检索结果-南通市图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2012年第1期32卷 58-64页

作者：王健蔺亚辉陈祥鹏李莉莉李军王恒张振龙北京生物制品研究所第四研究室 100024 北京协和医学院基础学院病原生物学系

目的研究载体融合肽段对人工重组多表位蛋白***-1构象、免疫原性及体外保护性的影响。方法将人工多表位抗原***-1基因通过不同的酶切位点克隆到原核表达载体pDS—ex上，从而获得带有不同载体融合标签或没有标签的蛋白，表达产物经纯化得... 详细信息

目的研究载体融合肽段对人工重组多表位蛋白***-1构象、免疫原性及体外保护性的影响。方法将人工多表位抗原***-1基因通过不同的酶切位点克隆到原核表达载体pDS—ex上，从而获得带有不同载体融合标签或没有标签的蛋白，表达产物经纯化得到P312-1、P312—2、P312-3这3种多表位蛋白，利用生物信息学和色谱技术对制备的3种蛋白的二级及三级结构进行了分析，并将这3种纯度大于95％的重组蛋白与弗氏佐剂乳化后分别免疫接种小鼠和新西兰白兔，免疫后血清按常规进行ELISA间接法检测抗体滴度，采用酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测分泌细胞因子的特异性淋巴细胞克隆数，同时进行了间接免疫荧光分析（IFA）以及对体外培养的恶性疟原虫的生长抑制试验（GIA）。结果P312—1、P312-2、P312-3这3种多表位蛋自在动物模型体内诱导的抗体滴度水平并无差异（P〉0．05），但蛋白免疫小鼠后却诱导了不同类型的T细胞反应，而且3种蛋白免疫血清IgG体外生长抑制率出现明显差异（分别为93．9％、14．7％、54．3％）。利用生物信息学和色谱技术分析，发现从不同表达载体制备的重组蛋白在二级和三级结构上出现极大差异，预测蛋白质分子的空间构象发生了改变，而且一些表位在分子中的位置也有明显的改变。结论不同的载体肽融合表达对多表位蛋白***-1结构及免疫活性的影响会产生不同的作用，直接影响多表位蛋白的构象，进而会增强或抑制多表位蛋白的免疫效应。

关键词：多表位蛋白载体肽融合表达

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

随机组合多表位恶性疟疾疫苗***-1蛋白的纯化及鉴定

引用

中国生物制品学杂志 2011年第12期24卷 1391-1395,1399页

作者：王健孙成金李莉莉陈祥鹏李军王恒张振龙北京生物制品研究所第四研究室北京100024 北京协和医学院基础学院病原生物学系北京100005

目的纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗***-1蛋白,并进行各项鉴定。方法对BL21(DE3)-***-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的***-1蛋白进行各种理化性质鉴定;采用Western blot法检测其反应原性;以不同剂量的***-1蛋白免疫BALB/c小... 详细信息

目的纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗***-1蛋白,并进行各项鉴定。方法对BL21(DE3)-***-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的***-1蛋白进行各种理化性质鉴定;采用Western blot法检测其反应原性;以不同剂量的***-1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价;间接荧光免疫法(IFA)分析免疫血清对天然疟原虫抗原的识别;酶联免疫斑点试验检测特异性鼠T淋巴细胞的活化及细胞因子的分泌;体外生长抑制试验检测免疫兔血清对恶性疟原虫生长的影响。结果 ***-1蛋白表达量约为菌体总蛋白的30%,浓度为1.5 mg/ml,纯度可达95%左右,等电点为5.0;内毒素残留量均小于2.5 EU/mg,宿主蛋白残留量为0.08%,N-末端氨基酸序列正确;可与相应鼠单抗特异性结合;免疫小鼠血清抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,20及30μg剂量组在末次免疫后,血清抗体滴度均可达1∶1 031 707;各免疫组小鼠血清均能识别恶性疟原虫天然抗原,且呈抗原剂量依赖性;10、20和30μg剂量组能刺激相应特异性脾淋巴细胞显著增殖(P蛋白理化性质稳定,具有较强的免疫原性,能激发可持续、高滴度的特异性抗体,并能诱发显著的T细胞应答,是极具潜力的候选疫苗蛋白,具有较好的开发前景。

