检索结果-南通市图书馆

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

孔蛋白基因突变对沙门氏菌毒力的影响分析

孔蛋白基因突变对沙门氏菌毒力的影响分析

作者：令狐远凤贵州大学

学位级别：硕士

沙门氏菌（Salmonella）是一种革兰氏阴性细菌,可引起广泛的胃肠道和全身性疾病。孔蛋白是亲水性溶质、营养物质和有毒化合物通过细菌外膜被动扩散的通道,具备毒素流入或流出外膜的能力。为了探究孔蛋白基因突变对沙门氏菌毒力产生的影... 详细信息

沙门氏菌（Salmonella）是一种革兰氏阴性细菌,可引起广泛的胃肠道和全身性疾病。孔蛋白是亲水性溶质、营养物质和有毒化合物通过细菌外膜被动扩散的通道,具备毒素流入或流出外膜的能力。为了探究孔蛋白基因突变对沙门氏菌毒力产生的影响,本研究以鼠伤寒沙门氏菌为研究对象,利用λ-Red同源重组系统构建相关突变株,通过PCR检测鼠伤寒沙门氏菌标准菌株和突变株在体外和体内多次连续传代的遗传稳定性、绘制生长曲线测定其生长情况、利用生化管检测其生化特性、采用96孔板法的生物膜形成实验观测其生物被膜形成能力、通过泳动性试验观察其运动能力的强弱和细菌耐药性试验测定对多种抗生素的敏感程度、通过细菌计数调整标准菌株和突变株的浓度后对小鼠进行攻毒,利用小鼠致病性实验和半数致死量LD试验观察其毒力强弱,通过肝脏载菌量和脾脏载菌量试验检测细菌在小鼠肝脏和脾脏上的分布情况。结果显示:已成功构建突变株STM LT2△omp D、STM LT2△omp W、STM LT2△omp S;标准菌株和突变株在体外和体内连续传代多次仍然能够稳定遗传;相较于STM LT2,突变株STM LT2△omp D和STM LT2△omp W生长速度无明显变化,而突变株STM LT2△omp S生长速度明显减慢;泳动性试验观察发现各突变株运动能力均减弱,其中突变株STM LT2△omp S减弱最为明显;96孔板法的生物膜形成实验结果发现突变株STM LT2△omp W、STM LT2△omp D的生物被膜形成能力强,而突变株STM LT2△omp S的生物被膜形成能力弱。在动物致病性实验检测标准菌株和各突变株致病力时发现小鼠肠道产生明显病变,肠腔充盈并轻度出血;半数致死量LD试验结果发现,突变株相比鼠伤寒沙门氏菌标准菌株毒力整体减弱,其中突变株STM LT2△omp S毒力减弱最为明显;肝脏载菌量和脾脏载菌量试验结果发现突变株在小鼠肝脏和脾脏的细菌量分布整体小于标准菌株。结果表明,孔蛋白omp S、omp W、omp D基因缺失对鼠伤寒沙门氏菌的生长速度、运动能力、生物被膜形成能力、耐药性均产生不同程度的影响,其中omp S基因对其运动能力和生长速度减弱最为明显,omp S、omp W、omp D基因是生物被膜形成的核心调控元件,其生化特性无明显区别。孔蛋白omp S、omp W、omp D基因缺失可不同程度的减弱鼠伤寒沙门氏菌的致病性及毒力。本试验有助于研究人员有效地设计和优化新型抗感染药物各种机制的有益特性,为探讨鼠伤寒沙门氏菌致病作用的分子机制提供参考。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌 λ-Red同源重组系统孔蛋白

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

孔蛋白-磷脂仿生膜的葡萄糖氧化酶电化学

电化学 2014年第5期20卷 439-443页

作者：王琨琦张作明邢巍刘长鹏周星中国科学院长春应用化学研究所先进能源实验室吉林长春130022 长春工程学院理学院吉林长春130012 吉林大学分子酶学教育部重点实验室吉林长春130012

采用孔蛋白(MspA)和双肉豆蔻磷脂酰胆碱(DMPC)在玻碳(GC)基底表面成功构建有仿生特性的纳米通道膜,同时将葡萄糖氧化酶(GOD)修饰于膜上.使用循环伏安法研究GOD/MspA-DMPC/GC电极的GOD直接电化学过程以及其对氧气和葡萄糖的响应.研究发现... 详细信息

