,随时间变化的梯度磁场及脉冲射频磁场。静磁场的生物学效应、梯度磁场的噪声及射频磁场的热效应是可能影响胚胎发育的因素。关于它们对胚胎的影响,早在上世纪90年代研究者就做过很多的探索,大部分研究都没有异常发现,但仍有部分学者在动物实验中观察到了畸胎率增加、胎儿宫内发育迟缓等现象。但这些研究年度久远,当时的MRI磁场强度低;很多研究都是观察MRI单个磁场的影响,并不是正常工作状态下的暴露;且观察的指标粗糙,集中在暴露后的流产、死产率、畸胎率等大体水平,没有更深一步的基因、RNA、蛋白领域研究。故目前为止,仍然没有确切的证据证明MRI是足够安全的。本研究从宫内发育的表观水平及蛋白水平两方面探讨工作状态下1.5T MRI暴露后对小鼠早期胚胎的影响及可能的机制,为妇产科医生合理使用MRI提供更从分的依据。方法妊娠10.5天小鼠随机分为15min、30min、60min暴露组,并设立对应的假暴露组。暴露组MRI常规盆腔序列扫描15min、30min、60min。之后饲养4小时、足月后处理。 1.饲养4后脱颈处死,取出胚胎,提取胚胎蛋白,通过TMT蛋白组学技术找出暴露组与假暴露组的差异蛋白,并分析这些蛋白质的功能作用,得到目标蛋白。 2.饲养足月后剖腹产取出胎儿,比较暴露组与假暴露组母鼠的着床总数、胎窝总重、胎盘窝重、活胎率、死胎率、吸收胎率、畸胎率;比较暴露组与假暴露组鼠仔的胎重、顶臀长、尾长。结果 1.15min、30min、60min暴露组与对应的假暴露组蛋白谱存在明显差异。以比值大于1.5或小于1/1.5作为筛选门槛,15min-VS-15min control得到的上调蛋白为31个,下调蛋白147个;30min-VS-30min control得到的上调蛋白有217个,下调蛋白508个;60min-VS-60min control得到的上调蛋白有280个,下调蛋白有392个。表明在MRI处理后,有很多蛋白的表达出现了差异,下调的蛋白较多。在三个时间段中没有同时上调的蛋白,同时下调的蛋白有2个。在15min、30min中同时上调蛋白1个,下调的2个;30min和60min同时上调的4个,下调的24个,15min和60mmin同时上调的蛋白有8个,同时下调的蛋白有68个。 2.对30min-VS-30min control差异蛋白谱进行分析,发现其主要参与了细胞的连接黏附、碳源的利用和合成、DNA和RNA的代谢和降解、蛋白质合成前体-氨基酸的代谢和合成、蛋白质的合成模块和蛋白降解和脂质的合成等。其中差异最显著的10余个蛋白主要参与了细胞物质的运输和信号传导,嘌呤的代谢、RNA的代谢、脂肪酸的合成等。 3.15min、30min、60min暴露组与假暴露组比较,母鼠的着床总数、胎窝总重、胎盘窝重、活胎率、死胎率、吸收胎率、畸胎率;鼠仔的胎重、顶臀长、尾长差异无统计学意义。结论正常工作条件下1.5TMRI暴露15min、30min、60min时间,将引起小鼠早期胚胎蛋白表达谱的改变;不同时间段所引起的蛋白谱的改变差异很大;但暴露后未发现胎儿宫内生长发育异常。

关键词： MRI 小鼠早期胚胎蛋白组学安全性

Rho激酶抑制剂Y-27632对小鼠早期胚胎发育的影响

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Rho激酶抑制剂Y-27632对小鼠早期胚胎发育的影响

作者：赵虎河北农业大学

学位级别：硕士

在哺乳动物胚胎的发育过程中大约有30%-70%的胚胎夭折,绝大部分在胚胎发育的早期。体外胚胎发育过程中有着大量发育异常的细胞。细胞凋亡是体细胞清除发育异常细胞的重要途径。研究发现,早期胚胎异常细胞的清除也是靠细胞凋亡途径进行... 详细信息

