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多穗柯无色花青素还原酶基因的克隆及其表达与根皮苷含量的相关性分析

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中草药 2020年第12期51卷 3292-3297页

作者：朱金丽王卓王志焱张妍彤黄剑邢朝斌华北理工大学生命科学学院河北唐山063210 华北理工大学药学院河北唐山063210 百色学院农业与食品工程学院广西百色533000

目的克隆多穗柯Lithocarpus polystachyus的无色花青素还原酶(leucoanthocyanidin reductase,LAR)基因,并对其表达量与根皮苷含量的关系进行分析。方法根据多穗柯转录组测序的结果(Unigene号:DN30711_c0_g1_i1),利用PCR法扩增获得多穗柯LAR基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测LAR基因的表达量,使用UPLC法测定根皮苷的含量,应用SPSS 18.0软件分析LAR基因表达量与根皮苷含量间的相关关系。结果多穗柯LAR基因的cDNA全长1053 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码350个氨基酸。该蛋白不存在跨膜区域,定位于细胞质中。多穗柯LAR蛋白属于PCBER_SDR_a家族,与栓皮栎LAR蛋白具有较高的相似性(95%),且亲缘关系最近。多穗柯的根皮苷含量与LAR基因的表达量呈正相关(P多穗柯LAR基因,并证实多穗柯根皮苷含量与LAR基因的表达量呈正相关,为揭示多穗柯中根皮苷的生物合成机制奠定理论和技术基础。

关键词：多穗柯无色花青素还原酶克隆根皮苷表达

多穗柯转录组分析及黄酮类化合物合成相关基因的挖掘

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中国中药杂志 2017年第4期42卷 675-679页

作者：宋菊黄剑李志栋龙月红邢朝斌华北理工大学生命科学院河北唐山063000 百色学院农业与食品工程学院广西百色533000

多穗柯具有甜味和保健功效,其中黄酮类化物是主要活性物质。为获取多穗柯转录组数据库以及黄酮类化合物生物合成相关基因,该研究用RNA-Seq中的Illumina Hi Seq 4000对多穗柯嫩叶进行转录组测序,共获得6 Gb数据,拼接后得到41 043条Unige... 详细信息

多穗柯具有甜味和保健功效,其中黄酮类化物是主要活性物质。为获取多穗柯转录组数据库以及黄酮类化合物生物合成相关基因,该研究用RNA-Seq中的Illumina Hi Seq 4000对多穗柯嫩叶进行转录组测序,共获得6 Gb数据,拼接后得到41 043条Unigene,与7个基因数据库进行比对,可归类于51个GO分类中,涉及到237个KEGG标准代谢通路。找到黄酮合成相关基因28条。通过Micro Satallite(MISA)软件分析筛选到18 161个SSR,其中单碱基重复最丰富,有7 346个。此研究得到大量转录本信息,为多穗柯的分子生物学研究提供了宝贵的转录组数据库资源。

关键词：多穗柯转录组高通量测序黄酮类化合物

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多穗柯查耳酮异构酶基因的克隆与序列分析

中草药 2017年第24期48卷 5080-5084页

作者：林丽梅龙月红冯若宣尹峰黄剑邢朝斌华北理工大学生命科学学院河北唐山063210 百色学院农业与食品工程学院广西百色533000

目的克隆多穗柯的查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)基因,并了解其表达情况。方法根据转录组测序结果,利用PCR扩增技术获取多穗柯CHI基因的c DNA全长,并对其进行生物信息学分析,采用qRT-PCR法检测CHI基因在多穗柯不同器官的表达量... 详细信息

目的克隆多穗柯的查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)基因,并了解其表达情况。方法根据转录组测序结果,利用PCR扩增技术获取多穗柯CHI基因的c DNA全长,并对其进行生物信息学分析,采用qRT-PCR法检测CHI基因在多穗柯不同器官的表达量。结果多穗柯CHI基因的c DNA全长为772 bp,开放阅读框长为696 bp,编码231个氨基酸的蛋白。该蛋白不存在跨膜区域,定位于细胞质中。多穗柯CHI基因在不同部位均有表达,叶片的表达量最高,是根部最低量的9.75倍。结论首次克隆获得多穗柯的CHI基因,明确该基因属于CHI II型。且多穗柯CHI基因在各器官中的表达量具有显著差异。

