检索结果-南通市图书馆

作者：曹蕾武汉大学

学位级别：硕士

NJ7G＿0991是极端嗜盐古菌Natrinema gari J7-2的一种Sec依赖性途径分泌的蛋白,其在胞外组分中有较高丰度。实验室前期通过生物信息学分析发现,该蛋白具有一个类似Lol A的结构域,而Lol A在大肠杆菌脂蛋白转运定位系统中起重要作用。前... 详细信息

NJ7G＿0991是极端嗜盐古菌Natrinema gari J7-2的一种Sec依赖性途径分泌的蛋白,其在胞外组分中有较高丰度。实验室前期通过生物信息学分析发现,该蛋白具有一个类似Lol A的结构域,而Lol A在大肠杆菌脂蛋白转运定位系统中起重要作用。前期研究发现菌株J7-2的NJ7G＿0991的Lol A结构域缺失突变株的细胞形态由杆状变成圆形。而将NJ7G＿0991在大肠杆菌中表达时,该蛋白大部分分布在培养液胞外组分中。为了研究NJ7G＿0991的Lol A结构域的功能,我们分别构建NJ7G＿0991缺失信号肽和C端结构域的两个突变体并在大肠杆菌中诱导表达后,发现NJ7G＿0991ΔC与NJ7G＿0991一样,大量表达至胞外组分中,而NJ7G＿0991ΔS积累在全细胞组分中;表达具有Lol A结构域并保留信号肽的突变体NJ7G＿0991ΔC的菌株与转入空载质粒p ET26b的菌株相比对溶菌酶耐受度明显降低,显微镜下观察到大部分细胞形态变圆,而表达无信号肽的突变体NJ7G＿0991ΔS的菌株细胞形态无明显变化。说明表达NJ7G＿0991会对细胞外膜造成损伤,Lol A结构域在其中扮演了重要角色。我们推测该蛋白可能对大肠杆菌外膜脂蛋白转运系统造成干扰,而导致外膜完整性受损,使NJ7G＿0991与周质空间的部分蛋白分布在细胞外,这意味着NJ7G＿0991的Lol A结构域也可能在嗜盐古菌的外被完整性的维持中发挥重要作用。我们依据NJ7G＿0991对大肠杆菌外膜造成有限损伤的特性,使用具有双启动子和多克隆位点的质粒p ETDuet-1构建了NJ7G＿0991与蛋白酶WF146的共表达质粒(p D16和p D61),以建立大肠杆菌中的渗漏表达系统,提升蛋白酶的胞外表达量,从而更利于对目的蛋白的收集利用。产透明圈结果显示,转入NJ7G＿0991和WF146的共表达质粒的转化子产生胞外WF146的量高于单独表达蛋白酶WF146的转化子。该渗漏表达系统有望在工业化生产等领域提高蛋白的生产效率,更便利地获取目的蛋白。并为嗜盐古菌中细胞膜完整性的维持机制提供了新的信息。

关键词：嗜盐古菌脂蛋白细胞形态外膜完整性共表达

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tolB和tolR基因缺失对鼠伤寒沙门菌生物学功能的影响

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中国兽医科学 2022年第11期52卷 1422-1429页

作者：费霞田一辰黄山周国栋李权石火英扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

Tol-Pal系统是一种由TolQ、TolR、TolA、TolB和Pal五种包膜蛋白组成的多蛋白复合体,在维持革兰氏阴性菌外膜完整性方面发挥关键作用。这些蛋白质首先在大肠杆菌中被发现,随后在很多其他细菌属中被鉴定到,但Tol-Pal系统在鼠伤寒沙门菌(Sa... 详细信息

Tol-Pal系统是一种由TolQ、TolR、TolA、TolB和Pal五种包膜蛋白组成的多蛋白复合体,在维持革兰氏阴性菌外膜完整性方面发挥关键作用。这些蛋白质首先在大肠杆菌中被发现,随后在很多其他细菌属中被鉴定到,但Tol-Pal系统在鼠伤寒沙门菌(Salm onella Typhimurium)中的作用尚不十分清楚。本研究评估了Tol-Pal系统中的TolB和TolR蛋白在鼠伤寒沙门菌χ3761表型和生物学中的作用。结果显示,tol B和tolR缺失株显著降低了χ3761的运动能力,tolB和tolR缺失株菌体呈现球形和长链状,此外还发现菌体表面存在鞭毛缺失和囊泡凸起的微观变化,证实tolB和tolR的缺失对细胞壁造成了严重的破坏。结果表明,tolB和tolR缺失株均显著降低了鼠伤寒沙门菌在脱氧胆酸钠作用下的存活率,并对万古霉素表现出高度敏感性,这可能是由于包膜完整性受到破坏所致。进一步的研究表明,tolB和tolR基因均参与外膜囊泡(OMVs)的产生。综上所述,这项研究扩展了我们对鼠伤寒沙门菌Tol-Pal系统生物学功能的认识。

关键词： Tol-Pal系统 tolB tolR 鼠伤寒沙门菌外膜完整性 OMVs

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鼠伤寒沙门菌tolA缺失株的构建及生物学功能研究

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畜牧与兽医 2021年第12期53卷 92-98页

作者：王楚屠润妍费霞田一辰李权石火英扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了研究tolA基因在鼠伤寒沙门菌外膜完整性及外膜囊泡(OMVs)形成中的作用,通过自杀载体介导的同源重组技术,构建鼠伤寒沙门菌χ3761的tolA基因缺失株ΔtolA。通过比较鼠伤寒沙门菌野生株χ3761与缺失株ΔtolA的生物学特性,发现敲除tol... 详细信息

为了研究tolA基因在鼠伤寒沙门菌外膜完整性及外膜囊泡(OMVs)形成中的作用,通过自杀载体介导的同源重组技术,构建鼠伤寒沙门菌χ3761的tolA基因缺失株ΔtolA。通过比较鼠伤寒沙门菌野生株χ3761与缺失株ΔtolA的生物学特性,发现敲除tolA基因对χ3761的生长特性没有显著影响。革兰染色镜检发现,χ3761形态正常,为革兰阴性、两端钝圆的短杆菌,而ΔtolA形态发生明显改变,多呈球形或短链状,透射电镜观察发现ΔtolA菌体周围有许多OMVs分泌,暗示tolA基因影响OMVs的形成。另外,tolA基因缺失后,χ3761的运动能力和存活能力均显著下降;密度梯度离心后提取OMVs检测发现缺失株OMVs的产量显著增加且鞭毛明显减少。本研究为揭示鼠伤寒沙门菌的致病机制及OMVs的疫苗开发提供理论参考。

关键词：鼠伤寒沙门菌 tolA基因外膜囊泡外膜完整性

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