在哺乳动物胚胎的发育过程中大约有30%-70%的胚胎夭折,绝大部分在胚胎发育的早期。体外胚胎发育过程中有着大量发育异常的细胞。细胞凋亡是体细胞清除发育异常细胞的重要途径。研究发现,早期胚胎异常细胞的清除也是靠细胞凋亡途径进行的。在附植前胚胎中凋亡现象的存在较为普遍,即使正常形态的胚胎也存在着凋亡现象,而细胞凋亡是多基因严格控制的过程,其发生是凋亡基因表达的直接结果。为了提高胚胎体外培养存活的能力,探索通过改变培养条件,添加凋亡抑制剂来抑制胚胎细胞的凋亡。研究发现,胚胎凋亡可以观察到一些形态上的凋亡变化。凋亡细胞形态的改变是由细胞骨架的变化所引起的,而细胞骨架的变化涉及Rho激酶(Rho associated kinase, ROCK)的作用。其中Y-27632被广泛地用作为Rho激酶的特定抑制剂。近年来发现Rho/Rho激酶信号转导通路在胚胎发育过程中起着重要的作用。Y-27632影响胚胎发育能力的研究已有相关的报道,但这些研究大多停留于各时期胚胎发育率的数据统计,而对Y-27632对胚胎作用的分子机制没有做进一步的深入研究。对早期胚胎发育过程中凋亡基因表达变化的研究对于揭示早期胚胎发育机制有重要的意义。本实验采用形态学观察、TUNEL检测、实时荧光定量PCR的方法,检测Rho激酶特异性抑制剂Y-27632在体外培养条件下对小鼠早期胚胎细胞凋亡及凋亡基因Bcl-2家族(Bax、Bcl-2)表达的影响,初步揭示了Y-27632可能通过调节Bcl-2家族基因的表达,改变小鼠胚胎的质量。通过形态观察,发现10μM浓度的Y-27632最适宜小鼠早期胚胎的发育。实验组同对照组相比,在2-细胞胚胎培养1d和2d后,桑椹胚、囊胚发育率差异不显著(P>0.05)。在培养2d和3d后,分别对胚胎进行细胞计数,发现:2d时,实验组显著高于对照组(P0.05)。并且分别对实验组对照组胚胎进行受体移植,发育出生率差异不显著(P>0.05)。结果说明,Y-27632在早期对胚胎细胞数目的增加有一定影响。经TUNEL凋亡试剂盒染色观察,培养2d时,实验组对照组均不表现凋亡迹象;培养3d时,实验组凋亡迹象显著高于对照组。结果说明,用Y-27632短期培养胚胎不引起凋亡,长期培养引起胚胎的凋亡。用实时荧光定量PCR研究发现,Y-27632对小鼠早期胚胎发育过程中Bax和Bcl-2表达有明显的影响。10μM的Y-27632在2-细胞胚胎培养3d后,表现出Bax表达增强,Bcl-2表达减弱,说明Y-27632长期培养胚胎促进了细胞的凋亡。

关键词： Rho激酶抑制剂Y-27632 小鼠早期胚胎发育能力细胞凋亡基因表达

PTEN在小鼠早期胚胎发育过程中的定位表达及其影响

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PTEN在小鼠早期胚胎发育过程中的定位表达及其影响

作者：徐薇西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究主要探讨了PTEN在小鼠早期胚胎发育过程中的影响及其作用。实验一:利用Q-PCR、Western blot、免疫荧光染色技术及紫外分光度仪检测PTEN在早期各期胚胎中的表达定位和酶活性。结果发现,PTEN mRNA表达量从卵母细胞开始到2细胞期逐... 详细信息

