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Immunogenicity of multi-epitope-based vaccine candidates administered with the adjuvant Gp96 against rabies

Virologica Sinica 2016年第2期31卷 168-175页

作者： Yange Niu Ye Liu Limin Yang Hongren Qu Jingyi Zhao Rongliang Hu Jing Li Wenjun Liu Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology Institute of Microbiology ChineseAcademy of Sciences Beijing 100101 China University of Chinese Academy of Sciences Beijing 100049 China Laboratory of Epidemiology and Key Laboratory of Jilin Province for Zoonosis Prevention and Control Veterinary Research Institute Academy of Military Medical Sciences Changchun 130122 China Beijing Center for Animal Disease Control and Prevention Chinese Veterinary Medical Association of Animal Clinic Branch Beijing 102629 China State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Veterinary Research Institute Chinese Academy of Agricultural Sciences Harbin 150001 China

Rabies, a zoonotic disease, causes > 55,000 human deaths globally and results in at least 500 million dollars in losses every year. The currently available rabies vaccines are mainly inactivated and attenuated vaccines, which have been linked with clinical diseases in animals. Thus, a rabies vaccine with high safety and efficacy is urgently needed. Peptide vaccines are known for their low cost, simple production procedures and high safety. Therefore, in this study, we examined the efficacy of multi-epitope-based vaccine candidates against rabies virus. The ability of various peptides to induce epitope-specific responses was examined, and the two peptides that possessed the highest antigenicity and conservation, i.e., AR16 and h PAB, were coated with adjuvant canineGp96 and used to prepare vaccines. The peptides were prepared as an emulsion of oil in water(O/W) to create three batches of bivalent vaccine products. The vaccine candidates possessed high safety. Virus neutralizing antibodies were detected on the day 14 after the first immunization in mice and beagles, reaching 5–6 IU/m L in mice and 7–9 IU/m L in beagles by day 28. The protective efficacy of the vaccine candidates was about 70%–80% in mice challenged by a virulent strain of rabies virus. Thus, a novel multi-epitope-based rabies vaccine with Gp96 as an adjuvant was developed and validated in mice and dogs. Our results suggest that synthetic peptides hold promise for the development of novel vaccines against rabies.

关键词：狂犬病疫苗 gp96 免疫原性多表位疫苗注射佐剂狂犬病病毒候选疫苗

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最低限度免疫定义基因表达的HCV多表位DNA疫苗对小鼠细胞免疫的诱导作用

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吉林大学学报（医学版） 2016年第6期42卷 1071-1075页

作者：辛桂杰朱海超李昊温剑平吉林大学第一医院肝胆胰内科吉林长春130021 吉林大学基础医学院法医学系吉林长春130021 吉林大学基础医学院遗传学系吉林长春130021

目的:探讨采用最低限度免疫定义基因表达法制备丙型肝炎病毒(HCV)多表位DNA疫苗的可行性,阐明该方法在疫苗领域可能的应用价值。方法:采用人工合成和PCR方法制备长度为1 346bp的含有CMV启动子、HCV 1b亚型多表位和牛生长激素(BCG)多聚... 详细信息

目的:探讨采用最低限度免疫定义基因表达法制备丙型肝炎病毒(HCV)多表位DNA疫苗的可行性,阐明该方法在疫苗领域可能的应用价值。方法:采用人工合成和PCR方法制备长度为1 346bp的含有CMV启动子、HCV 1b亚型多表位和牛生长激素(BCG)多聚腺苷酸序列的最低限度免疫定义基因表达DNA疫苗,命名为M-HCV-epi;同时制备结构基因被非HCV同源的DNA序列替换的相同长度DNA片段作为对照,命名为V-pcDNA3.1。12只ICQ小鼠随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6),分别采用M-HCV-epi DNA和V-pcDNA3.1DNA各20μg皮下注射。QRT-PCR法检测免疫后小鼠脾细胞中干扰素γ(IFN-γ)mRNA的表达水平;人工合成3个HCV 1b亚型表位多肽和1条对照多肽。用上述合成的多肽刺激免疫后小鼠脾细胞,ELISA法检测脾细胞刺激上清中IFN-γ水平。结果:与对照组比较,实验组小鼠脾细胞中IFN-γmRNA表达水平升高(1.50±0.18)倍(P多表位DNA疫苗可诱导细胞免疫反应,该方法在DNA疫苗领域可能具有应用价值。

