检索结果-南通市图书馆

电测与仪表 2000年第11期37卷 25-29页

作者：马利人湖北电力试验研究所武汉430077

阐述了单相多表位交流电度表检定装置的原理，还重点介绍隔离电压互感器的结构、功能、自检线路，以及装置的检定及注意事项。

关键词：检定装置多表位隔离电压互感器交流电度表

流感亚型H3579抗A型多表位核酸疫苗免疫指标检测

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中国公共卫生 2014年第10期30卷 1347-1348页

作者：洪宇辽东学院医学院辽宁丹东118003

流感是一种由流感病毒引起的传染病,发病率高、破坏性强,全球每年有25~50万死于流感[1]。目前流感的预防均选择灭活疫苗,但其不能够有效应对流感病毒变异的速度,开发新型疫苗显的尤为重要。多表位核酸疫苗是将抗原基因内部抗原的活性部... 详细信息

流感是一种由流感病毒引起的传染病,发病率高、破坏性强,全球每年有25~50万死于流感[1]。目前流感的预防均选择灭活疫苗,但其不能够有效应对流感病毒变异的速度,开发新型疫苗显的尤为重要。多表位核酸疫苗是将抗原基因内部抗原的活性部位与表达质粒通过串联插入而构建,能够有效发挥疫苗内部抗原表位的优势,去除保护性免疫中不利因素（潜在片段中毒性成分结构）,同时能够对流感病毒中抗原表位的各种型别进行优化组合。

关键词：多表位核酸疫苗流感

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水貂CDV-MEV二联多表位抗原的设计

黑龙江畜牧兽医 2018年第5期 203-205,209,269,270页

作者：卞大伟辽宁省畜产品安全监察所

犬瘟热和水貂病毒性肠炎是在毛皮动物养殖业中广泛流行的两类急性、接触性传染病,病原分别是犬瘟热病毒（CDV）和水貂肠炎病毒（MEV）。疫苗接种是主要的预防手段。但当前市售MEV灭活苗更新速度慢、灭活剂致癌,不能诱导细胞免疫反应;CD... 详细信息

犬瘟热和水貂病毒性肠炎是在毛皮动物养殖业中广泛流行的两类急性、接触性传染病,病原分别是犬瘟热病毒（CDV）和水貂肠炎病毒（MEV）。疫苗接种是主要的预防手段。但当前市售MEV灭活苗更新速度慢、灭活剂致癌,不能诱导细胞免疫反应;CDV弱毒苗易受母源抗体干扰,存在一过性免疫抑制、返祖散毒等问题。

关键词：水貂肠炎病毒多表位犬瘟热病毒设计抗原接触性传染病细胞免疫反应动物养殖业

禽传染性支气管炎病毒多表位嵌合基因的构建和原核表达

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中国兽医杂志 2009年第10期45卷 22-24页

作者：田浪王红宁高荣张安云鲁丹张云飞王霆康润敏四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室四川成都610064

传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,给养禽业造成严重经济损失.生产中常采用弱毒疫苗对IB进行预防控制,但它存在毒力返强的隐患[1];灭活疫苗对冠状病毒感染的免疫效果不确实,且其... 详细信息

传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,给养禽业造成严重经济损失.生产中常采用弱毒疫苗对IB进行预防控制,但它存在毒力返强的隐患[1];灭活疫苗对冠状病毒感染的免疫效果不确实,且其副作用可能造成较严重及较长时间的局部反应.常规基因工程疫苗具有安全性好和诱导全方位免疫应答等优点,但它通常只能携带一个目的基因,因而诱导的免疫保护力有限.

关键词：禽传染性支气管炎病毒鸡传染性支气管炎病毒原核表达嵌合基因多表位接触性传染病冠状病毒感染经济损失

HIV-1复合多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒疫苗的构建及小鼠免疫原性

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中国科学（C辑） 2007年第1期37卷 65-72页

作者：张立树金宁一宋英今王宏马鹤雯李子健江文正军事医学科学院十一所全军基因工程重点实验室长春130062 天津大学农业与生物工程学院天津300072 暨南大学生命科学院生物系广州510632 Department of Biochemistry and Molecular Biology Oklahoma state UniversityStillwater74078 北京大学第三医院血管医学研究所北京100083 华东师范大学生命科学学院上海200026

将HIV-1p24基因插入至人工设计的复合多表位基因MEG中,获得嵌合基因MEGp24;将MEGp24插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游,构建出鸡痘病毒重组转移质粒;经转染和BrdU加压筛选,以基因组PCR和Western blot法筛选出重组病毒;将... 详细信息

