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大型艾美耳球虫早熟株的选育及18S rDNA系统发育分析

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中国兽医学报 2018年第7期38卷 1327-1331页

作者：崔平方素芳顾小龙于小杰梁淑珍张丽云李慧峰索勋河北北方学院动物科技学院河北张家口075000 中国农业大学动物医学院北京100193

通过对6株田间大型艾美耳球虫早熟选育，经20次传代，潜在期由156h缩短至132h，连续5次无选择压力传代，其潜在期不变，说明所获得的大型艾美耳球虫早熟株遗传性状稳定；早熟株与原始株卵囊的结构有差异（早熟株每个孢子囊舍有1个大折... 详细信息

通过对6株田间大型艾美耳球虫早熟选育，经20次传代，潜在期由156h缩短至132h，连续5次无选择压力传代，其潜在期不变，说明所获得的大型艾美耳球虫早熟株遗传性状稳定；早熟株与原始株卵囊的结构有差异（早熟株每个孢子囊舍有1个大折光体而原始株每个孢子囊含有2个小折光体），大小差异不显著；同时对早熟株进行了系统发育分析，进化树显示：大型艾美耳球虫早熟株、原始株及GenBank中兔大型艾美耳球虫18S rDNA序列均聚为一个分支。

关键词：兔大型艾美耳球虫早熟株选育系统发育分析

大型艾美耳球虫18S rDNA部分序列测定与系统发育分析

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湖北农业科学 2011年第9期50卷 1838-1841页

作者：方素芳顾小龙崔平河北北方学院动物科技学院河北张家口075000

从河北某兔场分离大型艾美耳球虫卵囊,CTAB法提取基因组DNA。利用艾美耳属球虫18S rDNA保守引物,PCR扩增大型艾美耳球虫18S rDNA片段,产物纯化后测序。将测得的序列用DNAStar软件分析并与GenBank中公布的11种兔球虫的相应序列进行同源... 详细信息

从河北某兔场分离大型艾美耳球虫卵囊,CTAB法提取基因组DNA。利用艾美耳属球虫18S rDNA保守引物,PCR扩增大型艾美耳球虫18S rDNA片段,产物纯化后测序。将测得的序列用DNAStar软件分析并与GenBank中公布的11种兔球虫的相应序列进行同源性比较,绘制系统进化树。结果表明,扩增出大小约为1522bp的18S rDNA片段,序列分析显示河北株大型艾美耳球虫18S rDNA与GenBank公布的大型艾美耳球虫18S rDNA比对,同源性达99.6%;与国外的11种兔球虫相应序列同源性在92.4%～99.6%之间。

关键词：大型艾美耳球虫 18SrDNA 测序系统发育分析

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大型艾美耳球虫生物学特性研究

动物医学进展 2018年第3期39卷 40-44页

作者：柳南星方素芳顾小龙魏香蒲梁淑珍张丽云李慧峰崔平河北北方学院动物科技学院河北张家口075000 张家口市经开区农委河北张家口075000

为了掌握大型艾美耳球虫原始株的生物学特性,通过对大型艾美耳球虫原始株的潜隐期、致病性、免疫原性及药敏特性等方面进行研究。结果表明,大型艾美耳球虫原始株的潜隐期为168h,孢子化所需时间为37h^42h;在致病性试验中,不同接种剂量的... 详细信息

为了掌握大型艾美耳球虫原始株的生物学特性,通过对大型艾美耳球虫原始株的潜隐期、致病性、免疫原性及药敏特性等方面进行研究。结果表明,大型艾美耳球虫原始株的潜隐期为168h,孢子化所需时间为37h^42h;在致病性试验中,不同接种剂量的显露期和排卵高峰一致,但卵囊产量不同,其中接种剂量为5×10~3个卵囊组的产卵囊量最多,与对照组相比,各感染组均出现不同程度的临床症状和病理变化。在免疫原性试验中,低剂量免疫(100个卵囊)可以对30 000个卵囊的攻虫量产生完全的保护力。在药敏试验中,根据临床表现、卵囊排出量、饲料转化率判断,大型艾美耳球虫对3种抗球虫药的药效最好是莫能菌素,药效最低的是氯苯胍。大型艾美耳球虫原始株致病性较强,免疫原性良好,对莫能菌素敏感,即莫能菌素对其有良好的防治效果,可作为防治家兔感染大型艾美耳球虫的首选药之一。

关键词：大型艾美耳球虫潜隐期致病性免疫原性药敏特性

大型艾美耳球虫表面抗原SAG10、SAG11的原核表达及其对兔的免疫保护效果初步评价

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大型艾美耳球虫表面抗原SAG10、SAG11的原核表达及其对兔的免疫保...

