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孕妇外周血胎儿细胞成分与子痫前期发病关系的研究进展

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中国妇幼保健 2006年第22期21卷 3186-3188页

作者：黎燕苏放明林莉暨南大学第二临床学院妇产科深圳市518020

子痫前期是导致孕妇和围产儿发病率及死亡率升高主要原因,病因至今未明,随着现代生殖免疫学发展,人们发现子痫前期是一种母胎不相容疾病.胚胎是由继承了父系及母系双重组织特异性受精卵发育而来,所以它对母体来说具有'自己'和'异己'的... 详细信息

子痫前期是导致孕妇和围产儿发病率及死亡率升高主要原因,病因至今未明,随着现代生殖免疫学发展,人们发现子痫前期是一种母胎不相容疾病.胚胎是由继承了父系及母系双重组织特异性受精卵发育而来,所以它对母体来说具有'自己'和'异己'的组织抗原特性,而且正常的胎盘并非是十分完善的细胞透不过的屏障,在人类的妊娠中,胎儿血液可能进入母体血液循环中,理论上母体对携带有父系抗原的胎儿细胞会产生免疫反应,但是正常妊娠期间并没有发生母胎排斥现象,说明母胎之间存在复杂而完整的免疫体系,一旦这种平衡被打破则导致病理妊娠,如习惯性流产、子痫前期等.因此,研究孕妇外周血胎儿细胞成分与子痫前期关系,有助于阐明子痫前期发病的机制,本文就国内外研究现状进行综述.

关键词：孕妇外周血子痫前期细胞成分胎儿血液发病关系生殖免疫学组织特异性抗原特性

孕妇外周血滋养层细胞分离纯化用于产前诊断的研究

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孕妇外周血滋养层细胞分离纯化用于产前诊断的研究

作者：马蓉大理大学

学位级别：硕士

研究背景及意义:随着国家“二胎”政策的逐步实行,高龄产妇逐渐增多,加之环境、生活方式、遗传因素等作用,有“问题”的胎儿将出现大幅增长。出生缺陷致残率、发病率、死亡率较高,我国出生缺陷高达5.6%。美国调查显示,每33个婴儿就有一... 详细信息