采用孔蛋白(MspA)和双肉豆蔻磷脂酰胆碱(DMPC)在玻碳(GC)基底表面成功构建有仿生特性的纳米通道膜,同时将葡萄糖氧化酶(GOD)修饰于膜上.使用循环伏安法研究GOD/MspA-DMPC/GC电极的GOD直接电化学过程以及其对氧气和葡萄糖的响应.研究发现,MspA与DMPC形成的仿生纳米通道膜内,GOD在接近生物体系FAD/FADH2标准电位处实现了自身两质子、两电子表面控制的电化学反应.MspA与DMPC的仿生纳米通道膜体系为GOD提供了理想活性环境.

关键词：孔蛋白仿生膜葡萄糖氧化酶电化学双肉豆蔻磷脂酰胆碱

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

多重耐药淋病流行株孔蛋白和泵蛋白的表达

中国抗生素杂志 2005年第4期30卷 244-246,i001页

作者：李国明陈群刘仿陈军剑樊翌明广东医学院湛江524023 广东医学院附属医院湛江524001

为探讨外排系统、外膜通透性与淋病流行株多重耐药性的关系,应用KB法和琼脂稀释法从湛江地区分离出62株淋球菌多重耐药株;利用SDS-PAGE法测定淋球菌外膜孔蛋白的表达;采用直接荧光法测定能量抑制剂NaN3加入前后淋球菌对抗生素的摄入和... 详细信息

为探讨外排系统、外膜通透性与淋病流行株多重耐药性的关系,应用KB法和琼脂稀释法从湛江地区分离出62株淋球菌多重耐药株;利用SDS-PAGE法测定淋球菌外膜孔蛋白的表达;采用直接荧光法测定能量抑制剂NaN3加入前后淋球菌对抗生素的摄入和积累情况,比较耐药菌与敏感菌内膜泵蛋白表达的差异。结果显示,5株多重耐药菌均有外膜孔蛋白表达的缺失或下降,同时伴有外排泵蛋白的表达。提示外排系统、外膜通透性与淋病流行株的多重耐药性密切相关。

关键词：淋病奈瑟菌多重耐药泵蛋白外排系统孔蛋白

革兰阴性菌孔蛋白结构、功能和应用的研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2020年第2期42卷 200-206页

作者：汪德会李攀李能章彭远义西南大学动物科技学院重庆400715

革兰阴性菌(Gram-negative bacteria)的外膜是一种由蛋白质、脂多糖、磷脂等多种物质组成的复合结构,约占细胞壁干重的80%,是革兰阴性菌抵抗外来有毒化合物的第一道防线。孔蛋白(Porins)是外膜蛋白(OMPs)家族中的一类典型膜通道蛋白,197... 详细信息

革兰阴性菌(Gram-negative bacteria)的外膜是一种由蛋白质、脂多糖、磷脂等多种物质组成的复合结构,约占细胞壁干重的80%,是革兰阴性菌抵抗外来有毒化合物的第一道防线。孔蛋白(Porins)是外膜蛋白(OMPs)家族中的一类典型膜通道蛋白,1979年Nakae第一次描述了它的特征并将其命名为孔蛋白。孔蛋白的结构在荚膜红细菌(Rhodo bacter capsulatus)中首次得到了精准解析[1],这类蛋白质参与了多种营养物质和有毒小分子(糖、药物、小肽、化学物质)的运输。

关键词：外膜蛋白革兰阴性菌第一道防线孔蛋白化学物质复合结构脂多糖通道蛋白

淋球菌孔蛋白基因与脂寡糖表位融合基因原核表达载体的构建及表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2011年第5期32卷 77-81页

作者：赵莉群陈中伟张伟王希良于三科西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

PCR扩增淋球菌CMCC29400、CMCC29403株孔蛋白(PI)A、B及表位基因,使用linker GS-GGSG并通过重叠PCR法将表位基因连接在PIA、PIB上形成融合基因PIA-表位、PIB-表位,分别与克隆载体pMD-18T连接,测序正确后将目的基因插入表达载体pET32a(+)... 详细信息