关键词：最低限度免疫定义基因表达丙型肝炎病毒多表位 DNA疫苗干扰素γ

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移动式多表位小流量标准装置的研制

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计量与测试技术 2024年第3期51卷 42-44页

作者：徐峰吴克南京市计量监督检测院

南京某区在农村生活污水处理设施全覆盖项目中,安装了数千台的小口径电磁流量计,其中大部分都作为污水计量使用,并要求定期检定或校准。因此,该项目设计了一套移动式多表位小流量标准装置,并进行实验验证。实验证明:该装置可同时开展3... 详细信息

南京某区在农村生活污水处理设施全覆盖项目中,安装了数千台的小口径电磁流量计,其中大部分都作为污水计量使用,并要求定期检定或校准。因此,该项目设计了一套移动式多表位小流量标准装置,并进行实验验证。实验证明:该装置可同时开展3台同口径范围不超过DN(10~25)mm的1.0级及以下电磁流量计的检定和校准,且总功率不超过1kW。

关键词：移动式多表位流量标准装置

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人类寄生虫重组疫苗研究进展

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中国病原生物学杂志 2017年第5期12卷 476-479,483页

作者：张忠佩秦元华任一鑫余钢银戴晓冬郑莉莉张雪强崔昱大连医科大学寄生虫学教研室辽宁大连116044 辽宁师范大学门诊部

随着医学技术的不断发展,疫苗从问世到现在一直被认为是控制,预防和消除感染性疾病中最有效的措施之一。由于寄生虫独特的生物学特性,相对病毒和细菌而言它们更复杂,它们有着更丰富的基因组,多阶段的生活史和抗原的多样性,所以针对寄生... 详细信息

随着医学技术的不断发展,疫苗从问世到现在一直被认为是控制,预防和消除感染性疾病中最有效的措施之一。由于寄生虫独特的生物学特性,相对病毒和细菌而言它们更复杂,它们有着更丰富的基因组,多阶段的生活史和抗原的多样性,所以针对寄生虫病疫苗一直处于在研阶段。本文通过检索近几年国内外学者针对疟原虫、阿米巴、弓形虫、隐孢子虫等寄生虫病疫苗新的研究成果,总结了其中有可能成为新型候选疫苗位点的研究进展。

关键词：重组疫苗基因多表位综述

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Immune Potential of a Novel Multiple-epitope Vaccine to FMDV Type Asia 1 in Guinea Pigs and Sheep

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Virologica Sinica 2011年第3期26卷 190-197页

作者： Jun-jun Shao Jing-feng Wang Hui-yun Chang Ji-xing Liu College of Veterinary Medicine Gansu Agricultural University Lanzhou 730070 China＂ State key Laboratory of Veterinary Etiological Biology Key Laboratory of Animal Virology of Ministry of AgricultureLanzhou Veterinary Research Institute Chinese Academy of Agricultural Sciences Lanzhou 730046 China）

To develop a safe and efficient recombinant subunit vaccine to foot-and-mouth disease virus (FMDV) type Asia 1 in sheep, a tandem repeated multiple-epitope gene consisting of residues 137-160 and 197-211 of the VP1 gene of FMDV was designed and artificially synthesized. The biologically functional molecule, the ovine IgG heavy constant region (oIgG) as a protein carrier was introduced for design of the multiple-epitope recombinant vaccine and recombinant expression plasmids pET-30a-RE and pET-30a-RE-oIgG were successfully constructed. The recombinant proteins, RE and RE-oIgG, were expressed as a formation of inclusion bodies in E. coli. The immune potential of this vaccine regime in guinea pigs and sheep was evaluated. The results showed that IgG could significantly enhance the immune potential of antigenic epitopes. The recombinant protein RE-oIgG could not only elicit the high levels of neutralizing antibodies and lymphocytes proliferation responses in the vaccinated guinea pigs, but confer complete protection in guinea pigs against virus challenge. Although the recombinant protein RE could not confer protection in the vaccinated animals, it could delay the appearance of the clinical signs and reduce the severity of disease. Inspiringly, the titers of anti-FMDV neutralizing antibodies elicited in sheep vaccinated with RE-oIgG was significantly higher than that for the RE vaccination. Therefore, we speculated that this vaccine formulation may be a promising strategy for designing a novel vaccine against FMDV in the future.

