检索结果-南通市图书馆

实时荧光pcr检测17-AAG对人RPE细胞Akt等基因表达的调控

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国际眼科杂志 2008年第9期8卷 1792-1794页

作者：许志洋姚家奇刘庆淮李建民南京医科大学细胞生物学系中国江苏省南京市210029 南京医科大学中心实验室中国江苏省南京市210029 南京医科大学第一附医院眼科中国江苏省南京市210029

目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时pcr方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提... 详细信息

目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时pcr方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据Akt,Raf,Hsp90,Hsp70的基因序列,设计Akt1,Raf1,Hsp90,Hsp70的引物,利用ABI 7300pcr仪和SYBR Green,建立实时荧光pcr反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了pcr反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调Akt及Raf基因的表达,上调Hsp90及Hsp70基因表达。结论:应用SYBR Green实时荧光pcr可以特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件。

关键词： SYBR Green 实时荧光pcr 17-AAG 视网膜色素上皮增生性玻璃体视网膜病变热休克蛋白90

实时荧光pcr在鉴别奶粉中掺入大豆成分的应用研究

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食品科学 2009年第12期30卷 190-193页

作者：岳巧云陈定虎伍朝晖周灼标邱德义中山出入境检验检疫局技术中心广东中山528403

首次利用实时荧光pcr方法,以大豆内源参照基因lectin为指标,对奶粉中掺入豆粉等植物成分进行定性、定量分析研究。结果表明,通过正己烷抽提奶粉中的油脂,苯酚抽提奶粉中的蛋白质等处理步骤后,应用植物基因组DNA提取试剂盒能够得到高质量... 详细信息

首次利用实时荧光pcr方法,以大豆内源参照基因lectin为指标,对奶粉中掺入豆粉等植物成分进行定性、定量分析研究。结果表明,通过正己烷抽提奶粉中的油脂,苯酚抽提奶粉中的蛋白质等处理步骤后,应用植物基因组DNA提取试剂盒能够得到高质量的DNA模板。实时荧光pcr反应结果表明,该方法判定奶粉中掺入植物成分的灵敏度大大提高;奶粉中掺入大豆粉或大豆制品的掺入量与实时荧光pcr扩增曲线及循环数呈良好的对应关系。实时荧光pcr法能够对奶粉中掺入的植物成分进行快速准确地定性、定量分析,可以作为市场监督和检验鉴定的可行性方法。

关键词：奶粉实时荧光pcr 植物蛋白成分 DNA提取纯化

人端粒酶催化亚单位mRNA的实时荧光RT-pcr定量检测

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第5期20卷 618-620页

作者：郭颖刘军薛采芳吴静宋天保西安交通大学第二医院妇产科陕西西安710001 第四军医大学病原生物学教研室陕西西安710032 西安交通大学医学院组胚学教研室陕西西安710061

目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录pcr方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光pcr定量hTERT的cDNA。同时定... 详细信息

目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录pcr方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光pcr定量hTERT的cDNA。同时定量测定人 β 肌动蛋白 (hBA)的mRNA作为内对照。用梯度稀释的克隆的人 β 肌动蛋白基因制作标准曲线。结果 :标准曲线的相关系数为 1.0 0。实时荧光反转录pcr方法的平均变异系数为 7.1%。HepG2细胞hTERTmRNA与hBAmRNA的比值为 (1.3± 0 .3)× 10 -4。结论 :建立了可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录pcr方法。

关键词： RNA 端粒酶催化亚单位实时荧光pcr 反转录pcr HepG2细胞定量测定 β-肌动蛋白 BA 稀释特异引物

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集成核酸提取的实时荧光pcr微全分析系统

分析化学 2014年第10期42卷 1393-1399页

作者：赵树弥朱灵朱灿灿李阳王华东张龙堵棣威邓国庆王安刘勇中国科学院安徽光学精密机械研究所安徽省生物医学光学仪器工程技术研究中心

集成核酸提取的实时荧光pcr微全分析系统将核酸提取、pcr扩增与实时荧光检测进行整合,在同一块微流控芯片上实现了核酸分析过程的全自动和全封闭,具有试剂用量少、分析速度快、操作简便等优点。本研究采用微机械加工技术制作集成核酸提... 详细信息

