检索结果-南通市图书馆

小麦黄花叶病毒河南驻马店分离物的鉴定与全序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华北农学报 2010年第2期25卷 5-11页

作者：张宗英徐建美韩成贵张振臣李大伟于嘉林中国农业大学植物病理系北京100193 中国农业大学农学与生物技术国家重点实验室北京100193 河南省农业科学院植物保护研究所河南郑州450002

采集河南省驻马店市13个不同田块小麦样品，利用RT—PCR、ELISA和WesternBlotting检测技术进行检测，结果表明，该地有小麦黄花叶病毒的存在与分布。对检测为阳性的一个分离物全序列进行cDNA克隆和测序，与已报道WYMV河南潢川、江苏扬... 详细信息

采集河南省驻马店市13个不同田块小麦样品，利用RT—PCR、ELISA和WesternBlotting检测技术进行检测，结果表明，该地有小麦黄花叶病毒的存在与分布。对检测为阳性的一个分离物全序列进行cDNA克隆和测序，与已报道WYMV河南潢川、江苏扬州、四川雅安和日本分离物的全序列进行比对，RNAl核苷酸一致性为97．1％～98．4％；RNA2为95．1％～98．4％；氨基酸一致性分别为94．8％～97．8％和94．2％～98．2％。利用软件MEGA4．1对上述五个RNAl和RNA2的全序列分别进行进化树分析，结果表明，驻马店分离物与潢川亲缘关系最近，而与四川雅安亲缘关系最远。

关键词：小麦黄花叶病毒驻马店分离物病毒检测基因组全序列

小麦黄花叶病毒Nib蛋白介导的体外转录体系的创建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物病理学报 2019年第2期49卷 212-218页

作者：耿国伟于成明李向东原雪峰山东农业大学植物保护学院植物病理学系山东省农业微生物重点实验室泰安271018

本研究是利用异源表达的小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)复制酶Nib蛋白创建了病毒核酸的体外复制系统。将WYMV的Nib编码序列扩增并插入到大肠杆菌表达载体p MAL-C2X中以构建原核表达质粒p MAL-WYNib。0.4 mmol·L^(-1)I... 详细信息

本研究是利用异源表达的小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)复制酶Nib蛋白创建了病毒核酸的体外复制系统。将WYMV的Nib编码序列扩增并插入到大肠杆菌表达载体p MAL-C2X中以构建原核表达质粒p MAL-WYNib。0.4 mmol·L^(-1)IPTG诱导可特异性表达分子量约为100 k Da的M BP-Nib融合蛋白。根据温度梯度测定,20℃下诱导M BP-Nib的可溶性比例较高,约为30%,可满足M BP标签的亲和层析。通过与WYM V的其他蛋白和烟草丛顶病毒的RdRp进行比较,纯化的M BP-Nib融合蛋白可以特异性识别WYM V RNA1和RNA2的3'末端区域并体外合成其互补链,此体外转录体系可用于WYMV复制调控的研究。

关键词：小麦黄花叶病毒体外转录 Nib蛋白 RNA依赖的RNA聚合酶

小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及ACP-ELISA检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

江苏农业学报 2018年第1期34卷 34-40页

作者：任春梅杨柳缪倩程兆榜江苏省农业科学院植物保护研究所江苏南京210014

为建立简便、有效、低成本小麦黄花叶病毒(WYMV)的检测方法,用提纯的WYMV免疫BALB/c小鼠后,利用杂交瘤细胞技术经细胞融合、筛选和克隆,共获得2D4、2D3和6F4 3株能稳定传代并分泌抗WYMV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并分别注射小鼠腹腔制备... 详细信息

为建立简便、有效、低成本小麦黄花叶病毒(WYMV)的检测方法,用提纯的WYMV免疫BALB/c小鼠后,利用杂交瘤细胞技术经细胞融合、筛选和克隆,共获得2D4、2D3和6F4 3株能稳定传代并分泌抗WYMV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并分别注射小鼠腹腔制备其单抗腹水。3株单抗腹水的间接ELISA效价为10^(-6)~10^(-7),抗体类型及亚类均为IgG1、κ链。特异性检测结果表明6F4和2D4这2株单抗仅与WYMV的32 kD外壳蛋白有特异性免疫反应。利用效价最高的2D4单抗建立了检测WYMV的抗原包被ELISA方法(ACP-ELISA),其灵敏度分析结果表明,当病叶以1∶25 600(g/ml)倍稀释时仍能检测到病毒,特异性分析结果表明可有效区分小麦易感染的中国小麦花叶病毒(CWMV)。田间样品检测结果表明该方法可准确、可靠地用于小麦WYMV的大规模检测。

