检索结果-南通市图书馆

作者：盛世豪中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究目的:　　创伤后骨性关节炎(posttraumaticosteoarthrists，PTOA)是因创伤引起的，以关节软骨的退行性改变和骨赘增殖为主要病理表现，以关节的疼痛和活动功能障碍为主要临床表现的一类疾病。异常的软骨内骨化是创伤后骨性关节炎进... 详细信息

研究目的:　　创伤后骨性关节炎(posttraumaticosteoarthrists，PTOA)是因创伤引起的，以关节软骨的退行性改变和骨赘增殖为主要病理表现，以关节的疼痛和活动功能障碍为主要临床表现的一类疾病。异常的软骨内骨化是创伤后骨性关节炎进展的中心环节。基质谷氨酸蛋白(MatrixGlaProtein，MGP)是一种表达于软骨细胞的维生素K依赖蛋白，能够抑制软组织的钙化。本研究通过对MGP过表达小鼠的体内实验，探究MGP在创伤后骨性关节炎的作用，探究过表达MGP是否可以延缓PTOA的进展;探究体外表达和抑制MGP对正常软骨细胞和OA软骨细胞的不同影响;探索MGP抑制软骨内骨化的分子机制。　　研究方法:　　1、体内实验：通过将MGP过表达腺相关病毒（adeno-associatedvirus，AAV）注射于野生型（WildType，WT）小鼠膝关节腔，构建软骨MGP过表达小鼠;MGP过表达小鼠和野生型小鼠分别采用前交叉韧带横断法（AnteriorCruciateLigamentTransection，ACLT）构建PTOA模型;通过微型电子计算机断层扫描（microComputedTomography，Micro-CT）对比两种小鼠软骨下骨的相对骨体积（bonevolume/tissuevolume，BV/TV）和软骨下骨厚度（SubchondralBonePlateThickness，***）;小鼠膝关节组织固定后，通过MGP免疫组化染色证明MGP过表达小鼠成功构建;通过组织学染色方法表征软骨及软骨下骨的改变：（1）苏木精伊红染色（HematoxylinandEosin，HE）分析关节透明软骨与钙化软骨比例;（2）番红固绿染色通过国际骨性关节炎研究学会（OsteoarthritisResearchSocietyInternational，OARSI）软骨损伤评级评估膝关节软骨退变程度。通过软骨合成、分解代谢和矿化标志物的免疫组化染色对比两组小鼠软骨退变情况：（1）二型胶原（CollagenⅡ，COLⅡ）及聚集蛋白聚糖(Aggrecan，ACAN);（2）基质金属蛋白酶13（Matrixmetalloproteinases13，MMP13）和血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5（DisintegrinAndMetalloproteinasewithThrombospondinMotifs5，ADAMTS5）;（3）十型胶原（CollagenⅩ，COLⅩ）。　　2、体外实验：取出生第3天野生型小鼠的膝关节软骨组织，采用II型胶原酶消化法消化软骨组织提取原代软骨细胞;在正常小鼠软骨细胞中加入白介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）构建骨关节炎诱导软骨细胞;在两组软骨细胞中分别诱导MGP表达和转染MGPsiRNA。通过对两组两种不同干扰情况的软骨细胞进行MGP、COLⅡ、MMP13的细胞免疫荧光染色观察MGP及软骨合成、分解代谢标志物的变化;通过RT-qPCR、Westernblot观察关节软骨标志物和肥大标志物的表达变化。　　3、机制探讨：通过对野生型小鼠膝关节软骨细胞和MGP表达软骨细胞的普通转录组测序，将主要的差异表达基因在大型基因库中对比，进行GO、KEGG、Reactome和WikiPathways分析，观察MGP蛋白主要调控软骨的功能和信号通路。　　研究结果:　　1、我们发现正常小鼠膝关节软骨中会表达MGP，而在骨关节炎模型小鼠软骨中MGP表达减少并且与造模时间呈正相关。与WT小鼠相比，MGP过表达小鼠的软骨退变减轻，主要表现在1.透明软骨与钙化软骨比例增加;***软骨退变等级下降;***Ⅱ、ACAN等软骨合成代谢产物增加;***13、COLX、ADAMTS5等软骨分解代谢产物减少。对4周和8周两组小鼠膝关节软骨下骨Micro-CT中发现MGP过表达小鼠造模后8周时软骨下骨骨量明显增加。　　2、我们发现相较于对照组软骨细胞，过表达组软骨细胞中COLII和ACAN等关节软骨标志物的表达明显升高，COLX、MMP13和ADAMTS5等肥大标志物的表达明显降低;抑制组软骨细胞合成代谢产物COLII和ACAN表达明显降低，软骨细胞肥大标志物COLX、MMP13和ADAMTS5表达明显升高。　　3、转录组测序的结果证明MGP调控了软骨细胞的分化和凋亡。同时我们发现MGP的主要作用机制可能与基质金属蛋白酶、氧自由基、白细胞介素、MAPK信号通路等相关。　　研究结论:　　1、MGP可以延缓OA小鼠骨关节炎进展，抑制OA早期软骨退变;2、MGP可以抑制OA小鼠软骨下骨异常骨重建;3、MGP可以保护OA小鼠早期关节软骨细胞外基质，抑制软骨基质降解;4、MGP可以抑制小鼠膝关节软骨细胞肥大分化;5、

关键词：骨性关节炎软骨退变软骨细胞肥大分化基质谷氨酸蛋白

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基质谷氨酸蛋白在家猪主动脉瓣间质细胞钙化中的表达

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新乡医学院学报 2016年第3期33卷 182-185,189页

作者：金洋杨军政付庆林韩培立新乡医学院第一附属医院心血管外科河南卫辉453100

目的研究家猪主动脉瓣间质细胞（AVIC）体外钙化诱导过程中基质谷氨酸蛋白（MGP）的变化。方法处死健康成年雄性家猪6只,取下心脏,分离、培养AVIC,并进行细胞表型鉴定。取2~5代AVIC,分为在标准培养基中培养的对照组与在钙化诱导培养基... 详细信息

目的研究家猪主动脉瓣间质细胞（AVIC）体外钙化诱导过程中基质谷氨酸蛋白（MGP）的变化。方法处死健康成年雄性家猪6只,取下心脏,分离、培养AVIC,并进行细胞表型鉴定。取2~5代AVIC,分为在标准培养基中培养的对照组与在钙化诱导培养基（标准培养基内加入钙化诱导剂）中培养的钙化诱导组,分别采用茜素红染色及Western blot、半定量聚合酶链反应技术检测2组细胞在1、7、14 d的钙化情况及MGP在蛋白及mRNA水平的表达情况。结果对照组细胞在7、14 d出现少量钙化结节[每孔（2.38±0.97）个、（9.47±1.59）个],钙化诱导组细胞在7、14 d出现明显钙化结节[每孔（37.55±6.70）个、（78.29±9.14）个];钙化诱导组细胞在7、14 d钙化情况明显高于对照组（P〈0.05）。在7、14 d,钙化诱导组细胞内活化型MGP蛋白水平及MGP mRNA表达水平明显低于对照组（P〈0.05）。结论在钙化诱导条件下,AVIC内钙化抑制剂MGP抑制钙化能力下调。

关键词：基质谷氨酸蛋白主动脉瓣瓣膜间质细胞瓣膜钙化家猪

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