随机组合多表位恶性疟疾疫苗***-1蛋白的纯化及鉴定

作     者：王健 孙成金 李莉莉 陈祥鹏 李军 王恒 张振龙 WANG Jian;SUN Cheng-jin;LI Li-li;CHEN Xiang-peng;LI Jun;WANG Heng;ZHANG Zhen-long

作者机构：北京生物制品研究所第四研究室北京100024 北京协和医学院基础学院病原生物学系北京100005 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2011年第24卷第12期

页      面：1391-1395,1399页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：863计划"疫苗与抗体工程"重大专项(2006AA02A224) "艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项(2008ZX10004-015) 

主　　题：M.RCAg-1蛋白 多表位蛋白 疟疾疫苗 

摘      要：目的纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗***-1蛋白,并进行各项鉴定。方法对BL21(DE3)-***-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的***-1蛋白进行各种理化性质鉴定;采用Western blot法检测其反应原性;以不同剂量的***-1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价;间接荧光免疫法(IFA)分析免疫血清对天然疟原虫抗原的识别;酶联免疫斑点试验检测特异性鼠T淋巴细胞的活化及细胞因子的分泌;体外生长抑制试验检测免疫兔血清对恶性疟原虫生长的影响。结果 ***-1蛋白表达量约为菌体总蛋白的30%,浓度为1.5 mg/ml,纯度可达95%左右,等电点为5.0;内毒素残留量均小于2.5 EU/mg,宿主蛋白残留量为0.08%,N-末端氨基酸序列正确;可与相应鼠单抗特异性结合;免疫小鼠血清抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,20及30μg剂量组在末次免疫后,血清抗体滴度均可达1∶1 031 707;各免疫组小鼠血清均能识别恶性疟原虫天然抗原,且呈抗原剂量依赖性;10、20和30μg剂量组能刺激相应特异性脾淋巴细胞显著增殖(P0.01)及分泌IFNγ和IL-4(P0.01),并能较好地抑制疟原虫体外生长。结论纯化的***-1蛋白理化性质稳定,具有较强的免疫原性,能激发可持续、高滴度的特异性抗体,并能诱发显著的T细胞应答,是极具潜力的候选疫苗蛋白,具有较好的开发前景。