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Collybistin对神经病理性疼痛的调控作用

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中国药理学通报 2022年第11期38卷 1711-1716页

作者：韦佳丁韶丽高学明张雅敏吴树金孙延庆甘肃省人民医院功能科甘肃兰州730000 甘肃中医药大学中西医结合学院甘肃兰州730000

目的探讨collybistin在痛觉调控中的作用。方法利用免疫组织染色,观察collybistin在脊髓中的分布;利用行为学实验,评估collybistin在痛觉传递中的作用;利用电生理实验,研究collybistin对抑制性突触传递的影响。结果Collybistin分布于脊... 详细信息

目的探讨collybistin在痛觉调控中的作用。方法利用免疫组织染色,观察collybistin在脊髓中的分布;利用行为学实验,评估collybistin在痛觉传递中的作用;利用电生理实验,研究collybistin对抑制性突触传递的影响。结果Collybistin分布于脊髓神经元中;通过转染针对collybistin的shRNA(shRNA-collybistin),发现shRNA-collybistin能够诱发正常小鼠的痛觉敏化(P外周神经损伤诱发的痛觉敏化(P神经元中的微小抑制性突触后电流(miniature inhibitory postsynaptic currents;mIPSCs)的幅值和频率(P外周神经损伤对mIPSCs的降低作用(P外周神经损伤诱发小鼠痛觉敏化的过程。

关键词：外周神经损伤 collybistin 脊髓痛觉敏化突触传递突触后电位

脊髓小胶质细胞中释放ATP的SWELL1通道参与神经病理性疼痛

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中国疼痛医学杂志 2023年第9期29卷 641-644页

作者： Chu J Yang J Zhou Y 杨亚如(译) 高永静(校) 不详南通大学特种医学研究院/疼痛医学研究院

外周神经损伤后,细胞外三磷酸腺苷(ATP)介导的嘌呤能信号对脊髓小胶质细胞激活和神经病理性疼痛至关重要。然而,ATP释放的机制仍然知之甚少。该研究发现体积调控阴离子通道(volume-regulated anion channel,VRAC)是一个ATP释放通道,在... 详细信息

外周神经损伤后,细胞外三磷酸腺苷(ATP)介导的嘌呤能信号对脊髓小胶质细胞激活和神经病理性疼痛至关重要。然而,ATP释放的机制仍然知之甚少。该研究发现体积调控阴离子通道(volume-regulated anion channel,VRAC)是一个ATP释放通道,在小胶质细胞中被炎症介质鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)激活。SWELL1(也称为Lrrc8a)是VRAC必需的亚基,小鼠小胶质细胞特异性敲除Swell1减少了由周围神经损伤引起的脊髓细胞外ATP增加。而且,基因敲除小鼠还表现出脊髓小胶质细胞活化减少、背角神经元过度兴奋下降、诱发的和自发的神经病理性疼痛样行为下降。该研究通过高通量筛选确定了一个FDA批准的药物—双香豆素作为一种新型有效的VRAC抑制剂。鞘内给予双香豆素减轻了小鼠神经损伤引起的机械性触诱发痛。该研究证明脊髓中小胶质细胞释放ATP的VRAC是神经病理性疼痛的关键因素,也是治疗这种疾病的潜在靶点。

关键词：神经病理性疼痛小胶质细胞细胞外ATP 双香豆素周围神经损伤外周神经损伤高通量筛选炎症介质

根治性前列腺切除术中应用荧光成像技术定位神经血管束的研究进展

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中华泌尿外科杂志 2022年第10期43卷 797-800页

作者：张展奕张树栋北京大学第三医院泌尿外科北京100191

保留勃起功能是根治性前列腺切除术的重要目标。由于与勃起功能密切相关的神经血管束难以被识别和定位,在术中易受到损伤,患者术后勃起功能障碍的发生率较高。神经电刺激、超声和MRI等手段在术中实时定位神经血管束时均有较大局限性。... 详细信息