研究背景及意义:随着国家“二胎”政策的逐步实行,高龄产妇逐渐增多,加之环境、生活方式、遗传因素等作用,有“问题”的胎儿将出现大幅增长。出生缺陷致残率、发病率、死亡率较高,我国出生缺陷高达5.6%。美国调查显示,每33个婴儿就有一个出生缺陷患儿2013年度出生缺陷相关的治疗费用高达229亿美元,造成严重的经济和社会负担。遗传性疾病是引起出生缺陷的主要原因。目前,对遗传性疾病的产前诊断,根据诊断方法是否对胎儿构成不良影响,可分为侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。侵入性产前诊断对胎儿有一定的危害,且有导致孕妇发生流产的可能。而利用孕妇外周血进行产前诊断,则属于非侵入性的,目前用于包括非整倍体病（比如21-三体综合征,18-三体综合征,13-三体综合征,以及染色体异常等）和单基因遗传病等的诊断。当前临床上已经推广使用的无创产前诊断技术（Non-invasive Prenatal Testing,NIPT）或NIPT-plus是基于孕妇外周血中存在胎儿游离DNA（cell-free fetal DNA,cff DNA）,分析存在于孕妇外周血中的cff DNA以反映胎儿的13,18和21号染色体的情况,主要用于唐氏综合征的筛查,其缺点是由于该技术依赖于测定到的染色体数值进行换算,会产生一定的误差,另外孕妇外周血中出现cff DNA的时间偏晚,并且含量存在较大差异,另外不能够完全排除母体DNA的干扰。大量研究表明,孕妇外周血滋养层细胞完全来源于胎儿,有报道在孕妇怀孕6周（受精龄）,甚至更早的母体血液中就有滋养层细胞的存在,而滋养层细胞的遗传物质与胎儿的遗传物质完全一致,因此从孕妇外周血中分离滋养层细胞用于染色体病和单基因遗传病的诊断成为可能。然而利用外周血滋养层细胞的产前诊断技术尚未得到开发,本实验拟从孕妇外周血中分离滋养层细胞并测序分析,并且把该分析结果与常规的无创产前诊断结果进行比较,以望开发诊断准确率更高,检测时间更短的染色体病和单基因遗传病的诊断技术,为全国新生儿畸形筛查提供有力的技术支持,以望减少缺陷儿的出生,为人类健康提供保障。研究目的:研究孕妇外周血滋养层细胞分离纯化技术用于产前诊断技术的开发研究方法:在知情同意的基础上,选取2017年9月-2019年1月在大理大学第一附属医院妇产科门诊就诊的孕5-7周的孕妇外周血5ml于EDTA抗凝管中,用Chemrus?disposable filter funnel过滤去除孕妇血液细胞成分,分离得到的细胞涂片于微切片上保存备用。依据同一个孕妇在孕12-22周进行NIPT检测及常规孕期检查,NIPT检测有问题的用羊水穿刺确诊。如果两种筛查中任意一种明确胎儿有“问题”,调取来源于同一孕妇早孕期获得的细胞制作的微切片,在显微切割仪下取胎儿来源的滋养层细胞进行单细胞测序并分析。同时进行单细胞测序的患者在胎儿出生时取脐静脉血进行全基因组检测。结果:（1）滋养层细胞分离纯化:14例样本在5-7周进行滋养层细胞分离纯化,细胞进行鉴定,滋养层细胞计数0-1个/HP,每5ml血液共8-10枚滋养层细胞。（2）常规无创产前检测结果:1、2、3、4、5、6、8号病例NIPT检测提示低风险,除了2号病例B超检查正常,出生后皮肤异常,其余病例B型彩色多普勒超声提示胎儿发育异常/畸形,9号病例NIPT检测提示胎儿1号染色体存在chr1:200400000-207150000（1q32.1-q32.1,6.8M）大小6.8M的微重复,B型彩色多普勒超声提示未见异常,7号病例血清学筛查提示,唐氏综合症临界风险,NIPT检测提示胎儿21号染色体异常高风险,外院彩超提示胎儿畸形,但我院彩超未提示畸形。正常对照病例血清学筛查,NIPT检测均提示低风险,彩超检查未见异常。（3）传统侵入性检查结果:9例表现异常的患者中,除了7号、9号病例进行羊水穿刺,其余7位患者拒绝行羊水穿刺检查。（4）测序结果:共有效收集有“异常”表现的胚胎9例,另外收集NIPT和彩超均正常的5例作为对照,结果提示在9例表现异常的患者中,均检测到染色体水平的变异,并且与脐静脉血的检测结果一致。说明孕妇外周血来源的滋养层细胞可以早期检测由于遗传原因导致的胚胎发育异常。结论:滋养层细胞的测序和全基因组测序对胎儿遗传变异的检出率或检出范围均高于NIPT或NIPT-plus检测;滋养层细胞的测序和全基因组测序检出率或者检出范围基本一致。但是由于该研究的样本量小,随访时间短,因此还需要后续研究进一步检测其可靠性和准确性。

关键词：孕妇外周血滋养层细胞产前诊断

孕妇外周血胎儿细胞中巨细胞病毒基因的检测及意义

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中华检验医学杂志 2004年第12期27卷 823-826页

作者：陈汉平王陶然徐晓燕张铭相文佩蒋荣珍马庭元华中科技大学附属同济医院妇产科武汉430030

目的　利用孕妇外周血中胎儿细胞进行无创性产前诊断巨细胞病毒宫内感染的新方法。方法　 (1)采用显微操作技术从 2 73例孕妇外血中分离单个胎儿有核红细胞。 (2 )应用多重引物原位合成技术 (primedinsitulabeling ,PRINS)检测 76例孕... 详细信息