作者：蒲家艳四川农业大学

学位级别：硕士

大型艾美耳球虫(Eimeria magna)为家兔的一种专性的细胞内寄生虫,是对家兔具有中等致病力的虫种。家兔感染大型艾美耳球虫后,临床上表现为精神沉郁、厌食、消瘦和腹泻,严重感染则出现血便甚至死亡。目前,兔球虫病的防治主要依赖药物,长... 详细信息

大型艾美耳球虫(Eimeria magna)为家兔的一种专性的细胞内寄生虫,是对家兔具有中等致病力的虫种。家兔感染大型艾美耳球虫后,临床上表现为精神沉郁、厌食、消瘦和腹泻,严重感染则出现血便甚至死亡。目前,兔球虫病的防治主要依赖药物,长期使用药物可能导致球虫耐药性产生及兔肉中的药物残留。用疫苗进行免疫预防是控制兔球虫病的一种替代途径。然而,目前报道的兔球虫疫苗是早熟弱毒活疫苗,该疫苗可能存在生产成本较高以及可能出现毒力返强风险等问题,而重组亚单位疫苗有着安全稳定、易于获得、便于大量生产等优点。为此,本研究从实验室测定的大型艾美耳球虫转录组数据中找到4个Em SAG基因(Em SAG1、Em SAG2、Em SAG10和Em SAG11)通过对这4个基因在虫体不同发育的转录水平分析,筛选出在裂殖子阶段高表达的2个基因(Em SAG10和Em SAG11)进行原核表达,并通过动物试验评价了r Em SAG10和r Em SAG11的免疫保护效果,为兔大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制提供参考。从大型艾美耳球虫转录组数据筛选出了Em SAG1、Em SAG2、Em SAG10和Em SAG11共4个基因,克隆测序后采用实时荧光定量PCR分析了4个基因在大型艾美耳球虫4个发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、裂殖子和配子体)的转录水平,发现这4个基因在各个阶段均有转录,且转录水平存在差异。其中Em SAG1和Em SAG2在孢子化阶段高表达;Em SAG10和Em SAG11在裂殖子阶段高表达。同时,通过原核表达获得r Em SAG10和r Em SAG11,它们均具有良好的免疫反应性。通过对大型艾美耳球虫r Em SAG10和r Em SAG11对家兔的免疫保护效果进行评价(方法)将54只无球虫兔分为6组(空白对照组、攻虫对照组、空白载体对照组、皂素佐剂对照组、r Em SAG10和r Em SAG11免疫组,每组9只试验兔),42日龄新西兰白兔采用颈部皮下注射方式进行首免,空白对照组(不免疫不攻虫组),攻虫对照组(不免疫攻虫组)每只注射1 ml无菌PBS,皂素佐剂对照组每只注射1ml(2 mg/ml)皂素,空载蛋白对照组每只注射1ml(100μg/ml)p ET-32a(+)蛋白,r Em SAG10和r Em SAG11免疫组分别注射1ml(100μg/ml)的r Em SAG10和r Em SAG11,14 d后同等剂量进行二免。二免后14 d攻虫,除空白对照组外,每组每只无球虫兔经口感染1×10个大型艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后每只新西兰白兔每天饲喂100 g。感染后定期观察各组兔的临床症状、称重、采血和采粪样并在感染14d后剖检,统计各组兔的死亡率、卵囊排出量、相对增重、料肉比等,并检测首免前至剖杀前血清中Ig G变化情况,测量攻虫前血清中IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、TGF-β、IFN-γ含量。(结果)动物实验表明,r Em SAG10和r Em SAG11免疫组相对增重率分别为82.2%、75.9%,其料肉比分别为3.8:1、4.5:1,其卵囊减少率分别为82.8%、86%,抗球虫指数(ACI)分别为178.4、168.9,与对照组相比肠道病变明显减轻。r Em SAG10和r Em SAG11免疫组首免后1周特异性Ig G水平均升高,可维持至攻虫后2周。r Em SAG10二免后血清中的TGF-β、IL-2、IL-4和IL-10显著升高,r Em SAG11二免后血清中的TGF-β、IL-4和IL-10显著升高,这表明r Em SAG10可以诱导机体产生体液免疫和细胞免疫,r Em SAG11只能诱导体液免疫。r Em SAG10更具有免疫保护效果,更适合作为兔大型艾美耳球虫基因重组亚单位疫苗的候选抗原。