集成核酸提取的实时荧光pcr微全分析系统将核酸提取、pcr扩增与实时荧光检测进行整合,在同一块微流控芯片上实现了核酸分析过程的全自动和全封闭,具有试剂用量少、分析速度快、操作简便等优点。本研究采用微机械加工技术制作集成核酸提取微流控芯片的阳极模,使用组合模具法和注塑法制作具有3D通道的PDMS基片,与玻璃基底通过等离子体键合封装成集成核酸提取芯片。构建了由微流体速度可调节（0;0 mL/min）的驱动控制装置、温控精度可达0.1℃的TEC温控平台、CCD检测功能模块等组成的微全分析系统。以人类血液裂解液为样品,采用硅胶膜进行芯片上核酸提取。系统根据设置好的时序自动执行,以2 mL/min的流体驱动速度完成20μL裂解液上样、清洗;以1 mL/min的流体驱动速度完成DNA洗脱,抽取pcr试剂与之混合注入到反应腔。提取的基因组DNA以链上内参基因GAPDH为检测对象,并以传统手工提取为对照,在该系统平台上进行pcr扩增和熔解曲线分析实验。片上pcr扩增结果显示,扩增曲线明显,Ct值分别为25.3和26.9。扩增产物进行熔解曲线分析得到的熔解温度一致,均为89.9℃。结果表明,此系统能够自动化、全封闭的在微流控芯片上完成核酸提取、pcr扩增与实时定量分析。

关键词：核酸提取微全分析系统实时荧光pcr 微流控芯片

运用TaqMan探针实时荧光pcr技术检测AKAP10基因2073A/G单核苷酸多态性

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四川大学学报（医学版） 2009年第2期40卷 275-278页

作者：王默进周总光王玲李园张鹏张益崔长富周斌四川大学华西医院消化外科研究室成都610041

目的建立一套以TaqMan探针实时荧光pcr技术为基础的单核苷酸多态性（SNP）检测平台，并用于AKAPIO基因2073A／GSNP的检测。方法设计一对TaqMan探针加入到pcr反应系统中，并设立阴阳对照，对AKAPIO基因2073A／GSNP进行分型。同时验证部... 详细信息

目的建立一套以TaqMan探针实时荧光pcr技术为基础的单核苷酸多态性（SNP）检测平台，并用于AKAPIO基因2073A／GSNP的检测。方法设计一对TaqMan探针加入到pcr反应系统中，并设立阴阳对照，对AKAPIO基因2073A／GSNP进行分型。同时验证部分样本pcr产物的直接测序结果。结果运用TaqMan探针实时荧光pcr技术对AKAPIO基因2073A／GSNP检测结果准确，与pcr产物的直接测序结果完全一致。AKAPIO基因2073A／G多态性分布与性别年龄无关（P〉0．05）。非条件logistic回归分析提示，AKAP10基因2073A／G突变型（AG＋GG）与野生型AA相比增加结直肠癌的发生风险（OR=1．52，95％CI：1．07～2．15。P=0．019）。结论通过合理设计TaqMan探针，设立阴阳性对照，应用TaqMan探针实时荧光pcr技术成功建立起一套SNP检测平台。AKAP10基因2073A／G多态性与结直肠癌发病存在显著相关性。

关键词： TaqMan探针实时荧光pcr 单核苷酸多态性

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实时荧光pcr方法检测转基因豆粕的研究

食品与发酵工业 2008年第9期34卷 143-145页

作者：白卫滨孙建霞罗云波姜桂传黄亚东中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083 山东省农业管理干部学院山东济南250100 暨南大学生物医药开发中心广东广州510630

以美国、阿根廷和转基因大豆标准品为材料,利用设计的特异性引物和探针,建立了实时荧光定量pcr技术检测抗草甘膦转基因豆粕的方法,成功检测出美国和阿根廷抗草甘膦转基因豆粕的内源参照基因lectin、CaMV35S/CTP of EPSPS边界序列和NOS... 详细信息