本研究主要探讨了PTEN在小鼠早期胚胎发育过程中的影响及其作用。实验一:利用Q-PCR、Western blot、免疫荧光染色技术及紫外分光度仪检测PTEN在早期各期胚胎中的表达定位和酶活性。结果发现,PTEN mRNA表达量从卵母细胞开始到2细胞期逐渐降低;致密化到囊胚期间又呈现出一个降低趋势。2细胞到8细胞之间的PTEN mRNA表达量差异不显著;8细胞期与桑葚胚期,囊胚期差异明显;而卵母细胞期与合子期,桑葚胚与囊胚之间差异并不显著。PTEN蛋白表达量呈现出一个复杂的变化过程。从GV期开始减弱,合子期时有一定的回升;2细胞期又减弱;8细胞和桑葚胚期出现显著增强,囊胚期又逐渐降低。PTEN在小鼠胚胎各期中的定位也是不均等和不规律的。从GV期到成熟卵母细胞过程中PTEN的分布从核中转移到膜上,8细胞期时在胞质中呈弥散分布,桑葚胚期只在外层细胞的细胞膜与核中聚集,囊胚期只在滋养外胚层中出现。PTEN的酶活检测发现,合子期、8细胞、致密化8细胞与其他期相比差异显著,酶活远没有其他期高。在2细胞和囊胚期酶活有一个显著的变化,有所升高;合子期有所下降,从桑葚胚到囊胚又有一个显著升高。通过实验研究表明,PTEN在小鼠胚胎早期发育表达水平和定位都表现出了很有趣的变化,这些变化可能与PTEN参与其中一系列的生化活动,如细胞分裂、细胞死亡、细胞分化以及细胞迁移有关。实验二:在体外培养液中加入PTEN酶活抑制剂bpv(pic)对2细胞胚胎进行体外培养,并对胚胎的发育状况和细胞凋亡数进行统计。收集体内各期胚胎并对PTEN的酶活进行检测。结果发现,在胚胎形态方面,与正常培养组相比,10μmol/L bpv(pic)组胚胎发育较慢,囊胚腔相对较小,孵化困难,死亡率高,并出现胚胎退化现象。而1μmol/L bpv(pic)组胚胎与对照组形态差距不明显。在胚胎发育上,1μmol/L bpv(pic)与对照组相比囊胚发育率差异不显著,10μmol/L bpv(pic)囊胚发育率显著降低。采用TUNEL标记法进行胚胎细胞凋亡检测。1μmol/L bpv(pic)和10μmol/L bpv(pic)囊胚期细胞凋亡率均显著高于对照组。通过实验表明,PTEN参与胚胎早期发育,并对于早期发育过程中关键时期囊胚期腔化有一定的影响。

关键词： PTEN 小鼠早期胚胎 bpv(pic) 细胞极性

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小鼠早期胚胎与肿瘤细胞共培养下的相互作用

华西医学 2016年第9期31卷 1525-1529页

作者：蒋莎莎谭春路张浩罗峰李可洲四川大学华西医院肿瘤科成都610041 成都市第三人民医院肿瘤科四川大学华西医院胰腺外科

目的建立小鼠早期胚胎与肿瘤细胞体外共培养模型,以观察共同微环境中胚胎发育情况及肿瘤细胞生物学行为,并探讨两者间的相互作用。方法获取小鼠2-细胞胚胎,与小鼠肿瘤细胞株体外共培养,观察胚胎的体外发育状况,并观测4-细胞胚胎、桑葚... 详细信息

目的建立小鼠早期胚胎与肿瘤细胞体外共培养模型,以观察共同微环境中胚胎发育情况及肿瘤细胞生物学行为,并探讨两者间的相互作用。方法获取小鼠2-细胞胚胎,与小鼠肿瘤细胞株体外共培养,观察胚胎的体外发育状况,并观测4-细胞胚胎、桑葚胚、囊胚的形成率。采用插入式细胞培养皿共培养,噻唑蓝法检测肿瘤细胞的增殖活力及流式细胞术检测其凋亡率;通过碘化丙啶染色及免疫组织化学技术,进一步分析肿瘤细胞与早期胚胎共培养时的相互作用。结果体外共培养下2-细胞胚胎可存活并继续发育,且4-细胞胚胎、桑葚胚、囊胚形成率较阴性及阳性对照组均有显著提高(P0.05);胚胎滋养层周围可形成"无瘤圈",其周围肿瘤细胞增殖细胞核抗原及B细胞淋巴瘤/白血病-2的表达水平较其他区域未见差异。结论早期胚胎与肿瘤细胞共培养可显著提高2-细胞胚胎的体外发育效率,局部共培养并未对肿瘤细胞的增殖、凋亡产生影响。