PCR扩增淋球菌CMCC29400、CMCC29403株孔蛋白(PI)A、B及表位基因,使用linker GS-GGSG并通过重叠PCR法将表位基因连接在PIA、PIB上形成融合基因PIA-表位、PIB-表位,分别与克隆载体pMD-18T连接,测序正确后将目的基因插入表达载体pET32a(+)中,构建pET32a-PIA-表位、pET32a-PIB-表位、pET32a-PIA和pET32a-PIB重组表达质粒,PCR、双酶切鉴定及测序正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经SDS-PAGE鉴定分析,成功表达融合蛋白。

关键词：淋球菌孔蛋白脂寡糖表位基因融合表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

淋球菌孔蛋白疫苗在动物体内诱导的免疫应答

中国妇幼保健 2005年第24期20卷 3309-3311页

作者：廖芳贺超刘丽江宋启发万沐芬杨振德李雍龙华中科技大学同济医学院病原生物学系 430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科与皮肤科

目的:观察淋球菌孔蛋白疫苗免疫日本大耳白兔后所诱导的免疫应答。方法:兔背皮下注射经原核构建表达并纯化的淋球菌孔蛋白B,ELISA动态检测免疫后大耳兔血清抗体滴度的变化及最高效价;后腿皮内注射孔蛋白B,观察迟发型超敏反应(DTH)、免... 详细信息

目的:观察淋球菌孔蛋白疫苗免疫日本大耳白兔后所诱导的免疫应答。方法:兔背皮下注射经原核构建表达并纯化的淋球菌孔蛋白B,ELISA动态检测免疫后大耳兔血清抗体滴度的变化及最高效价;后腿皮内注射孔蛋白B,观察迟发型超敏反应(DTH)、免疫血清体外玻片凝集及抗菌作用。结果:初次免疫后2周,大耳兔体内已产生抗体,但效价较低;第2次免疫后2周血清效价达到1∶2000;第3次免疫后2周血清抗体水平成倍升高,效价为1∶4000;第4次免疫后2周血清最高效价达到1∶12000。大耳兔腿部发生DTH反应,出现明显红肿,于注射后第4天消退。血清体外凝集试验呈阳性,加入补体后发生淋球菌菌体裂解。结论:淋球菌孔蛋白疫苗可诱发动物特异性免疫应答,这为淋病疫苗的进一步研究提供了理论和实验依据。

关键词：淋球菌孔蛋白免疫应答疫苗

81例女性淋病患者孔蛋白基因型分布及与相应多克隆抗体的反应特性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国妇幼保健 2005年第13期20卷 1568-1570页

作者：宋启发廖芳叶嗣颖崔斌熊萍万沐芬华中科技大学同济医学院病原生物系 430030 华中科技大学同济医院皮肤科 430030

目的:采用PCR和探针技术分析临床淋病奈瑟菌野生株孔蛋白基因的基因型,并和相应多克隆抗体进行反应以检测基因突变对抗原性的影响。方法:采用PCR技术从淋病奈瑟菌野生株中扩增出特征性的孔蛋白基因片段,再用探针检测相应的高变区情况,... 详细信息

目的:采用PCR和探针技术分析临床淋病奈瑟菌野生株孔蛋白基因的基因型,并和相应多克隆抗体进行反应以检测基因突变对抗原性的影响。方法:采用PCR技术从淋病奈瑟菌野生株中扩增出特征性的孔蛋白基因片段,再用探针检测相应的高变区情况,以区分不同的准种(亚型),最后分别与原核表达的标准菌株孔蛋白多克隆抗体进行反应,观察相应的滴度。结果:孔蛋白基因型为A型的有35例,其余46例为B型。孔蛋白A型基因型变化较小,与抗体的反应性较一致;孔蛋白B型基因型变化稍大,但不影响与多克隆抗体的反应活性,A型与B型存在交叉反应,但活性较低,滴度孔蛋白基因型淋病奈瑟菌与相应多克隆抗体的反应情况,有助于考察孔蛋白原核表达产物的生物学效应,对于人工合成出能针对绝大多数临床基因变异菌株的探针用于检测或治疗性抗体的制备有重要意义。

关键词：淋病奈瑟菌孔蛋白基因型多克隆抗体

Shewanella oneidensis孔蛋白表达调控的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Shewanella oneidensis孔蛋白表达调控的研究