保留勃起功能是根治性前列腺切除术的重要目标。由于与勃起功能密切相关的神经血管束难以被识别和定位,在术中易受到损伤,患者术后勃起功能障碍的发生率较高。神经电刺激、超声和MRI等手段在术中实时定位神经血管束时均有较大局限性。荧光成像技术在外科手术导航应用研究中的不断深入为实现神经血管束的术中实时可视化提供了可能。目前,国际上已有众多针对轴突、髓鞘、神经束膜和滋养血管等神经内部结构的荧光显像剂,它们在与神经的亲和力和成像效果上各具特点。已有部分亲脂性小分子、恶嗪类染料和多肽-染料偶联物在啮齿类动物体内或人离体标本中实现了对前列腺周围自主神经的成像,非特异性神经血管染料吲哚菁绿已在临床上被用于辅助保留性神经的根治性前列腺切除术。本文对荧光神经成像技术和其在根治性前列腺切除术中用于实时定位神经血管束的相关研究作一综述。

关键词：前列腺切除术生物光学成像外周神经损伤勃起功能障碍手术导航系统

脂肪间充质干细胞来源外泌体对施万细胞增殖功能及早期神经再生特征影响的研究

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解放军医学院学报 2023年第6期44卷 694-699页

作者：任致奇尚爱加杨博尧柏钧贾志博刘修志王玉解放军医学院北京100853 解放军总医院第一医学中心神经外科北京100853 解放军总医院第四医学中心骨科医学研究所北京100853

背景施万细胞是神经系统的重要构成部分,为促进轴突再生和诱导靶神经再生提供必要的信号和空间线索。脂肪间充质干细胞来源广泛,在再生医学方向效果明确,外泌体作为神经系统细胞间的重要信息媒介,在调节再生方面发挥着重要作用。目的探... 详细信息

背景施万细胞是神经系统的重要构成部分,为促进轴突再生和诱导靶神经再生提供必要的信号和空间线索。脂肪间充质干细胞来源广泛,在再生医学方向效果明确,外泌体作为神经系统细胞间的重要信息媒介,在调节再生方面发挥着重要作用。目的探索脂肪间充质干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cells-derived exosomes,ADSCs-exos)对施万细胞增殖功能及早期神经再生特征的影响。方法提取ADSCs-exos进行鉴定;利用显微镜和流式细胞学对ADSCs鉴定,通过超速离心法提取ADSCs来源外泌体并通过透射电镜拍摄图片;将ADSCs-exos与大鼠施万细胞进行直接共培养,观察ADSCs-exos对施万细胞增殖的影响;取雌性SD大鼠8只,Matrigel基质胶搭载ADSCs-exos注入商用硅胶管构建神经移植物为外泌体组,Matrigel搭载PBS注入商用硅胶管为空导管组(Hollow),每组4只。构建坐骨神经1 cm缺损模型,将神经移植物缝合于近端和远端神经残端之间,缝合伤口后放回笼中安置。3周取出神经移植物评价轴突再生情况。结果成功提取ADSCs,能够表达间充质干细胞表面标记蛋白CD73、CD90、CD105。成功提取ADSCs-exos,能在透射电镜下观察到磷脂双分子层结构。在ADSCs-exos和施万细胞共培养体系中,比较24 h和48 h施万细胞增殖情况,施万细胞增殖与ADSCsexos浓度呈剂量依赖性。动物实验结果表明,外泌体组3周时轴突生长优于Hollow组(P神经移植物的轴突生长长度在3周时即具有优势。

关键词：外周神经损伤脂肪来源干细胞外泌体修复施万细胞

脂肪间充质干细胞来源外泌体对雪旺细胞增殖功能及早期神经再生特征影响的研究

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解放军医学院学报 2023年

作者：任致奇尚爱加杨博尧柏钧贾志博刘修志王玉解放军总医院第四医学中心骨科医学研究所解放军医学院解放军总医院第一医学中心神经外科

背景雪旺细胞是神经系统的重要构成部分，为促进轴突再生和诱导靶神经再生提供必要的信号和空间线索。脂肪间充质干细胞来源广泛，在再生医学方向效果明确，外泌体作为神经系统细胞间的重要信息媒介，在调节再生方面发挥着重要作用。目... 详细信息