将HIV-1p24基因插入至人工设计的复合多表位基因MEG中,获得嵌合基因MEGp24;将MEGp24插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游,构建出鸡痘病毒重组转移质粒;经转染和BrdU加压筛选,以基因组PCR和Western blot法筛选出重组病毒;将重组病毒大量制备并纯化后,分别于0,14,42天肌肉注射免疫BALB/c小鼠;第3次免疫后一周,采集小鼠全血与脾脏,分离血清并无菌制备脾淋巴细胞,ELISA法检测小鼠血清HIV-1抗体、脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-α和IL-2的含量,流式细胞仪测定CD4+,CD8+T淋巴细胞亚类数量,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾特异性CTL杀伤活性.结果表明,重组病毒刺激小鼠产生HIV-1特异性抗体,出现T细胞亚类数量增加,产生针对HIV-1 H-2d限制性CTL表位的特异性靶细胞杀伤作用,同时免疫小鼠脾细胞在HIV-1抗原肽的刺激下分泌Th1类细胞因子的水平大幅增加.研究提示多表位嵌合基因重组FPV疫苗具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生HIV-1特异性细胞和体液免疫应答.

关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒多表位重组鸡痘病毒免疫

乙型肝炎病毒多表位治疗性抗原基因的合成、表达及抗原性研究

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第一军医大学学报 2003年第8期23卷 802-805页

作者：骆利敏李明夏虎黄建生陈百虹王萍第一军医大学热带病研究所广东广州510515 第一军医大学珠江医院呼吸科广东广州510282

目的研究乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗基因的合成、表达及其产物的抗原性。方法设计、并合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT,克隆入融合表达载体pWR450-1,构建重组质粒PWR/BPT。在大肠杆菌中表达乙型肝炎多表位抗原蛋白并纯化该蛋白,并... 详细信息

目的研究乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗基因的合成、表达及其产物的抗原性。方法设计、并合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT,克隆入融合表达载体pWR450-1,构建重组质粒PWR/BPT。在大肠杆菌中表达乙型肝炎多表位抗原蛋白并纯化该蛋白,并用Western-blotting方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果成功构建了融合表达载体PWR/BPT,在大肠杆菌中表达出乙型肝炎多表位抗原蛋白,Western-blotting 检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论HBV多表位治疗性抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的重组融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。

关键词：乙型肝炎多表位治疗性疫苗

具有免疫反应性的弓形虫多表位抗原在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定

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第一军医大学学报 2005年第5期25卷 528-530,544页

作者：杨培梁陈晓光王元占李华周晓红吴焜言慧南方医科大学南方医院实验动物研究中心广东广州510515 南方医科大学寄生虫学教研室广东广州510515

目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠... 详细信息

目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导,SDS-PAGE分析和鉴定该基因的表达水平、表达产物的可溶性及其相对分子质量,Western-blot分析表达产物的免疫反应性。结果该基因在原核表达系统中经诱导,得到了Mr31000的可溶性融合表达产物。经Ni-NTA纯化,纯度可达90%以上。免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B36感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别。结论弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值。

关键词：弓形虫多表位大肠杆菌蛋白表达免疫反应性

多亚型多表位流感病毒核酸疫苗与重组鸡痘病毒构建及实验免疫研究

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多亚型多表位流感病毒核酸疫苗与重组鸡痘病毒构建及实验免疫研究

作者：陈义锋吉林大学

学位级别：硕士

本研究根据当前多个亚型高致病性禽流感病毒跨种传播的现实和流行现状,成功应用生物信息学理论筛选出流感病毒的多个优势抗原表位(流感病毒内部保守的M、NP蛋白CTL表位,和H3、H9 HA及N1 NA Th细胞表位),设计并合成了针对多个亚型流感病... 详细信息

本研究根据当前多个亚型高致病性禽流感病毒跨种传播的现实和流行现状,成功应用生物信息学理论筛选出流感病毒的多个优势抗原表位(流感病毒内部保守的M、NP蛋白CTL表位,和H3、H9 HA及N1 NA Th细胞表位),设计并合成了针对多个亚型流感病毒的通用多表位基因Epi,以高致病性禽流感病毒H5N1和H7N1的HA融合表达基因为骨架,构建了主要针对H3579亚型流感病毒的嵌合型通用多表位基因表达盒H5-Epi-H7。以pVAX1真核表达质粒和鸡痘病毒282E4株为载体构建了嵌合表达流感通用多表位基因的真核表达质粒pVAX1-H5-Epi-H7、pVAX1-H5HA-Epi和重组鸡痘病毒rFPV-H5-Epi-H7。应用BALB/c小鼠动物模型进行了免疫原性初步研究,免疫结果显示重组DNA疫苗和FPV重组体均诱导机体产生了抗流感H3、H5、H7和H9 HA的特异性体液和细胞免疫,其中诱导的H5HA、H7HA抗体水平较高;淋巴细胞转化试验、淋巴细胞亚类FACS检测和γIFN-ELISPOT细胞免疫指标检测显示,多表位(H5-Epi-H7)重组体均诱导了较强的细胞免疫,其中重组鸡痘病毒vFPV-H5-Epi-H7的免疫诱导效果更好。