目的　利用孕妇外周血中胎儿细胞进行无创性产前诊断巨细胞病毒宫内感染的新方法。方法　 (1)采用显微操作技术从 2 73例孕妇外血中分离单个胎儿有核红细胞。 (2 )应用多重引物原位合成技术 (primedinsitulabeling ,PRINS)检测 76例孕妇外周血HCMV DNA阳性标本的单个胎儿细胞的SRY基因和HCMV DNA基因。 (3)应用引物延伸预扩增法 (primedextensionpreamplification ,PEP)及聚合酶链反应 (PCR)检测 2 73例孕妇外周血中单个胎儿细胞的SRY基因和HCMV DNA基因。结果　 (1)应用显微操作技术分选胎儿细胞的分选率为 10 0 %。 (2 )PRINS技术检测SRY基因的敏感性为 97 5 6 % (40 / 4 1) ,特异性为 10 0 % (35 / 35 )。检测HCMV DNA基因的敏感性为 92 6 8% (38/ 4 1) ,特异性为 10 0 % (35 / 35 )。 (3)PEP及PCR方法检测SRY基因的敏感性为97 39% (14 9/ 15 3) ,特异性为 99 17% (119/ 12 0 ) ,检测HCMV DNA基因的敏感性为 95 12 % (39/4 1) ,特异性为 10 0 % (2 32 / 2 32 )。结论　应用PRINS技术、PEP方法及PCR技术对孕妇外周血中单个胎儿细胞进行非创伤性产前诊断巨细胞病毒宫内感染是一种敏感性高特异性强的新方法 ,可能具有广阔的临床应用前景。

关键词：胎儿细胞孕妇外周血 HCMV-DNA 巨细胞病毒特异性 SRY基因敏感性 PEP 技术结论

未足月胎膜早破孕妇外周血、新生儿脐血和胎膜组织中ox-AAT、NE的表达及其与组织学绒毛膜羊膜炎的关系

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中华妇产科杂志 2014年第4期49卷 290-292页

作者：陶贝贝赵岚岚张林东程国梅崔世红郑州大学第三附属医院产科 450052

未足月胎膜早破（ pPROM ）是产科常见的妊娠期并发症。 pPROM与感染互为因果，且多表现为亚临床感染，即组织学绒毛膜羊膜炎（HCA）［1］。 pPROM合并HCA可导致孕妇发生胎盘早剥、产后出血、产褥感染、败血症等围产期并发症，且新生儿... 详细信息

未足月胎膜早破（ pPROM ）是产科常见的妊娠期并发症。 pPROM与感染互为因果，且多表现为亚临床感染，即组织学绒毛膜羊膜炎（HCA）［1］。 pPROM合并HCA可导致孕妇发生胎盘早剥、产后出血、产褥感染、败血症等围产期并发症，且新生儿发生感染性疾病，如新生儿肺炎、脑白质损伤的概率增加。因此，提早预测HCA的发生具有重要意义。氧化型α1-抗胰蛋白酶（ ox-AAT ）和中性粒细胞弹性蛋白酶（ NE）与pPROM的发生有关，同时在炎症瀑布反应中起调节作用。因此，本研究通过检测pPROM患者外周血、新生儿脐血及胎膜组织中 ox-AAT 和 NE 的表达水平，探讨其在pPROM合并HCA发生中的作用。

关键词：未足月胎膜早破绒毛膜羊膜炎孕妇外周血新生儿脐血胎膜组织组织学 NE 中性粒细胞弹性蛋白酶

XE-2100血细胞分析仪检测慢性胎儿窘迫孕妇外周血NRBCs的应用

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实用妇产科杂志 2008年第1期24卷 57-59页

作者：李先平彭玲王敏中南大学湘雅二医院湖南长沙410011

慢性胎儿窘迫（chronic fetal distress）是产科严重的并发症，常发生在妊娠晚期，是指胎儿在子宫内因缺氧和酸中毒危及其健康和生命的综合症状，发病率为2．70％．3．85％。慢性胎儿窘迫病因复杂，起病隐匿，目前临床上缺乏单一、可靠... 详细信息