背景雪旺细胞是神经系统的重要构成部分，为促进轴突再生和诱导靶神经再生提供必要的信号和空间线索。脂肪间充质干细胞来源广泛，在再生医学方向效果明确，外泌体作为神经系统细胞间的重要信息媒介，在调节再生方面发挥着重要作用。目的探索脂肪间充质干细胞来源外泌体（adipose-derived stem cells-derived exosomes,ADSCs-exos）对雪旺细胞增殖功能及早期神经再生特征研究。方法提取ADSCs-exos进行鉴定；利用显微镜和流式细胞学对ADSCs鉴定，通过超速离心法提取ADSCs来源外泌体并通过透射电镜拍摄图片；将ADSCs-exos与大鼠雪旺细胞进行直接共培养，观察ADSCsexos对雪旺细胞增殖的影响；取雌性SD大鼠8只，matrigel基质胶搭载ADSC-exos注入商用硅胶管构建神经移植物，为外泌体组；matrigel搭载PBS注入商用硅胶管，为空导管组(Hollow)，每组4只。构建坐骨神经1cm缺损模型，将神经移植物缝合于近端和远端神经残端之间，缝合伤口后放回笼中安置。3周取出神经移植物评价轴突再生情况。结果成功提取ADSCs，能够表达间充质干细胞表面标记蛋白CD73、CD90、CD105。成功提取ADSCs-exos，能在透射电镜下观察到磷脂双分子层结构。在ADSCs-exos和雪旺细胞共培养体系中，比较24 h和48 h雪旺细胞增殖情况，雪旺细胞增殖情况与ADSCexos浓度呈剂量依赖性。动物实验结果表明，外泌体组三周时轴突生长优于Hollow组(P神经移植物的轴突生长长度在3周时即具有优势。

关键词：外周神经损伤脂肪来源干细胞外泌体修复雪旺细胞

敲低PTBP1对外周神经损伤的保护作用及机制研究

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敲低PTBP1对外周神经损伤的保护作用及机制研究

作者：宋洪浩中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究目的多聚嘧啶区结合蛋白1(Polypyrimidine tract-binding protein 1,PTBP1)被认为是一种重要的转录后基因表达调节因子,可以影响m RNA的剪接、翻译、稳定性以及定位,并且具有多种与RNA新陈代谢相关的分子机制,其中最重要的作用就是... 详细信息

