具有免疫反应性的弓形虫多表位抗原在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定

作     者：杨培梁 陈晓光 王元占 李华 周晓红 吴焜 言慧 YANG Pei-liang;CHEN Xiao-guang;WANG Yuan-zhan;LI Hua;ZHOU Xiao-hong;WU Kun;YAN Hui

作者机构：南方医科大学南方医院实验动物研究中心广东广州510515 南方医科大学寄生虫学教研室广东广州510515 

出 版 物：《第一军医大学学报》 (Journal of First Military Medical University)

年 卷 期：2005年第25卷第5期

页      面：528-530,544页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：广东省自然科学基金(20020041) 广州市科技计划项目基金(2002Z-T24011)~~ 

主　　题：弓形虫 多表位 大肠杆菌 蛋白表达 免疫反应性 

摘      要：目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导,SDS-PAGE分析和鉴定该基因的表达水平、表达产物的可溶性及其相对分子质量,Western-blot分析表达产物的免疫反应性。结果该基因在原核表达系统中经诱导,得到了Mr31000的可溶性融合表达产物。经Ni-NTA纯化,纯度可达90%以上。免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B36感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别。结论弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值。