慢性胎儿窘迫（chronic fetal distress）是产科严重的并发症，常发生在妊娠晚期，是指胎儿在子宫内因缺氧和酸中毒危及其健康和生命的综合症状，发病率为2．70％．3．85％。慢性胎儿窘迫病因复杂，起病隐匿，目前临床上缺乏单一、可靠、有效的检测指标来预测和诊断慢性胎儿窘迫的发生。1996年，Korst等已提出有核红细胞可作为胎儿缺氧的指标。因此，本研究采用SYSMEX XE-2100对孕妇外周血进行有核红细胞（NRBCs）计数，并与显微镜目测法结果相比较，分析慢性胎儿窘迫组孕妇与正常妊娠组孕妇外周血中NRBCs的变化趋势，探讨XE-2100检测孕妇外周血NRBCs诊断慢性胎儿窘迫的可行性。结果报告如下.

关键词：慢性胎儿窘迫 XE-2100血细胞分析仪孕妇外周血 NRBCs 检测指标有核红细胞 SYSMEX 显微镜目测法

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不同孕次孕妇外周血胎儿遗传信息检测

江苏医药 2006年第3期32卷 261-262页

作者：蒋小青李海玲吴艳宋萍东南大学附属中大医院妇产科南京210009

目的从不同孕次孕妇外周血中分离出胎儿DNA并加以鉴定，探讨孕妇不同孕次对外周血中胎儿遗传物质检测的结果影响。方法不同孕次孕妇共30例，于孕36-40周时按以往有无孕产史分成两组，以往有早孕史的孕妇12例为研究组；初次妊娠孕妇18例... 详细信息

目的从不同孕次孕妇外周血中分离出胎儿DNA并加以鉴定，探讨孕妇不同孕次对外周血中胎儿遗传物质检测的结果影响。方法不同孕次孕妇共30例，于孕36-40周时按以往有无孕产史分成两组，以往有早孕史的孕妇12例为研究组；初次妊娠孕妇18例为对照组，抽取孕妇外周血并分离出胎儿DNA，用套式PCR检测其中的SRY基因并与新生儿出生性别作结果对照。结果应用套式PCR能够从母体外周血中检测到胎儿SRY基因，且两组特异性、敏感性比较无显著性差异。结论以往有早孕史的孕妇外周血SRY基因的检测结果与初次妊娠孕妇比较无显著性差异。

关键词：套式聚合酶链反应孕妇外周血胎儿遗传信息

孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的建立

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中国实验血液学杂志 2009年第5期17卷 1363-1367页

作者：于洋冯倩林子林潘纪春张婷马春娅张晓娟葛国峰陈鑫关晓珍任乐孙丹付丽辉骆群汪德清解放军总医院输血科解放军临床输血中心北京100853

本研究目的是建立孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术,用于ABO血型不合引起的新生儿溶血病的产前诊断。根据ABO血型基因DNA全序列和mRNA序列设计4对引物,选择20例健康供者血浆,提取血浆中DNA进行扩增,探索最佳的血浆DNA提取及PCR扩增条... 详细信息

本研究目的是建立孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术,用于ABO血型不合引起的新生儿溶血病的产前诊断。根据ABO血型基因DNA全序列和mRNA序列设计4对引物,选择20例健康供者血浆,提取血浆中DNA进行扩增,探索最佳的血浆DNA提取及PCR扩增条件,初步建立单人ABO血型基因分型技术。将O型血浆DNA与A型或B型血浆DNA按1:1、2:1、4:1、8:1、10:1、20:1、40:1、100:1进行混合,模拟孕妇外周血胎儿与孕妇自身ABO基因混合状态,建立混合ABO血型基因分型技术。选取14例孕30周以上的孕妇外周血标本,进行胎儿ABO血型基因型鉴定,并对孕妇进行追踪,尽量获取胎儿出生以后的外周血标本进行ABO血型鉴定,以评价孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的灵敏度与准确性。结果表明:单人血浆进行准确血型鉴定的最少模板DNA量约为0.625ng,500μl血浆提取的DNA量即可达到PCR扩增要求;当混合血浆中O型DNA所占比例≤10时,可以准确检测出非O基因的存在;14名O型孕妇外周血标本中9例标本扩增出非O型基因,5例未扩增出非O基因;通过血清学方法对5例胎儿出生后外周血进行ABO血型鉴定,其中A型3例,B型1例,O型1例,与其基因分型结果一致,符合率100%。结论:本研究建立的孕妇外周血胎儿ABO血型基因提取、分型技术,可以对妊娠中晚期胎儿ABO血型基因型进行准确鉴定,从而为新生儿溶血病的产前诊断与预防提供指导意见。