关键词：小鼠早期胚胎肿瘤细胞共培养肿瘤增殖肿瘤凋亡

不同浓度氯化钾对小鼠早期胚胎体外发育的影响

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阜阳师范大学学报（自然科学版） 2022年第2期39卷 48-53页

作者：王秋月王美亚于芳芳白璐佳李文雍张迪阜阳师范大学生物与食品工程学院安徽阜阳236037

钾离子是细胞内存在的主要离子之一,在胚胎发育过程中扮演着重要角色,为了探讨钾离子对小鼠体外胚胎发育的影响,本研究将经体外受精获得的小鼠卵在分别含0 mM、2.5 mM(对照组)、12.5 mM和50 mM KCl的KSOM中进行培养。通过对其各阶段发... 详细信息

钾离子是细胞内存在的主要离子之一,在胚胎发育过程中扮演着重要角色,为了探讨钾离子对小鼠体外胚胎发育的影响,本研究将经体外受精获得的小鼠卵在分别含0 mM、2.5 mM(对照组)、12.5 mM和50 mM KCl的KSOM中进行培养。通过对其各阶段发育情况进行分析,探索钾离子浓度对小鼠早期胚胎发育的作用。结果表明,在不含KCl的KSOM中,只有极少数胚胎可以发育到2-cell时期。当KCl浓度达到12.5 mM时,发育到囊胚期的胚胎数明显减少,当KCl浓度达到50 mM时,胚胎基本都停滞在2-cell和4-cell期。此外,采用DiBAC4(3)染色方法对受精卵细胞膜电位进行了分析,结果显示高浓度的钾离子可以有效改变受精卵的细胞膜电位。本研究表明,适当浓度的钾离子是胚胎发育的前提条件之一,高浓度钾离子可影响胚胎细胞膜电位,并抑制胚胎的正常发育。

关键词：小鼠早期胚胎氯化钾细胞膜电位

应用于小鼠早期胚胎细胞的ChIP-seq体系中基因组水解酶的筛选

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现代畜牧科技 2020年第1期39卷 8-11页

作者：高晗钟蓓东北农业大学生命科学学院

在过去的十几年中,染色质免疫共沉淀测序技术(ChIP-seq)成为了分析表观基因组和鉴定DNA相关蛋白重要结合位点的主要技术。然而,ChIP-seq技术目前仍存在一些技术难点。其中一个重要限制是ChIP-seq需要大量的起始材料,需要至少数百万个细... 详细信息

在过去的十几年中,染色质免疫共沉淀测序技术(ChIP-seq)成为了分析表观基因组和鉴定DNA相关蛋白重要结合位点的主要技术。然而,ChIP-seq技术目前仍存在一些技术难点。其中一个重要限制是ChIP-seq需要大量的起始材料,需要至少数百万个细胞才能启动,然而实验中有两个关键步骤往往会造成所使用的样本丢失,即染色质制备和免疫沉淀。本实验通过从染色体制备入手,通过选择两种不同核酸水解酶DNase和MNase,设计不同实验组验证最佳酶切浓度,以优化ChIP-seq体系。结果证明0.1U/μL的MNase为本实验中ChIP-seq最佳酶切浓度。结果为ChIP-seq体系的优化提供了参考,对ChIP-seq技术在小鼠早期胚胎细胞中的应用以及发展有一定的积极意义。

关键词：小鼠早期胚胎 ChIP-seq 核酸水解酶酶切效率