关键词：流感病毒多表位核酸疫苗重组鸡痘病毒构建与免疫

丙型肝炎病毒多表位蛋白的抗原性及免疫应答研究

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丙型肝炎病毒多表位蛋白的抗原性及免疫应答研究

作者：龚育平第二军医大学

学位级别：硕士

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)主要通过血液途径传播,能引起急、慢性肝炎并可导致肝硬化和肝细胞癌。全世界现有HCV感染者约1.7亿,严重影响人类健康,其治疗常用干扰素和利巴韦林,应答率也仅约为40%,因此,研制HCV疫苗具有重要意义... 详细信息

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)主要通过血液途径传播,能引起急、慢性肝炎并可导致肝硬化和肝细胞癌。全世界现有HCV感染者约1.7亿,严重影响人类健康,其治疗常用干扰素和利巴韦林,应答率也仅约为40%,因此,研制HCV疫苗具有重要意义。HCV基因组全长一般在9379～9481nt之间,编码一个约含3000个氨基酸的多聚蛋白前体,在宿主和病毒自身蛋白酶的加工下产生结构蛋白(C、E1和E2)和非结构蛋白(NS2、NS3、NS4和NS5等)。结构蛋白E2中的第384-410位氨基酸区段是个高度变异区,称为HVR1。众多实验表明,HVR1中存在中和表位,其相应的中和抗体不仅可以阻止病毒对靶细胞的粘附,而且在感染痊愈过程中起着重要作用,但该区段高度变异,诱生的抗体具有株特异性,往往对不同HCV变异株的感染缺乏交叉保护,给丙型肝炎疫苗的研制造成困难。本实验室在前期工作中,曾针对HCV的免疫学特性,优选了数条能模拟大多数HVR1免疫原性的HVR1模拟表位,同时联合应用多条HCVT细胞表位,设计合成出了一段包含9条HCVE2蛋白HVR1(384～410aa)模拟B细胞表位,2条C区保守CTL表位(35～44aa,132～140aa)、1条NS3区保守CTL表位(1073～1081aa)及1条NS3区保守Th表位(1251～1259aa)的多表位抗原融合基因(multi-epitope fragment combination,mfc),并对其免疫原性进行了分析,发现该多表位抗原基因能够诱生针对HCV的特异性免疫应答。在此基础上,为进一步提高mfc基因的免疫原性,本研究将HAsAg基因融合在mfc基因的N端,构建了以HBsAg为佐剂的HCV DNA疫苗,在小鼠中检测了其免疫效果;同时,本研究从mfc基因中优选出5条HVR1模拟B细胞表位基因(hcvme),与gst基因融合后经大肠杆菌表达并纯化出重组蛋白GST-HCVME,通过小鼠免疫实验对其免疫原性进行了分析;此外,本研究还检测了mfc基因在大肠杆菌中的重组表达产物—GST-MFC蛋白对丙肝患者外周血淋巴细胞的增殖作用情况。一、以乙型肝炎表面抗原基因为佐剂的丙型肝炎病毒多表位DNA疫苗的构建及在小鼠中的免疫应答研究为增强HCV多表位DNA疫苗的免疫效果,我们将HBsAg基因融合在mfc基因的N末端,构建了HBsAg+MFC的重组HCV DNA疫苗,体外转染HEK 293T细胞检测了其瞬时表达情况,体内实验采用肌肉注射法接种BALB/c小鼠对其免疫效果进行了评价,检测了其诱导的抗体产生情况、特异性抗体同HVR1合成肽的交叉反应率、MFC蛋白特异性的免疫小鼠脾细胞增殖反应及细胞因子IFN-γ

关键词：丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus、HCV) 乙肝表面抗原(HBsAg) 模拟表位多表位 DNA疫苗融合抗原免疫应答

戊型肝炎疫苗多表位免疫化学质量分析系统的建立及其在稳定性研究中的初步应用

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戊型肝炎疫苗多表位免疫化学质量分析系统的建立及其在稳定性研究...