关键词：兔大型艾美耳球虫 SAG10 SAG11 原核表达重组蛋白免疫保护

兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫PCR检测靶标的筛选与单一、多重直接PCR检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2023年第10期54卷 4327-4337页

作者：肖洁罗跃军陈浩蒲家艳何维熊常明郝哥任永军杨光友四川农业大学动物医学院成都611130 四川省畜牧科学研究院成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室成都610066 四川省岳池县动物疫病预防控制中心岳池638300

旨在建立快速、简便的兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫直接PCR检测方法。首先克隆斯氏艾美耳球虫线粒体基因组mtDNA和3种兔球虫顶质体基因rpoB,结合GenBank中收录的其它兔球虫的相关序列进行比对分析,然后以种间差异明... 详细信息

旨在建立快速、简便的兔斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫直接PCR检测方法。首先克隆斯氏艾美耳球虫线粒体基因组mtDNA和3种兔球虫顶质体基因rpoB,结合GenBank中收录的其它兔球虫的相关序列进行比对分析,然后以种间差异明显的序列为靶基因在其超变区设计多对特异性引物,同时对引物浓度等条件进行优化,并评价PCR方法的敏感性和特异性。本研究首次测定了斯氏艾美耳球虫线粒体基因组全序列和3种兔球虫顶质体基因rpoB的序列,斯氏艾美耳球虫mtDNA全长6277 bp,包括3个蛋白质基因,与其它6种兔球虫mtDNA序列相似率为93.90%~97.45%;斯氏艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫顶质体基因rpoB大小在500 bp左右,三者相似性达93.93%~95.30%。靶基因筛选结果表明3种兔球虫ITS与其它基因(rpoB和mtDNA)相比较具有种内保守和种间差异大的特点,更适合用于分子诊断;基于3种兔球虫ITS序列的引物中,Ps1、Pi2、Pm2在单一或多重检测时均具有良好的特异性和敏感性。本试验通过对艾美耳球虫PCR检测候选基因靶标(ITS、mtDNA和rpoB)进行序列分析,筛选ITS为兔球虫种间差异明显的检测靶标基因,在此基础上建立的单一直接PCR方法和多重直接PCR方法具有特异、敏感、操作简便的优点,可用于3种兔球虫的流行病学调查或兔球虫病临床诊断。

关键词：兔斯氏艾美耳球虫肠艾美耳球虫大型艾美耳球虫 ITS 直接PCR

妥曲珠利及其复方制剂对人工感染大型艾美耳球虫病兔的治疗

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中国兽医学报 2014年第12期34卷 1935-1939页

作者：石团员鲍国连索勋付媛舒琦艳陈学智浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021 中国农业大学动物医学院北京100193

大型艾美耳球虫(Eimeria magna)是引起球虫病的主要兔球虫种类之一,药物防治依然是目前兔球虫病的主要控制手段,然而,耐药虫株的出现影响了抗球虫药物的防治效果,针对不同地理虫株筛选有效的药物或复方制剂是提高药物临床应用效果的重... 详细信息

