小麦黄花叶病毒Nib蛋白介导的体外转录体系的创建

作     者：耿国伟 于成明 李向东 原雪峰 GENG Guo-wei;YU Cheng-ming;LI Xiang-dong;YUAN Xue-feng

作者机构：山东农业大学植物保护学院植物病理学系山东省农业微生物重点实验室泰安271018 

出 版 物：《植物病理学报》 (Acta Phytopathologica Sinica)

年 卷 期：2019年第49卷第2期

页      面：212-218页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：国家自然科学基金(31670147 31370179) 泰山学者建设工程(ts201712023) 山东省"双一流"奖补资金资助(SYL2017XTTD11) 

主　　题：小麦黄花叶病毒 体外转录 Nib蛋白 RNA依赖的RNA聚合酶 

摘      要：本研究是利用异源表达的小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)复制酶Nib蛋白创建了病毒核酸的体外复制系统。将WYMV的Nib编码序列扩增并插入到大肠杆菌表达载体p MAL-C2X中以构建原核表达质粒p MAL-WYNib。0.4 mmol·L^(-1)IPTG诱导可特异性表达分子量约为100 k Da的M BP-Nib融合蛋白。根据温度梯度测定,20℃下诱导M BP-Nib的可溶性比例较高,约为30%,可满足M BP标签的亲和层析。通过与WYM V的其他蛋白和烟草丛顶病毒的RdRp进行比较,纯化的M BP-Nib融合蛋白可以特异性识别WYM V RNA1和RNA2的3 末端区域并体外合成其互补链,此体外转录体系可用于WYMV复制调控的研究。