作者：翁祖森厦门大学

学位级别：硕士

戊型肝炎(戊肝,HE)是一种世界范围内危害严重的传染病,由戊型肝炎病毒(HEV)感染引发,其中孕妇病死率可高达20%。据估计全球约有1/3的人口感染过HEV,发达国家的戊型肝炎散发病例也逐年增多。我国属于戊型肝炎高发流行地区,各地广泛存在... 详细信息

戊型肝炎(戊肝,HE)是一种世界范围内危害严重的传染病,由戊型肝炎病毒(HEV)感染引发,其中孕妇病死率可高达20%。据估计全球约有1/3的人口感染过HEV,发达国家的戊型肝炎散发病例也逐年增多。我国属于戊型肝炎高发流行地区,各地广泛存在散发性戊型肝炎。目前全世界唯一上市的戊肝预防性疫苗Hecolin(?)由本实验室和厦门万泰沧海生物科技有限公司联合研制,其抗原成分为HEV ORF2编码的a.a.368-a.a.606截短蛋白p239,该蛋白能够形成稳定的VLP结构并且能激发机体产生针对HEV较强的免疫保护。虽然Hecolin(?)有较多的研究支持以及较为严格完善的生产工艺,但仍需要进一步完善疫苗质量分析系统以及稳定性研究。疫苗免疫学分析方法相对于生物物理、生物化学分析方法是一类特异性针对疫苗抗原高级构象的分析方法。其中,疫苗体外免疫化学质量分析以其成本低、误差小、周期短等诸多优势,近年来逐渐部分替代了作为疫苗的效价测定金标准的体内动物试验,并在某些重组VLP疫苗(如HPV疫苗Gardasil(?))上证实了与动物试验(ED50)结果的良好相关性。针对关键免疫优势表位及中和表位的分析可实现对重组VLP(?)苗免疫原性的有效体外评估,这提示了基于体外免疫化学分析方法的疫苗体外相对效价评估(IVRP)可很好地应用于疫苗工艺控制、不同批次疫苗放行以及稳定性考察工作。本研究旨在建立HEV疫苗Hecolin(?)的多表位免疫化学质量分析系统并将其应用于稳定性研究,利用多个疫苗表位区抗体的体外免疫化学质量分析系统则能从多个抗原角度上对重组HEV疫苗进行全面的构象和活性监控。首先,对本实验室现有27株p239单抗的交叉阻断信息进行聚类分析,根据不同p239结合表位区将单抗分为6个分群A1-A6,同时进行与p239结合活性、对p239构象敏感性等抗体性质的定量分析。然后从5个p239表位区内根据抗体的血清阻断率、结合活性、构象敏感性等筛选获得9株代表性单抗用于HEV疫苗的免疫化学质量分析。其次,利用筛选出的单抗组合建立了 HEV疫苗免疫化学质量分析系统,包括:基于无分子标记测定的表面等离子共振法(SPR法)、基于抗原“溶液中”构象测定的竞争ELISA系统(rIC50法)以及基于8C11关键表位测定的双抗夹心ELISA系统(rEC50法)。其中,在rEC50法中引入了“平行线分析”的数据处理模型,对ELISA结果进行数据质量控制及有效拟合,保证了试验的可重复性和数据的可靠性。上述三种免疫化学分析系统分别涉及6株、5株和2株单抗,均进一步应用于不同批次(6批)疫苗原液的体外相对效价评估(IVRP)并考察了检测方法的重现性,证明了不同疫苗批次的一致性。这三种分析方法还能应用于HEV疫苗批次放大后的“可比性分析”或QbD(Quanlity by Design)系统完善中。最后,本研究还初步应用HEV疫苗多表位免疫化学质量分析系统于Hecolin(?)及疫苗蛋白的稳定性研究中。对HEV疫苗蛋白在不同温度、pH、盐浓度、添加剂条件下的稳定性进行了考察,并对建立的免疫化学分析系统与传统的SDS-PAGE、SEC-HPLC、DSC等进行比较,发现具有一定的相关性。对HEV疫苗的热加速试验不仅完善了疫苗的稳定性信息,还证明了铝佐剂对疫苗稳定性的增强作用。系统的免疫分析手段及HEV疫苗稳定性信息为后续IVRP替代动物试验研究、支持市场需求的疫苗工艺放大以及HEV联合苗的研发提供了有力的技术保证和数据支持。综上所述,本研究建立了 HEV疫苗的多表位免疫化学质量分析系统并初步将其应用于疫苗稳定性研究。这种分析系统的建立不仅为HEV疫苗的体外相对效价评估奠定了基础,相对于动物试验大大降低了检测成本和分析周期,还为今后其它重组VLP疫苗的相对效价评估提供了借鉴模式。

关键词： HEV疫苗多表位体外相对效价测试