研究目的多聚嘧啶区结合蛋白1(Polypyrimidine tract-binding protein 1,PTBP1)被认为是一种重要的转录后基因表达调节因子,可以影响m RNA的剪接、翻译、稳定性以及定位,并且具有多种与RNA新陈代谢相关的分子机制,其中最重要的作用就是对m RNA的选择性剪接产生抑制作用。PTBP1已被证明在调控剪接位点选择中发挥作用,并在哺乳动物细胞中作为选择性剪接调节因子发挥作用。先前已有研究表明:PTBP1在小鼠帕金森和视神经损伤模型中均有神经保护作用。研究者通过敲低该分子成功逆转了两种疾病模型的小鼠的疾病表型,有重要的研究意义。尽管如此,基于该分子的研究目前仍集中于中枢神经系统尤其是脑内,而在外周神经损伤的治疗研究领域,以PTBP1为核心的治疗策略却少有提及,削弱了这一新型靶点的潜在治疗价值。本课题旨在探索PTBP1在外周神经损伤中的具体作用,进而寻找潜在的PTBP1在外周神经损伤修复中的作用及其分子机制,为开发有效的神经损伤保护药物提供理论依据,具有重要的科学意义和潜在的临床应用价值。研究方法1、动物实验:将7-8周雄性C57BL/6小鼠(20 g-30 g)随机分为3组,每组5只,对照组(假手术组),坐骨神经损伤(Sciatic nerve injury,SNI)组,SNI+AAV-GFAPCas Rx-PTBP1组,采用间断夹闭法夹闭小鼠坐骨神经建立外周神经损伤模型。首先取14 d小鼠脊髓,背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG)组织,免疫荧光(Immunofluorescence,IF)技术验证AAV腺相关病毒对PTBP1的敲低水平,取坐骨神经标本进行HE染色观察神经损伤及修复程度。2、细胞实验:首先从胎鼠分离原代星型胶质细胞,在体外培养6-7天后,胰酶消化后种于12孔板,给予小干扰RNA转染星形胶质细胞降低PTBP1表达,通过q-PCR、Western Blot(WB)技术分别从m RNA和蛋白水平检测PTBP1干扰水平。随后,构建细胞敲减模型,以SI-RNA对星形胶质细胞进行转染。通过q-PCR、WB、IF分别从m RNA和蛋白水平检测神经元相关分子及星形胶质细胞极化marker表达水平。通过转录组测序筛选出PTBP1在外周神经损伤修复中的关键分子及信号通路。结果1、对小鼠脊髓与DRG组织进行PTBP1与GFAP免疫荧光共染色显示,PTBP1分子在脊髓与DRG中主要定位于星形胶质细胞中。2、在外周神经损伤模型背景下,取SNI后0 d,3 d,7 d,14 d小鼠脊髓和DRG组织进行PTBP1免疫荧光及WB,结果显示PTBP1在神经损伤后呈现急性期升高后逐渐下降的趋势。3、采用鞘内注射方式给予AAV-GFAP-Cas Rx-PTBP1腺相关病毒后,免疫组化和WB结果显示PTBP1表达降低,证实AAV的敲减效率。4、取SNI+AAV-GFAP-Cas Rx-PTBP1后14 d小鼠坐骨神经组织进行HE染色及Tublin-β3及Tunel免疫荧光检测神经纤维张入、轴突再生及局部凋亡情况,结果显示与SNI组相比,SNI+AAV-GFAP-Cas Rx-PTBP1组小鼠坐骨神经纤维张入及轴突再生得到明显改善,促进了坐骨神经损伤后的修复。5、对照组、SNI组及SNI+AAV-GFAP-Cas Rx-PTBP1组小鼠采用Von Frey及Hot Plate Analgesia test法测定机械痛与热痛阈值,由对照组小鼠得出热痛机械痛基础阈值,结果显示与SNI组相比,SNI+AAV-GFAP-Cas Rx-PTBP1组小鼠热痛阈值下降至基础阈值的时间更短,证明SNI+AAV-GFAP-Cas Rx-PTBP1组小鼠坐骨神经轴突再生速度加快,促进了神经损伤后修复。6、SI-RNA转染星形胶质细胞48h后取样进行转录组测序,结果提示神经元胞体及轴突相关组分增加,早期神经元标志物(Recombinant Doublecortin,DCX)表达上调明显,同时A2型星形胶质细胞标志物S100a10,Clcf1表达上调,A1型星形胶质细胞标志物Fkbp5,Fbln5,Serpiing表达下调,此外,还发现胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)表达上调。7、SI-RNA转染星形胶质细胞72 h后取样进行WB检测结果显示,神经元标志物DCX,VGLUT1,MAP2表达增多,A2型星形胶质细胞极化标志物S100a10表达增多;q-PCR结果显示,A2型星形胶质细胞标志物S100a10,Clcf1和GDNF表达增多,A1型星形胶质细胞标志物Fkbp5,Fbln5,Serpiing表达减少;免疫荧光结果显示,星形胶质细胞中有神经元出现,并表达DCX、MAP2,Neu N,β-tublin等神经元标志物,同时A2型星形胶

关键词：多聚嘧啶区结合蛋白1 外周神经损伤星形胶质细胞转分化 A1/A2型星形胶质细胞

桃红四物汤改善紫杉醇导致的大鼠外周神经损伤的机制研究

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中国药房 2023年第14期34卷 1707-1711页

作者：韩滨郝晨伟董敏李正翔天津医科大学总医院药剂科天津300052

目的探索桃红四物汤(THD)改善紫杉醇(PTX)导致的大鼠外周神经损伤的作用机制。方法考察THD(1 g/mL含药血清)、PTX(0.1μmol/L)单用和联用下对施万细胞系RSC96细胞增殖率以及自噬溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)、自噬标记蛋白酵母Atg6同源物(B... 详细信息

目的探索桃红四物汤(THD)改善紫杉醇(PTX)导致的大鼠外周神经损伤的作用机制。方法考察THD(1 g/mL含药血清)、PTX(0.1μmol/L)单用和联用下对施万细胞系RSC96细胞增殖率以及自噬溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)、自噬标记蛋白酵母Atg6同源物(Beclin1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响,并与自噬促进剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)进行比较。考察THD高、低剂量对PTX导致的外周神经损伤模型大鼠坐骨神经中髓鞘碱性蛋白质(MBP)、鞘磷脂蛋白(MPZ)、S100钙结合蛋白(S100)、LAMP2、Beclin1、PI3K、Akt、mTOR表达的影响。结果THD+PTX作用下RSC96细胞增殖率显著高于PTX单用;THD+PTX、THD+3-MA作用下RSC96细胞中LAMP2、Beclin1蛋白的表达显著高于PTX、3-MA单用,PI3K、Akt、mTOR蛋白的表达显著低于PTX、3-MA单用(P神经中MBP、MPZ、S100、LAMP2、Beclin1蛋白表达均显著升高,PI3K、Akt、mTOR蛋白表达均显著降低(P外周神经损伤。