关键词：小麦黄花叶病毒单克隆抗体 ACP-ELISA

小麦黄花叶病毒P3蛋白致病功能域的鉴定和分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江农业学报 2019年第5期31卷 777-783页

作者：张岩亓玉华鲁燕华杨乾坤何雨娟李俊敏陈剑平福建农林大学植物保护学院福建福州350002 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业农村部/浙江省植保生物技术重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021 宁波大学植物病毒学研究所浙江宁波315211

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能... 详细信息

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能,在病毒复制、致病性、克服宿主抗性、细胞间移动等方面均具有重要作用,而P3在大麦黄花叶病毒属中是否有类似功能目前还未见报道。本研究利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的本氏烟基因沉默系统,明确了WYMV的P3碳端在本氏烟上具有致病功能域P3-C,但完整的P3则不具有致病能力。进一步移码突变研究表明,P3-C的致病性是由其编码的多肽引起的,而非病毒来源的小干扰RNA介导的宿主基因沉默。同时P3-C的两个跨膜结构域对致病性具有重要作用,单独表达任何一个跨膜结构域P3-C均不能在本氏烟上引起明显症状。

关键词：小麦黄花叶病毒 P3蛋白致病性

小麦黄花叶病毒外壳蛋白基因RNAi表达载体的构建及遗传转化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物保护 2013年第2期39卷 36-40页

作者：赵晓娟刘艳王锡锋中国农业科学院植物保护研究所、植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)是马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)的成员,是危害我国小麦生产的一种重要病毒病害。RNA干扰是由dsRNA介导的,通过核酸序列特异性的相互作用来抑制基因表达的一... 详细信息

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)是马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)的成员,是危害我国小麦生产的一种重要病毒病害。RNA干扰是由dsRNA介导的,通过核酸序列特异性的相互作用来抑制基因表达的一种基因沉默现象,这种调控机制在植物抗病毒基因工程育种中已得到广泛应用。以RNA干扰为原理、以病毒的外壳蛋白基因为靶标,构建了抗WYMV的植物表达载体。采用基因枪方法共转化‘扬麦12’的幼胚愈伤组织,得到了再生植株。对T0代进行PCR检测,得到15株阳性植株。

关键词：小麦黄花叶病毒 RNA干扰抗病毒基因工程

小麦黄花叶病毒P2蛋白原核表达、抗血清制备及其在感病小麦细胞中的定位

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江农业学报 2014年第3期26卷 742-747页

作者：杨狄周燕茹谢礼孙丽英陈剑平安徽农业大学生命科学学院安徽合肥230036 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021

通过RT-PCR获得小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)扬州分离物P2基因,并进行序列分析。P2基因编码区含有2 635个核苷酸,编码一个由875个氨基酸组成的分子量72 kDa的蛋白。在原核表达体系中,该基因的全长表达较困难,因此将P... 详细信息

通过RT-PCR获得小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)扬州分离物P2基因,并进行序列分析。P2基因编码区含有2 635个核苷酸,编码一个由875个氨基酸组成的分子量72 kDa的蛋白。在原核表达体系中,该基因的全长表达较困难,因此将P2基因的5'端和3'端各设计大约1 kb亚克隆到原核表达载体pMAL-C2X中构建重组表达载体MBP-P2N,MBP-P2C,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达MBP-P2N和MBP-P2C融合蛋白。MBP-P2C融合蛋白经大量诱导、纯化、制备相应抗血清。用制备的抗血清可以有效检测WYMV病叶中的P2蛋白。免疫胶体金标记实验表明在感病WYMV的小麦叶片细胞膜状内含体结构中发现有大量胶体金颗粒特异性分布,表明P2蛋白可能与膜状内含体结构有关。

关键词：小麦黄花叶病毒 P2基因原核表达抗血清制备免疫胶体金标记

小麦黄花叶病毒P1蛋白原核表达、抗血清制备及其检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江农业学报 2011年第2期23卷 324-328页

作者：向荣孙丽英孙炳剑陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321000 浙江省农业科学院病毒与生物技术研究所浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植物保护与生物技术重点实验室浙江省值物病毒重点实验室浙江杭州310021