关键词：多穗柯查耳酮异构酶克隆 qRT-PCR 生物信息学分析

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多穗柯化学成分研究

中药材 2010年第4期33卷 549-551页

作者：李胜华伍贤进杨青丹陈原阳周楠民族药用植物资源研究与利用湖南重点实验室/湘西药用植物与民族植物学湖南省高校重点实验室/怀化学院生命科学系湖南怀化418028

目的:研究多穗柯的化学成分。方法:对多穗柯的化学成分进行提取和分离纯化,并通过理化数据及波谱分析鉴定化合物结构。结果:从多穗柯的醇提物中分离出9个化合物,分别是:根皮苷(Ⅰ)、根皮素(Ⅱ)、二氢查尔酮-2′--βD-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)... 详细信息

目的:研究多穗柯的化学成分。方法:对多穗柯的化学成分进行提取和分离纯化,并通过理化数据及波谱分析鉴定化合物结构。结果:从多穗柯的醇提物中分离出9个化合物,分别是:根皮苷(Ⅰ)、根皮素(Ⅱ)、二氢查尔酮-2′--βD-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)、胡萝卜苷(Ⅳ)、β-谷甾醇(Ⅴ)、槲皮素(Ⅵ)、木犀草素(Ⅶ)、槲皮苷(Ⅷ)及齐墩果酸(Ⅸ)等9种化合物。结论:除化合物Ⅰ和Ⅲ外均为首次从该植物中分离。

关键词：多穗柯化学成分

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多穗柯中总黄酮的体内和体外抗氧化研究

中国药学杂志 2014年第9期49卷 731-735页

作者：李胜华伍贤进曾军英民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室怀化学院生命科学系湖南怀化418008

目的探讨多穗柯叶中总黄酮的体内和体外抗氧化活性。方法多穗柯叶中总黄酮以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基的清除、还原能力和氧化自由基吸收能力4种体外抗氧化活性方法测定多穗柯叶中总... 详细信息

目的探讨多穗柯叶中总黄酮的体内和体外抗氧化活性。方法多穗柯叶中总黄酮以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基的清除、还原能力和氧化自由基吸收能力4种体外抗氧化活性方法测定多穗柯叶中总黄酮的抗氧化活性。体内抗氧化采用四氯化碳肝损伤小鼠模型测定多穗柯叶中的总黄酮提取物的体内抗氧化活性。结果在1.0 mg·mL-1时,多穗柯叶中总黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基的清除率分别为81.25%、85.54%,还原力比维生素C要弱,比芦丁要强,多穗柯叶中总黄酮能明显提高四氯化碳肝损伤小鼠中肝、肾组织中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力和还原型谷胱甘肽含量,并且降低丙二醛的含量。结论表明多穗柯具有明显的抗氧化活性。

关键词：多穗柯黄酮抗氧化体外和体内

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微波辅助提取多穗柯嫩叶黄酮工艺研究

农业工程学报 2007年第2期23卷 213-217页

作者：董华强宁正祥崔志新李琳于立静林丽超华南理工大学轻工与食品学院广州510641 佛山科学技术学院食品科学系佛山528231

该研究比较了微波辅助水提(MW)、微波辅助氢氧化钙溶液提取(MCW)、水提(W)、氢氧化钙溶液提取(CW)、乙醇回流(E)和甲醇回流(Me)等工艺提取多穗柯黄酮的效果,用正交设计筛选MCW工艺条件,并对材料预煮与微波处理时间的关系、氢氧化钙溶液... 详细信息

该研究比较了微波辅助水提(MW)、微波辅助氢氧化钙溶液提取(MCW)、水提(W)、氢氧化钙溶液提取(CW)、乙醇回流(E)和甲醇回流(Me)等工艺提取多穗柯黄酮的效果,用正交设计筛选MCW工艺条件,并对材料预煮与微波处理时间的关系、氢氧化钙溶液浓度对提取效果的影响进行了探讨。结果表明,MCW提取效果明显优于W、CW、MW和E或Me;材料预煮和适当的氢氧化钙浓度可以明显提高MCW黄酮提取效果;研究得出的最佳工艺条件为:1.2%氢氧化钙水溶液,固液比1∶12,预煮时间5min,高档功率微波处理25min。此工艺提取率达到96%,提取物黄酮含量达到37%,是一种高效、无污染的提取多穗柯黄酮工艺。