关键词：重组亚单位疫苗口蹄疫病毒多表位绵羊免疫亚洲几内亚可再生能源

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WT1抗原多表位与热休克蛋白70刺激表位融合基因疫苗的构建、表达及免疫原性研究

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中国实验血液学杂志 2011年第2期19卷 485-490页

作者：田卫伟乔振华杨林花王宏伟覃艳红边思成山西医科大学第二医院血液科山西太原030001

本研究用基因工程方法构建一种由WT1抗原多表位与结核分枝杆菌热休克蛋白70(mHSP70)刺激表位组成的融合基因疫苗并检测其表达和病疫原性。根据文献资料,筛选WT1抗原有良好免疫原性的3个受HLA0201与1个受HLA2402限制性的细胞毒性T细胞(C... 详细信息

本研究用基因工程方法构建一种由WT1抗原多表位与结核分枝杆菌热休克蛋白70(mHSP70)刺激表位组成的融合基因疫苗并检测其表达和病疫原性。根据文献资料,筛选WT1抗原有良好免疫原性的3个受HLA0201与1个受HLA2402限制性的细胞毒性T细胞(CTL)表位及2个辅助性T细胞(Th)表位,加入通用外源性T细胞刺激表位Pan-DR-Th(PADRE)后,以不同的间隔序列相连,蛋白酶体切割软件优化多表位构成,合成1条由732 bp组成的多表位WT1基因片段,并插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中。通过PCR技术从结核分支杆菌基因组(mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mHSP70)中扩增包含mHSP70刺激表位的DNA片段,亚克隆至pcDNA3.1(+),测序正确后将含有多表位的WT1基因片段亚克隆入该载体上游,构建融合基因疫苗pcDNA3.1-WT1-mHSP70407-426。用RT-PCR方法检测该基因在293T细胞表达,并免疫C57BL/6小鼠,酶联免疫吸附斑点法(ELISPOT)检测该疫苗的细胞免疫学反应。结果表明:通过蛋白酶体切割工具PAPROC及NETCHOP3.1预测,复合多表位基因工程疫苗各表位可被正确裂解,PCR和酶切鉴定结果表明,构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-WT1-mHSP70407-426含有正确编码的融合基因片段,并在真核细胞获得了正确表达。将该基因疫苗免疫小鼠后,可诱导特异性的CTL应答。结论:成功构建含有WT1多表位与热休克蛋白70刺激表位融合基因疫苗。

关键词： WT1 热休克蛋白70 多表位基因疫苗

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水貂CDV-MEV二联多表位抗原的设计

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黑龙江畜牧兽医 2018年第5期 203-205,209,269,270页

作者：卞大伟辽宁省畜产品安全监察所

犬瘟热和水貂病毒性肠炎是在毛皮动物养殖业中广泛流行的两类急性、接触性传染病,病原分别是犬瘟热病毒（CDV）和水貂肠炎病毒（MEV）。疫苗接种是主要的预防手段。但当前市售MEV灭活苗更新速度慢、灭活剂致癌,不能诱导细胞免疫反应;CD... 详细信息

犬瘟热和水貂病毒性肠炎是在毛皮动物养殖业中广泛流行的两类急性、接触性传染病,病原分别是犬瘟热病毒（CDV）和水貂肠炎病毒（MEV）。疫苗接种是主要的预防手段。但当前市售MEV灭活苗更新速度慢、灭活剂致癌,不能诱导细胞免疫反应;CDV弱毒苗易受母源抗体干扰,存在一过性免疫抑制、返祖散毒等问题。

关键词：水貂肠炎病毒多表位犬瘟热病毒设计抗原接触性传染病细胞免疫反应动物养殖业

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绵羊痘病毒多表位基因的构建及原核表达

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华中农业大学学报 2015年第2期34卷 86-90页

作者：陈轶霞王明明龙玲邵忠伟刘俊林西北民族大学生命科学与工程学院兰州730124

通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头,串联合成1条全新的多表位... 详细信息

通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头,串联合成1条全新的多表位嵌合基因mE,将其克隆到原核表达载体pET-32中,采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒,构建pET32-mE质粒;用IPTG在不同条件下诱导表达,确定最佳表达条件,表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明,重组蛋白是分子质量为41ku的融合蛋白。在IPTG浓度为0.5mmol/L,温度为37℃、诱导4h时目的蛋白的表达量最大,约占菌体的32%。Western-blotting试验表明,目的蛋白可被羊痘血清识别。

关键词：绵羊痘病毒抗原表位多表位嵌合基因原核表达

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人乳头瘤病毒（HPV）16型单克隆抗体的性质鉴定及其在疫苗质量分析中的应用

人乳头瘤病毒（HPV）16型单克隆抗体的性质鉴定及其在疫苗质量分...