作者：居莉莉浙江大学

学位级别：硕士

Shewanella是Y-变形菌门中的一类兼性厌氧菌,在自然界中广泛存在。它可以以多种有机物和无机物作为电子受体,以呼吸多样性而引起关注。现在人们以***为模式菌株,对该属细菌展开了多方面的研究。考虑到很多有机物和无机物是通过孔蛋白进... 详细信息

Shewanella是Y-变形菌门中的一类兼性厌氧菌,在自然界中广泛存在。它可以以多种有机物和无机物作为电子受体,以呼吸多样性而引起关注。现在人们以***为模式菌株,对该属细菌展开了多方面的研究。考虑到很多有机物和无机物是通过孔蛋白进入细胞的。但是人们对于***中主要的孔蛋白的功能和对外界刺激的响应却知之甚少。在本研究中,我们首先对主要的孔蛋白进行了确定然后对其表达调控进行了研究。S03545和S03896是***中最为主要的两个孔蛋白在***基因注释中有7个非特异性的孔蛋白。我们通过SDS-PAGE凝胶电泳和蛋白质质谱测序技术对野生型菌株的外膜蛋白进行提取分析,发现S03896和S03545不仅是***主要的两个孔蛋白,还是该细菌中最为丰富的两个外膜蛋白。***中孔蛋白功能的分析前人研究表明Zn2+能够增强一些细菌对某些抗生素抗性,一般是通过降低特定孔蛋白的表达来实现的。通过构建孔蛋白缺失突变株并对其敏感性进行测定发现,与野生型相比,Zn2+可以在同样程度上增强孔蛋白缺失突变株对氨苄青霉素的抗性,这说明Zn2+增强***对氨苄青霉素的抗性与孔蛋白无关。Zn2+却不影响***对同属β-内酰胺类抗生素亚胺培南的抗性,说明的Zn2+对β-内酰胺类抗生素的这种增强作用具有部分特异性。***两个主要孔蛋白表达调控的研究为了探究这两个表达量如此丰富的孔蛋白对细菌的作用,我们在转录水平和翻译水平对孔蛋白的表达调控进行了分析。我们发现铁转运调控蛋白Fur可以正调控S03896的表达,但是这种调控作用并不是通过铁来实现的。并且在S03896起始密码子上游220～240处富含AT的区域是Fur在S03896的调控位点。此外,Crp对S03896的大量表达是必需的,当Crp或者cAMP缺失后,S03896的表达量降低十倍左右。通过启动子活性测定和SDS-PAGE凝胶电泳的结果分析发现,S03896存在转录后调控。在对Crp对S03896调控机制的进一步研究当中,我们了解到AS03896和Acrp在无氧条件下还原延胡索酸盐,Fe(Ⅲ),NO3-均存在严重缺陷。这预示着Crp可能在无氧条件下对S03896有重要的调控作用。然而S03896和S03545的表达不受渗透压和二元调控系统Envz/OmpR的调控。Crp和Fur对不影响S03545的表达。

关键词： S. oneidensis 孔蛋白调控氨苄青霉素 Fur Crp 启动子

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

孔蛋白对蜱虫及其相关病原体的作用

中华卫生杀虫药械 2021年第2期27卷 170-175页

作者：郑卫青传染病预防控制国家重点实验室研究基地、江西省动物源与媒介生物性传染病重点实验室、南昌市疾病预防控制中心江西南昌330000

蜱虫能携带很多病原体,在畜牧生产和公共卫生上具有十分重要的意义。研究蜱虫与病原体的相互关系,有助于开发、研究防蜱控病的药物、疫苗。孔蛋白存在于大量生物体中,也包括蜱虫。它穿梭于线粒体膜,形成膜通道,通过阴阳离子调节电压开... 详细信息

蜱虫能携带很多病原体,在畜牧生产和公共卫生上具有十分重要的意义。研究蜱虫与病原体的相互关系,有助于开发、研究防蜱控病的药物、疫苗。孔蛋白存在于大量生物体中,也包括蜱虫。它穿梭于线粒体膜,形成膜通道,通过阴阳离子调节电压开闭通道,进而控制细胞代谢过程中的物质和能量流。本文阐述了孔蛋白的结构、进化关系和功能,并重点概述了蜱虫孔蛋白的生理功能及其在影响病原体感染中的作用,亦对蜱虫孔蛋白研究存在的问题,提出了今后的研究方向与构想。

关键词：蜱虫孔蛋白病原体控制