关键词：桃红四物汤紫杉醇外周神经损伤自噬大鼠施万细胞

基于石墨烯相关材料在外周神经损伤修复中的应用

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中华实验外科杂志 2023年第7期40卷 1448-1450页

作者：刘振刚李鹏富杨帆李佳屹王雪莹张伯寅吉林大学中日联谊医院骨科长春130033

外周神经损伤(PNI)后会严重影响患者的生活质量, 外周神经损伤后机体有一定的再生能力但修复速度很慢且功能恢复不充分, 这是外周神经损伤后亟待解决的问题。有效的手术和康复策略以及新技术的开发是我们的研究方向。外周神经损伤后的... 详细信息

外周神经损伤(PNI)后会严重影响患者的生活质量, 外周神经损伤后机体有一定的再生能力但修复速度很慢且功能恢复不充分, 这是外周神经损伤后亟待解决的问题。有效的手术和康复策略以及新技术的开发是我们的研究方向。外周神经损伤后的修复主要从三个方面进行分析。第一是改善轴突的内在生长能力, 这个过程涉及信号传递和各种神经调节因子的正负调节。其次是改善损伤修复环境, 其中施万细胞和巨噬细胞发挥各自的作用改善抑制性环境。最后是修复后的神经与被支配组织的成功连接。人们一直在尝试开发基于生物材料的治疗外周神经损伤的方法, 以再生功能失调的神经组织。石墨烯是目前已知的最薄、最强、最轻的材料, 具有良好的导热性和导电性, 石墨烯基材料(GBMs)用于神经损伤被认为是一种新兴技术, 为外周神经损伤修复带来了希望。

关键词：石墨烯基材料外周神经损伤修复治疗作用神经组织工程

外周神经损伤后大脑运动皮层局部调整的功能磁共振研究

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中华医学杂志 2005年第25期85卷 1752-1756页

作者：高歌军冯晓源徐文东顾玉东汤伟军李克黎元耿道影复旦大学附属华山医院放射科复旦大学附属华山医院手外科上海200040

目的利用功能磁共振方法观察全臂丛神经损伤以后,大脑初级运动皮层的动态变化,探讨可能的机理。方法经临床检查和手术证实全臂丛神经损伤患者5例,4例接受了神经移位术,以部分恢复肘关节和肩关节功能。按照患者在手术治疗前是否接受过MR... 详细信息

目的利用功能磁共振方法观察全臂丛神经损伤以后,大脑初级运动皮层的动态变化,探讨可能的机理。方法经临床检查和手术证实全臂丛神经损伤患者5例,4例接受了神经移位术,以部分恢复肘关节和肩关节功能。按照患者在手术治疗前是否接受过MR检查,将患者分为2组:A组手术治疗前接受fMRI检查者4例(例1、3、4、5),B组手术治疗以后接受fMRI随访复查者4例(例2、3、4、5)。fMRI检查采用血氧饱和依赖(BOLD)方法,运动任务包括双侧手部的简单的对掌运动,患侧手部运动要求在“模拟”状态下完成。然后记录激活区兴奋像素大小和出现部位,观察信号强度。单个受检者以健侧肢体运动时大脑皮层激活区为参照,进行一对一比较。对A和B两组病例则以正常志愿者观察结果为参照,进行组与组之间比较。结果健侧手部运动均在对侧大脑半球产生较强烈的信号变化。A组患者中,当患手模拟“运动”时,2例在对侧初级运动皮层观察到分散、点状兴奋区,信号强度比健手代表区信号强度明显减弱,另2例未见激活区出现,所有病例均有辅助运动区神经活动。B组患者中,随着时间延长,患肢对侧初级运动皮层出现激活区并且呈现逐渐增大趋势。结论外周神经损伤后,初级运动皮层可以发生显著变化,功能磁共振是一种评价外周神经损伤以后运动皮层可塑性变化的有效的无创伤性方法。

关键词：外周神经损伤磁共振研究全臂丛神经损伤运动皮层可塑性功能磁共振局部 fMRI 手部运动神经移位术肩关节功能 MRI检查信号强度比辅助运动区创伤性方法动态变化手术证实临床检查 MR检查手术治疗出现部位皮层激活