用RT-PCR方法从感染小麦黄花叶病毒(Wheat yellowmosaic virus,WYMV)扬州分离物的小麦叶片中扩增获得该病毒P1基因的全长cDNA片段,并进行了序列分析。结果表明,P1基因编码区含有765个核苷酸,编码1个由255氨基酸组成分子量为28.2 kDa的... 详细信息

用RT-PCR方法从感染小麦黄花叶病毒(Wheat yellowmosaic virus,WYMV)扬州分离物的小麦叶片中扩增获得该病毒P1基因的全长cDNA片段,并进行了序列分析。结果表明,P1基因编码区含有765个核苷酸,编码1个由255氨基酸组成分子量为28.2 kDa的蛋白。将P1基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中构建重组原核表达载体pGEX 6P-1-P1,经IPTG诱导,P1蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-P1的融合蛋白,纯化并制备了P1蛋白的兔抗血清。利用此抗血清,可以检测WYMV病叶中的P1蛋白,但与提纯的WYMV粒子没有血清学反应,表明P1没有参与WYMV粒子的包装,是一种非结构蛋白。

关键词：小麦黄花叶病毒 P1基因克隆原核表达抗血清制备血清学检测

小麦黄花叶病毒编码VPg蛋白N端结构是VPg与核仁蛋白Fibrillarin互作区域

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江农业学报 2014年第1期26卷 89-94页

作者：边靓向荣孙丽英陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室浙江杭州310021

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员,其基因组是由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。其中,VPg(Viral protein genome-linked)作为病毒末端结合蛋白,与病毒基因组RNA 5’端共价... 详细信息

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员,其基因组是由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。其中,VPg(Viral protein genome-linked)作为病毒末端结合蛋白,与病毒基因组RNA 5’端共价连接。利用软件分析WYMV VPg蛋白氨基酸序列发现其N端具有核定位信号(NLS)序列,C端具有核输出信号(NES)序列。通过激光共聚焦显微镜观察VPg与GFP融合蛋白在烟草细胞中的表达情况发现,GFP-VPg主要定位于细胞核中。利用eYFP(n)标记核仁结构蛋白Fibrillarin与VPg进行双分子荧光互补实验发现,VPg与Fibrillarin互作且定位于细胞核中。根据VPg结构特点构建一系列缺失突变体与Fibrillarin的互作实验验证了它们之间的互作区域发生在N端NLS区域。

关键词：小麦黄花叶病毒 VPg蛋白细胞核定位 Fibrillarin蛋白蛋白质互作

小麦黄花叶病毒临沂分离物全基因组序列分析及小麦抗病品种筛选

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

小麦黄花叶病毒临沂分离物全基因组序列分析及小麦抗病品种筛选

作者：刘继新山东农业大学

学位级别：硕士

黄淮海地区是我国重要的小麦种植区。病毒病尤其土传花叶病是危害小麦最严重的病害之一。在黄淮海地区引起土传花叶病的病原为小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)和中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV),这... 详细信息

黄淮海地区是我国重要的小麦种植区。病毒病尤其土传花叶病是危害小麦最严重的病害之一。在黄淮海地区引起土传花叶病的病原为小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)和中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV),这两种病毒都通过禾谷多黏菌(Polymyxa graminis L.)传播。近年来,在山东临沂小麦产区,该病呈现上升趋势。为研究小麦黄花叶病毒的遗传多样性,本研究共获得2个WYMV分离物全基因组序列。序列分析发现:除去ploy(A),各分离物的RNA 1均为7635 nt,开放阅读框(ORF)为7215 nt,编码2404个氨基酸;RNA 2均为3651 nt,ORF为2712 nt,编码903个氨基酸。依据WYMV RNA 1和RNA 2编码序列进行系统进化分析发现WYMV可分为两个组,中国Ya′an和Zhouzhi分离物及Linshu、Yishui分离物的RNA 1归属于II组,中国Ya′an分离物及Linshu、Yishui分离物的RNA 2归属于II组,但中国Zhouzhi分离物归属于I组。这表明分离物Zhouzhi可能存在基因组重排。种植抗病品种是防治小麦黄花叶病最经济有效的方法,本实验选用了334个供试小麦品种在临沂临沭小麦黄花叶病田进行抗病性鉴定试验,结果表明有鲁22,济宁16等93个小麦品种在临沂地区表现出较高抗性,适宜在临沂地区推广种植。

关键词：小麦黄花叶病毒基因组全序列抗病品种