孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的建立

作     者：于洋 冯倩 林子林 潘纪春 张婷 马春娅 张晓娟 葛国峰 陈鑫 关晓珍 任乐 孙丹 付丽辉 骆群 汪德清 YU Yang;FEN Qian;LIN Zi-Lin;PAN Ji-Chun;ZHANG Ting;MA Chun-Ya;ZHANG Xiao-Juan;GE Guo-Feng;CHEN Xin;GUAN Xiao-Zhen;REN Le;SUN Dan;FU Li-Hui;LUO Qun;WANG De-Qing

作者机构：解放军总医院输血科解放军临床输血中心北京100853 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2009年第17卷第5期

页      面：1363-1367页

学科分类：1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 100215[医学-康复医学与理疗学] 10[医学] 

基　　金：解放军总医院苗圃基金资助项目 编号07MP65 

主　　题：胎儿ABO血型 基因分型方法 孕妇外周血 新生儿溶血病 

摘      要：本研究目的是建立孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术,用于ABO血型不合引起的新生儿溶血病的产前诊断。根据ABO血型基因DNA全序列和mRNA序列设计4对引物,选择20例健康供者血浆,提取血浆中DNA进行扩增,探索最佳的血浆DNA提取及PCR扩增条件,初步建立单人ABO血型基因分型技术。将O型血浆DNA与A型或B型血浆DNA按1:1、2:1、4:1、8:1、10:1、20:1、40:1、100:1进行混合,模拟孕妇外周血胎儿与孕妇自身ABO基因混合状态,建立混合ABO血型基因分型技术。选取14例孕30周以上的孕妇外周血标本,进行胎儿ABO血型基因型鉴定,并对孕妇进行追踪,尽量获取胎儿出生以后的外周血标本进行ABO血型鉴定,以评价孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的灵敏度与准确性。结果表明:单人血浆进行准确血型鉴定的最少模板DNA量约为0.625ng,500μl血浆提取的DNA量即可达到PCR扩增要求;当混合血浆中O型DNA所占比例≤10时,可以准确检测出非O基因的存在;14名O型孕妇外周血标本中9例标本扩增出非O型基因,5例未扩增出非O基因;通过血清学方法对5例胎儿出生后外周血进行ABO血型鉴定,其中A型3例,B型1例,O型1例,与其基因分型结果一致,符合率100%。结论:本研究建立的孕妇外周血胎儿ABO血型基因提取、分型技术,可以对妊娠中晚期胎儿ABO血型基因型进行准确鉴定,从而为新生儿溶血病的产前诊断与预防提供指导意见。