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作者：张彩厦门大学

学位级别：硕士

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是已确证可导致人类癌症的病原体,持续感染HPV16等高危亚型会引起宫颈癌、口腔癌、直肠癌等癌症的发生。HPV16的主要衣壳蛋白L1可在体外自组装成为病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),VLP高度... 详细信息

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是已确证可导致人类癌症的病原体,持续感染HPV16等高危亚型会引起宫颈癌、口腔癌、直肠癌等癌症的发生。HPV16的主要衣壳蛋白L1可在体外自组装成为病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),VLP高度模拟天然病毒的表面结构,具备刺激机体产生免疫反应的能力,且因不含有病毒核酸而具备良好的安全性。因此,开发基于HPV16L1 VLP的疫苗具有极大的潜力和应用价值。目前,已上市的预防性HPV疫苗有三种,有效降低了 HPV病毒的感染和宫颈癌等癌症的发生,疫苗抗原刺激机体产生的中和抗体被认为是预防性疫苗的主要作用机制。疫苗的安全性和有效性是保证疫苗发挥保护作用的前提条件,因此,建立针对疫苗的质量分析方法对疫苗的研发、生产及免疫效果评估等具有重要意义。本研究旨在建立HPV16VLP疫苗的多表位免疫化学质量分析体系,利用多个识别抗原不同表位的单克隆抗体从多角度全方面的对疫苗抗原进行监控,为HPV16 VLP疫苗的生命周期管理提供科学依据和保证,也为其他VLP疫苗质量分析体系的建立提供思路。首先,对HPV16L1VLP的鼠源单克隆细胞株进行了生产,经过纯化后共获得27株单克隆抗体,并对这些抗体的型别特异性、抗体亚类、与抗原的结合能力、对抗原构象变化的敏感性及假病毒中和活性等性质进行了分析和鉴定。其次,在对各单抗的性质有一定了解的基础上,筛选出10株代表性单抗进行单抗相互阻断及人血清阻断实验,并通过SPSS分析软件对单抗的相互阻断信息及与人血清阻断的信息进行聚类分析,将单抗依据不同的结合表位区分为了 5类。然后综合考虑单抗的性质鉴定信息,从5个表位区内进一步筛选出6株可能识别不同免疫优势表位的单抗用于HPV16疫苗的免疫化学质量分析。将上述筛选出的单抗用于构建基于无分子标记的表面等离子法(SPR法),基于抗原“溶液中”竞争的ELISA法(rIC50法)以及基于双表位检测的双抗夹心ELISA法(rECso法)。通过对各实验的实验条件进行摸索优化并对实验的灵敏度和有效性进行考察,最终建立了基于6株单抗的SPR法、基于5株单抗的rIC50法和基于2株单抗的rEC50法,经验证,基于各单抗建立的三种质量分析方法均具有良好的重现性和稳健性。最后,本研究应用建立的免疫化学质量分析方法对本实验室与厦门万泰沧海生物技术有限公司联合研制的HPV16VLP疫苗的免疫效果进行了评价并对疫苗生产工艺的改变进行了可比性分析。研究中,考察了疫苗抗原的发酵规模从100 L放大至500 L后的疫苗抗原性的变化情况。通过建立的SPR法和rIC50法对放大前后的疫苗抗原进行分析,发现发酵规模放大后的疫苗批次与对照疫苗的一致性良好,疫苗的免疫原性未发生明显变化。综上所述,本研究获得了针对HPV16L1VLP的单克隆抗体盘,通过对单抗各项性质的分析鉴定和对单抗表位识别区的聚类分析,最终筛选出了代表性单抗作为疫苗抗原定量分析工具,建立了 HPV16VLP疫苗的多表位免疫化学质量分析体系,并将建立的疫苗质量分析方法应用于HPV16 VLP疫苗的免疫效果评价及生产工艺的可比性分析研究中。这种多表位正交非重叠的免疫化学质量分析系统的建立,为HPV16疫苗的安全性和有效性提供了保障,为疫苗的体外相对效价评估奠定了基础,也为其它VLP疫苗的质量分析系统的建立提供了借鉴模式。

关键词： HPV16重组病毒样颗粒多表位疫苗质量分析

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多表位直流电能表自动检定装置的研制

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电气技术 2019年第2期20卷 53-56,63页

作者：韩海安程昱舒国网山西省电力公司计量中心太原030032

为满足日益增长的分布式直流电源、直流负荷及直流电能检定的需求,本文研制了一种多表位直流电能表自动检定装置。文中讲述了检定原理、硬件设计和软件设计,并对检定装置进行了重复性试验、稳定性试验和测量不确定度评定。试验结果表明... 详细信息

为满足日益增长的分布式直流电源、直流负荷及直流电能检定的需求,本文研制了一种多表位直流电能表自动检定装置。文中讲述了检定原理、硬件设计和软件设计,并对检定装置进行了重复性试验、稳定性试验和测量不确定度评定。试验结果表明,该检定装置量值稳定、精度高,检定结果符合国家相关检定规程要求,具有广泛的应用前景。

关键词：多表位直流电能表自动检定

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