关键词：胎儿ABO血型基因分型方法孕妇外周血新生儿溶血病

孕妇外周血胎儿细胞的分析及在产前诊断中的应用

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国外医学（妇幼保健分册） 2000年第1期11卷 16-19页

作者：曹云霞庄广伦李旭安徽医科大学第一附属医院妇产科 230022 中山医科大学第一附属医院妇产科 510080 西安医科大学第一临床医学院 710061

孕妇外周血中存在胎儿细胞共四种 :滋养叶细胞、有核红细胞、粒细胞和淋巴细胞。胎儿有核红细胞最适合富集、纯化及用于产前诊断。利用有核红细胞特异性抗原标记CD71、CD36、及抗GPA、抗γ珠蛋白阳性选择及白细胞抗原CD45阴性选择分离... 详细信息

孕妇外周血中存在胎儿细胞共四种 :滋养叶细胞、有核红细胞、粒细胞和淋巴细胞。胎儿有核红细胞最适合富集、纯化及用于产前诊断。利用有核红细胞特异性抗原标记CD71、CD36、及抗GPA、抗γ珠蛋白阳性选择及白细胞抗原CD45阴性选择分离胎儿有核红细胞 ,用FISH及PCR技术进行遗传学分析 ,已能在产前诊断出胎儿性别。

关键词：孕妇外周血胎儿红细胞产前诊断

孕妇外周血胎儿游离DNA在产前筛查胎儿染色体非整倍体疾病中的价值

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中华实用诊断与治疗杂志 2017年第9期31卷 859-861页

作者：时伟丽张卉吴东侯巧芳娄桂予张玉薇楚艳廖世秀郑州大学人民医院河南省人民医院河南省医学遗传研究所郑州450003

目的探讨孕妇外周血胎儿游离DNA在产前筛查胎儿染色体非整倍体疾病中的临床应用价值。方法接受产前诊断孕12~26周孕妇4 300例,采集外周血提取胎儿游离DNA,应用高通量测序技术检测风险值,对检测结果提示高风险者进一步行羊水穿刺胎儿染... 详细信息

目的探讨孕妇外周血胎儿游离DNA在产前筛查胎儿染色体非整倍体疾病中的临床应用价值。方法接受产前诊断孕12~26周孕妇4 300例,采集外周血提取胎儿游离DNA,应用高通量测序技术检测风险值,对检测结果提示高风险者进一步行羊水穿刺胎儿染色体核型分析及基因芯片检测,对检测结果提示低风险者电话随访至分娩。结果胎儿游离DNA高通量测序检测提示高风险者45例,其中21-三体综合征29例,18-三体综合征11例,13-三体综合征5例;1例13-三体综合征羊水穿刺胎儿染色体核型分析未见异常,基因芯片检测发现孕妇13号染色体存在微重复,余44例高风险妊娠均经羊水穿刺胎儿染色体核型分析证实;胎儿游离DNA高通量测序提示低风险4 255例,其中3 008例完成随访,新生儿未见明显异常。结论孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查可高效、准确筛查胎儿染色体非整倍体疾病,且较介入性产前诊断易接受,具有较好的临床应用价值。

关键词：染色体非整倍体疾病胎儿游离DNA 孕妇外周血产前检测高通量测序技术