以美国、阿根廷和转基因大豆标准品为材料,利用设计的特异性引物和探针,建立了实时荧光定量pcr技术检测抗草甘膦转基因豆粕的方法,成功检测出美国和阿根廷抗草甘膦转基因豆粕的内源参照基因lectin、CaMV35S/CTP of EPSPS边界序列和NOS终止子,确定了实时荧光pcr方法检测抗草甘膦转基因豆粕的灵敏度为0.1%。

关键词：转基因豆粕实时荧光pcr 检测

进出境大中动物中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法的研究

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现代畜牧科技 2024年第6期 1-4页

作者：彭菲马玲杨东来张鹏刘振伟刘贺陈超刘丹丹满洲里海关技术中心内蒙古满洲里021400 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

为快速检测进出境大中动物中的单核细胞增生李斯特氏菌,将细菌学方法和实时荧光pcr检测方法相结,利用叠氮溴化丙锭(PMA)抑制死菌核酸扩增的特性,对样品进行前处理,构建一套针对进出境大中动物中具有传染性的单核细胞增生李斯特氏菌PMA-q... 详细信息

为快速检测进出境大中动物中的单核细胞增生李斯特氏菌,将细菌学方法和实时荧光pcr检测方法相结,利用叠氮溴化丙锭(PMA)抑制死菌核酸扩增的特性,对样品进行前处理,构建一套针对进出境大中动物中具有传染性的单核细胞增生李斯特氏菌PMA-qpcr实时荧光快速检测方法。

关键词：进出境动物检疫单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光pcr

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实时荧光pcr检测食品中掺假萝卜成分

食品研究与开发 2013年第22期34卷 58-60,101页

作者：刘彩霞高宏伟孙敏龚方梁成珠徐彪山东出入境检验检疫局山东青岛266002

简单、可靠的食品成分检测方法是食品监管部门进行真伪鉴定的有力依据。萝卜清脆爽口,是食品加工品中常添加的蔬菜。本研究通过对萝卜基因信息的检索分析,筛选出扩增萝卜物种特异性基因orf B基因的引物探针并建立检测萝卜的实时荧光pcr... 详细信息

简单、可靠的食品成分检测方法是食品监管部门进行真伪鉴定的有力依据。萝卜清脆爽口,是食品加工品中常添加的蔬菜。本研究通过对萝卜基因信息的检索分析,筛选出扩增萝卜物种特异性基因orf B基因的引物探针并建立检测萝卜的实时荧光pcr方法。利用该方法对常见4大品种的萝卜DNA进行荧光pcr扩增,均能扩增85 bp的片段;对颜色、口感相近的的9种常见物种没有扩增,实验灵敏度达到0.01%。本方法可以用于萝卜源成分鉴定,确定食品中是否有使用萝卜进行掺假,为识别掺假提供有效手段。

关键词：萝卜掺假实时荧光pcr orf B基因

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实时荧光pcr法检测明胶的牛、猪源性成分

中国食品添加剂 2021年第7期32卷 102-107页

作者：王云霞井丽娟李翠枝吕志勇刘丽君内蒙古伊利实业集团股份有限公司呼和浩特010110

为了快速准确鉴别明胶的动物源性,根据线粒体DNA基因COX I(cytochrome coxidase subunit I)的种间多态性差异合成特异性引物及探针,通过实时荧光pcr技术扩增与识别特异性基因片段。运用明胶牛、猪源性成分的荧光pcr检测方法并进行特异... 详细信息

为了快速准确鉴别明胶的动物源性,根据线粒体DNA基因COX I(cytochrome coxidase subunit I)的种间多态性差异合成特异性引物及探针,通过实时荧光pcr技术扩增与识别特异性基因片段。运用明胶牛、猪源性成分的荧光pcr检测方法并进行特异性、检出限、重复性实验。结果显示:该方法能够快速准确检测明胶的动物源性,特异性强、灵敏度高、重复性好,对掺杂的牛源性或猪源性成分的检出限均为0.1%,克服了明胶黏度高、不易溶解,多重加工工艺对检测结果干扰严重的难点。实时荧光pcr法为检测明胶的动物源性成分提供了有效手段,保障食品添加剂的质量与安全。

关键词：明胶食品添加剂动物源性成分实时荧光pcr