关键词： M.RCAg-1蛋白多表位蛋白疟疾疫苗

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响

引用

中国生物制品学杂志 2016年第3期29卷 231-236,241页

作者：李军丽黄香玉朱传智宋庆德肖漓高钰何秀云解放军第三〇九医院器官移植与免疫调节北京市重点实验室北京100091 西南大学生命科学学院重庆400715

目的探讨不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响。方法制备多表位融合蛋白TP15,分别以MF59和h BCG单独或联合作为佐剂,经皮下或肌肉注射BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗TP15特异性Ig G、Ig G1和I... 详细信息

目的探讨不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响。方法制备多表位融合蛋白TP15,分别以MF59和h BCG单独或联合作为佐剂,经皮下或肌肉注射BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗TP15特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体,流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中多功能CD4^+T细胞含量,夹心ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中细胞因子IL-1β和IL-12的含量。结果多表位融合蛋白TP15免疫小鼠只产生抗TP15特异性Ig G和Ig G1抗体,不产生Ig G2a抗体。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂,皮下注射和肌肉注射均能显著提高机体抗TP15特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体水平,且复合佐剂MF59+h BCG的免疫效果更佳。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂,皮下注射较肌肉注射更有利于产生Ig G2a抗体,其中复合佐剂MF59+h BCG疫苗免疫小鼠产生Ig G2a抗体的效果最佳,且Ig G1/Ig G2a值显著低于肌肉注射。MF59和h BCG单独或联合作为TP15抗原佐剂经皮下免疫小鼠,脾淋巴细胞IL-2^+CD4^+T细胞含量增加,IL-10^+CD4^+T细胞含量减少,腹腔巨噬细胞分泌IL-1β和IL-12水平增强。结论 MF59+h BCG复合佐剂诱导Th1型细胞免疫漂移,且皮下注射免疫效果优于肌肉注射。

关键词：结核病多表位蛋白复合佐剂 MF59 免疫途径

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猪A型口蹄疫病毒sIgA间接ELISA方法的建立

猪A型口蹄疫病毒sIgA间接ELISA方法的建立

引用

作者：罗虹甘肃农业大学

学位级别：硕士

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)主要引起偶蹄兽的口、蹄部出现水疱性疾病为特征的传染性疾病。黏膜分泌性IgA是黏膜免疫的主要效应因子。本研究以A型FMDV T细胞B细胞多表位肽(T,B cell multi-epitope peptides,TB)作为... 详细信息

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)主要引起偶蹄兽的口、蹄部出现水疱性疾病为特征的传染性疾病。黏膜分泌性IgA是黏膜免疫的主要效应因子。本研究以A型FMDV T细胞B细胞多表位肽(T,B cell multi-epitope peptides,TB)作为包被抗原,建立猪A型口蹄疫病毒sIgA间接ELISA方法,为评价多表位黏膜免疫疫苗提供配套的检测方法。*** sIgA间接ELISA检测抗原的制备及鼠抗猪IgA单抗的标记将已构建的T/B多表位重组表达质粒转化BL-21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达出多表位蛋白TB,经SDS-PAGE电泳检测分子量为45 kDa。经Western blot验证,TB蛋白具有良好的反应原性,经镍柱His标签亲和纯化后测定TB蛋白浓度为0.6mg/mL。用辣根过氧化物酶(HRP)标记试剂盒标记鼠抗猪IgA单克隆抗体,获得了鼠抗猪IgA-HRP酶标抗体。2.猪A型FMDV sIgA间接ELISA方法的建立分别以纯化的TB多表位蛋白、口蹄疫病毒AE蛋白、VP1蛋白和灭活病毒抗原作为包被抗原,以鼠抗猪IgA-HRP单克隆抗体为二抗,筛选间接ELISA的最佳条件。结果,最佳包被抗原是TB蛋白,包被浓度3.00μg/mL;最佳封闭液为10m M PBS配制的0.5%BSA;一抗1:2稀释37℃孵育45min;鼠抗猪IgA-HRP单克隆抗体稀释度为1:5000,作用条件为37℃30min,底物室温显色15min。通过计算40份阴性样品酶标仪OD读数的平均值(?X)和标准差(SD)确定阴阳性临界值为0.209;通过对90份A型FMDV感染发病猪的鼻拭子样品检测,敏感性为97.78%;针对A型、O型FMDV交叉感染情况,对84份O型FMDV感染猪鼻拭子样品进行检测,符合率为90.5%,且与猪流行性腹泻、猪瘟、猪圆环、猪繁殖与呼吸道综合征的特异性IgA抗体没有交叉反应。批内和批间重复性试验的变异系数介于1.27%.92%,表明该方法具有良好的可重复性。

关键词：口蹄疫多表位蛋白 sIgA ELISA

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：