大型艾美耳球虫(Eimeria magna)是引起球虫病的主要兔球虫种类之一,药物防治依然是目前兔球虫病的主要控制手段,然而,耐药虫株的出现影响了抗球虫药物的防治效果,针对不同地理虫株筛选有效的药物或复方制剂是提高药物临床应用效果的重要途径。本研究以兔大型艾美耳球虫为模型,通过人工感染无球虫兔,来评价妥曲珠利及其复方制剂治疗兔球虫病的效果。试验结果显示,妥曲珠利-莫能菌素复方制剂(TOL-MS)的治疗效果最佳,在感染后第14天,TOL-MS治疗组兔平均低质量与不感染不用药组相当,为(825.60±33.61)g,显著高于妥曲珠利(TOL)、妥曲珠利-磺胺喹恶啉(TOL-SQ)和感染不用药组;并且,在感染***后,除TOL-MS治疗组和不感染不用药组兔无临床症状外,其他各组兔均出现了不同程度的食欲不振、便秘和拉稀症状;而且,与感染不用药对照组相比,TOL-MS治疗组的***卵囊减排率最高,为(99.22±0.09)%,高于TOL治疗组的(96.79±0.59)%,显著高于TOL-SQ治疗组的(9.51±5.87)%。该研究筛选到1种治疗兔球虫病效果显著的妥曲珠利复方口服溶液剂,将为兔球虫病防治提供有效的手段和科学依据。

关键词：兔球虫病大型艾美耳球虫妥曲珠利药物治疗

兔大型艾美耳球虫感染调查及其潍坊株分离鉴定与早熟选育研究

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兔大型艾美耳球虫感染调查及其潍坊株分离鉴定与早熟选育研究

作者：李国良华南农业大学

学位级别：硕士

兔球虫病是由孢子虫纲真球虫目艾美耳科艾美耳属的一种或几种艾美耳球虫引起的一种以腹泻为主要症状的疾病,病原寄生于家兔肝脏或肠上皮细胞内。其中,大型艾美耳球虫是导致该病发生的主要虫种之一,该球虫具有传染性广和致病力强等特点,... 详细信息

兔球虫病是由孢子虫纲真球虫目艾美耳科艾美耳属的一种或几种艾美耳球虫引起的一种以腹泻为主要症状的疾病,病原寄生于家兔肝脏或肠上皮细胞内。其中,大型艾美耳球虫是导致该病发生的主要虫种之一,该球虫具有传染性广和致病力强等特点,严重阻碍了养兔业的发展进程。当前,我国防控兔球虫病主要使用抗球虫药,长期及不当的药物使用导致了耐药虫株和药物残留等问题的出现,一方面危及人体的健康,另一方面使得药物防治兔球虫病的弊端日益突显起来。国内外对禽球虫病免疫预防方面的研究取得了较大的成果,国内已经有了商品化鸡球虫疫苗的生产和使用,但兔球虫疫苗目前在国内研究的人很少,商品化的兔球虫疫苗在市场上更没有出现和使用。本论文第一部分研究内容是广东、广西和山东部分地区兔大型艾美耳球虫流行病学调查。分别采集潍坊、佛山、河源、阳春、玉林、桂林、南宁7个地区9个不同规模、不同品种及不同年龄段的936份新鲜兔粪便样品,然后对采集的粪便样品应用饱和盐水漂浮法检测其中有无卵囊的存在,并通过卵囊形态学去判断兔球虫卵囊的类型。结果显示,感染大型艾美耳球虫的阳性样品所占比例为33.11%(310/936);不同地区中,玉林地区的感染率最高达到40.06%,南宁地区感染率最低为12.00%,其他地区感染率均超过20%;在不同年龄阶段中,幼兔的染率最高为60.00%,青年兔的感染率次之为29.82%,种兔的感染率最低为9.52%;不同养殖规模中,规模化大型养殖场的兔大型艾美耳球虫感染率最低为26.59%,中型和小型散养户的兔大型艾美耳球虫感染率则较高,分别为27.94%和40.28%;在不同品种中,伊拉兔的感染率最高为40.06%,比利时兔的感染率最低为12.00%,其他品种兔大型艾美耳球虫的感染率均超过25%。本论文第二部分研究内容是进行兔大型艾美耳球虫潍坊株的单卵囊分离及其基本生物学特性的研究。应用琼脂薄膜法进行兔球虫单卵囊分离,从含混合球虫卵囊的新鲜粪便中分离出大型艾美耳球虫卵囊,纯化后接种无球虫兔进行继代增殖。参照Oliveira发表设计的兔大型艾美耳球虫18s DNA序列,合成引物后对所提取的DNA进行扩增,之后进行测序比对。结果显示,所分离纯化的球虫卵囊为大型艾美耳球虫纯种虫株。对其部分生物学特性的研究结果表明:大型艾美耳球虫的潜隐期为14042 h,孢子化时间最早为32 h,80%的卵囊完成孢子化所需要时间为45 h;随机测量100个孢子化卵囊后发现其平均大小为35.76μm×21.91μm,形态指数为1.63。为测定其繁殖力,以500、1000和3000个孢子化卵囊经口分别接种40日龄无球虫兔,结果显示其繁殖能力随接种剂量的增大呈减小趋势;大型艾美耳球虫具有较强的致病性,分别以1万、3万、5万个孢子化卵囊的剂量接种40日龄无球虫兔,结果显示,三组兔子均出现精神沉郁、食欲减退、腹泻等现象。剖检可见空肠和回肠均有病变,接种3万和5万剂量组兔肠道浆膜层明显充血,肠腔明显扩张,且肠壁变薄,剪开肠道可见大量黏液样物质,且有纽扣样坏死出现,用盖玻片刮取病变肠壁黏膜,放置于显微镜下观察,可见大量裂殖体。本论文第三部分研究内容是对兔大型艾美耳球虫进行早熟选育,之后测定早熟株的潜隐期、卵囊大小、致病性以及其稳定性,同时设置亲本株试验组进行对照。经过连续27代的早熟选育后,早熟株的潜隐期由亲本株的142 h缩短至130 h,卵囊平均大小为34.41μm×21.13μm,形态指数为1.63;从临床症状及增重情况进行致病性的对比,早熟株的致病性要小于亲本株;排卵高峰期上,早熟株出现在第8天,较亲本株的第9天提前一天,且早熟株排卵高峰期峰值低于亲本株。本论文在国内第一次对兔大型艾美耳球虫进行早熟株的选育,并对其基本生物学特性做了系统的研究,这些都为后续兔球虫疫苗的研发奠定了基础。