关键词：微波多穗柯黄酮提取

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多穗柯黄酮3-羟化酶基因的克隆与序列分析

中草药 2017年第24期48卷 5085-5089页

作者：尹峰龙月红冯若宣林丽梅黄剑邢朝斌华北理工大学生命科学学院河北唐山063210 百色学院农业与食品工程学院广西百色533000

目的克隆多穗柯Lithocarpus polystachyus黄酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因,了解其基因特征并初步探明其在各器官中的表达情况。方法分别提取多穗柯叶片的总RNA及基因组DNA,根据转录组测序结果,设计特异性引物,PCR扩增得... 详细信息

目的克隆多穗柯Lithocarpus polystachyus黄酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因,了解其基因特征并初步探明其在各器官中的表达情况。方法分别提取多穗柯叶片的总RNA及基因组DNA,根据转录组测序结果,设计特异性引物,PCR扩增得到多穗柯F3H基因的c DNA及DNA序列,测序后进行生物信息学分析,通过qRT-PCR法检测多穗柯F3H基因在不同器官中的表达情况。结果多穗柯F3H基因c DNA全长1 340 bp,包含长1 092 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸的蛋白质,定位于细胞质中。qRT-PCR结果表明F3H基因在多穗柯各器官中均有表达,但表达量具有显著性差异(P多穗柯F3H基因进行了克隆和生物信息学分析,证实F3H基因在多穗柯不同器官中表达量差异显著,为多穗柯中黄酮类的次生代谢研究奠定了基础。

关键词：多穗柯黄酮3-羟化酶克隆生物信息 qRT-PCR 表达分析

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多穗柯总黄酮提取工艺及其含量动态变化研究

食品科学 2008年第6期29卷 139-141页

作者：李胜华伍贤进郁建平李思源韩永光湖南怀化学院生物工程系湖南怀化418008 贵州大学生化营养研究所贵州贵阳550025

目的:探讨多穗柯总黄酮的提取工艺及含量动态变化。方法:以怀化产多穗柯为原料,采取乙醇为溶剂超声波辅助提取,以L9(34)正交试验方法优化总黄酮提取工艺,然后在该工艺条件下对自然存放时间不同、采摘季节不同、不同叶的多穗柯原料进行... 详细信息

目的:探讨多穗柯总黄酮的提取工艺及含量动态变化。方法:以怀化产多穗柯为原料,采取乙醇为溶剂超声波辅助提取,以L9(34)正交试验方法优化总黄酮提取工艺,然后在该工艺条件下对自然存放时间不同、采摘季节不同、不同叶的多穗柯原料进行总黄酮含量的动态变化考察。结果:乙醇体积分数对总黄酮提取量有显著影响,提取温度对总黄酮提取量有影响;多穗柯自然存放时间越长,总黄酮含量越低,平均每年下降24.74%;不同季节采摘的多穗柯其总黄酮含量以8～10月最高;经对怀化多穗柯嫩叶和老叶中总黄酮的提取测定表明,多穗柯中嫩叶总黄酮含量最高,二年生最低。结论:以原料35倍量的70%乙醇作为溶剂,在提取功率600W、提取时间15min的条件下,即可获得多穗柯总黄酮最佳提取效果;8～10月采摘嫩叶存放时间越短,总黄酮含量越高。

关键词：多穗柯黄酮类化合物提取工艺含量动态变化

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多穗柯中黄酮类物质提取工艺的研究

食品科学 2004年第5期25卷 112-115页

作者：肖坤福廖晓峰催艳娟任春生东华理工学院应用化学系江西抚州344000

该文研究了水提法、传统的醇回流法提取多穗柯叶中总黄酮类化合物的提取工艺,并使用正交试验确定了最佳提取条件。试验结果表明:最佳提取条件为A2B3C2:即用25倍量80%的乙醇连续回流提取2h。

关键词：多穗柯黄酮类物质提取工艺水提法醇回流法