关键词：兔大型艾美耳球虫流行病学生物学特性早熟系

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扫描电镜对兔大型艾美耳球虫致病性的研究

中国兽医寄生虫病 1995年第4期3卷 23-27,19页

作者：史晓春林昆华北京农业大学兽医学院

扫描电镜对兔大型艾美耳球虫致病性的研究史晓春，林昆华（北京农业大学兽医学院）大型艾美耳球虫（Ｅ．ｍａｓｎａ）是一种普遍寄生于兔肠道的球虫，能阻碍生长，造成严重的经济损失。该种自１９２５年Ｐｅｒａｒｏｌ报道以来，对其致... 详细信息

扫描电镜对兔大型艾美耳球虫致病性的研究史晓春，林昆华（北京农业大学兽医学院）大型艾美耳球虫（Ｅ．ｍａｓｎａ）是一种普遍寄生于兔肠道的球虫，能阻碍生长，造成严重的经济损失。该种自１９２５年Ｐｅｒａｒｏｌ报道以来，对其致病性的报道不一［１，２］。应用扫描...

关键词：兔病大型艾美耳球虫致病性扫描电镜

中药提取物对兔大型艾美耳球虫的预防效果观察

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中国养兔 2021年第3期 4-6页

作者：任永军罗跃军叶勇刚熊浪华瑞其邝良德郭志强杨光友四川省畜牧科学研究院成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室成都610066 四川农业大学动物医学院成都611130

本试验以大型艾美耳球虫为攻虫虫种,研究中药提取物和氯羟吡啶对兔肠球虫的防治效果,开展抗球虫药物筛选。选择28日龄新西兰白兔162只随机分成中药1组、中药2组、中药3组、氯羟吡啶药物组、阳性对照组、阴性对照组。试验结果表明,各试... 详细信息

本试验以大型艾美耳球虫为攻虫虫种,研究中药提取物和氯羟吡啶对兔肠球虫的防治效果,开展抗球虫药物筛选。选择28日龄新西兰白兔162只随机分成中药1组、中药2组、中药3组、氯羟吡啶药物组、阳性对照组、阴性对照组。试验结果表明,各试验组之间的初重、末重、平均日增重差异不显著(P>0.05);但阴性对照组和中药3组死亡率显著低于其他各试验组(P球虫中药的添加量为1 kg/t日粮时,可有效防治大型艾美耳球虫感染。

关键词：兔大型艾美耳球虫中药提取物氯羟吡啶药物筛选