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基质交联分子1对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞凋亡的影响

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中华实验外科杂志 2011年第12期28卷 2046-2048页

作者：阳东荣单玉喜刘晓龙徐明董赟李峰苏州大学附属第二医院泌尿外科 215004 苏州大学附属第二医院病理科 215004

目的观察基质交联分子1（STIM1）对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞凋产的影响。方法自行设计合成STIM1小干扰RNA（siRNA）片段，构建可抑制STIM1表达的质粒载体pGCSIL—GFP—STIM1，外源验证其抑制STIM1的有效性后，将其进行慢病毒包装，... 详细信息

目的观察基质交联分子1（STIM1）对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞凋产的影响。方法自行设计合成STIM1小干扰RNA（siRNA）片段，构建可抑制STIM1表达的质粒载体pGCSIL—GFP—STIM1，外源验证其抑制STIM1的有效性后，将其进行慢病毒包装，取名为STIM1-RNAi—LV，转染人PC-3细胞后，检测PC-3细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的变化。结果构建的pGCSIL—GFP—STIM1质粒载体经测序及聚合酶链反应（PCR）检测，序列准确；经外源性验证，可有效抑制STIM1的表达。将STIMI—RNAi—LV转染入前列腺癌PC-3细胞株后，随时间的延长，实验组PC-3细胞增殖数目明显下降，同对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。转染5d后，实验组PC-3细胞凋亡率为（29．85±0．86）％，阴性对照组（2．92±0．14）％，两组差异有统计学意义（P〈0．05）；同样转染5d后，实验组PC-3细胞中G1期、S期细胞数下降，G2／M期细胞数增加，同对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外抑制前列腺癌PC-3细胞中STIMI表达后，PC-3细胞增殖减慢，细胞凋亡增加，细胞周期发生明显改变。它提示STIM1在前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡过程中起重要作用．

关键词：前列腺肿瘤基质交联分子1 脱噬作用

基质交联分子1对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响

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中华男科学杂志 2014年第3期20卷 225-228页

作者：顾鹏周毅彬阳东荣单玉喜薛波新苏州大学附属第二医院泌尿外科江苏苏州215004

目的:观察抑制基质交联分子1(STIM1)对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将携带STIM1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP转染人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,3d后荧光倒置显微镜观察转染效率;1周后RT-PCR... 详细信息

目的:观察抑制基质交联分子1(STIM1)对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将携带STIM1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP转染人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,3d后荧光倒置显微镜观察转染效率;1周后RT-PCR及Western印迹验证STIM1抑制表达有效性,并采用Western印迹检测PC-3细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,survivin、激活型Caspase-3的表达水平。结果:倒置显微镜观察发现PC-3细胞病毒转染效率>80%。转染1周后,RT-PCR及Western印迹显示STIM1被有效抑制。抑制STIM1表达后,对照组Bcl-2/Bax比率为1.24,干扰组PC-3细胞Bcl-2/Bax比率为0.31,比率显著下降;干扰组PC-3细胞survivin表达明显降低,相对表达量为对照组的0.14倍;Caspase-3裂解激活相对表达量为对照组的1.52倍(P1在前列腺癌PC-3细胞中可视为致癌基因,抑制其表达可通过下调Bcl-2/Bax比率,降低survivin表达,激活Caspase-3级联通路,诱导细胞凋亡。

关键词：前列腺癌基质交联分子1 凋亡 PC-3细胞

基质交联分子1对前列腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响

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基质交联分子1对前列腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响

作者：顾鹏苏州大学

学位级别：硕士

背景与目的：基质交联分子1（STIM1）在多种肿瘤组织中表达增高，并参与肿瘤生长、血管形成及远处转移。本课题组前期研究表明，前列腺癌组织中STIM1表达明显增高，且与肿瘤分期相关。抑制前列腺癌PC-3细胞中STIM1表达可抑制PC-3细胞增... 详细信息

背景与目的：基质交联分子1（STIM1）在多种肿瘤组织中表达增高，并参与肿瘤生长、血管形成及远处转移。本课题组前期研究表明，前列腺癌组织中STIM1表达明显增高，且与肿瘤分期相关。抑制前列腺癌PC-3细胞中STIM1表达可抑制PC-3细胞增殖、诱导凋亡。为此，我们以短发夹RNA（shRNA）抑制STIM1表达，检测其表达抑制后对激素非依赖型人前列腺癌DU145、PC-3细胞迁移、侵袭能力的影响，并初步探讨在上皮间质转化（EMT）阳性的DU145细胞中，抑制STIM1表达对其上皮及间质标记物表达变化的影响。方法：合成携带STIM1基因shRNA的慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP，该载体已证明可有效抑制PC-3细胞中STIM1表达。以激素非依赖型人前列腺癌DU145、PC-3细胞株为研究对象，将慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP分别转染DU145、PC-3细胞（si-STIM1组），设计空白对照组（Mock组）及阴性对照组（NC组）。转染72h后选取转染效率大于80%的细胞扩大培养用于后续实验。采用RT-PCR及Westernblot验证转染慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP后STIM1抑制情况。划痕实验及Transwell迁移、侵袭实验检测抑制STIM1表达后DU145、PC-3细胞运动、迁移及侵袭能力的变化。以EMT阳性的DU145细胞株进一步研究，采用RT-PCR及Westernblot分别在mRNA及蛋白水平检测EMT标记物(E-cadherin、N-cadherin、 Vimentin、α-SMA)在STIM1被抑制前后表达的变化。结果：转染72h后荧光倒置显微镜下见病毒转染效率大于80%，感染复数（MOI）=20。RT-PCR及Western blot结果均显示DU145、PC-3细胞si-STIM1组STIM1表达明显降低。与NC组相比，DU145细胞中STIM1mRNA和蛋白水平抑制率分别为72%、64%;PC-3细胞中STIM1mRNA和蛋白水平抑制率分别为81%、85%，差异均有统计学意义（P＜0.05）。划痕实验显示两种细胞STIM1抑制后运动能力均明显降低。细胞迁移结果发现，DU145细胞中Mock组、NC组、si-STIM1组每视野细胞数分别为87.2±7.3个、85.4±8.5个、45.6±4.3个;PC-3细胞中Mock组、NC组、si-STIM1组每视野细胞数分别为61.8±3.3个、58.4±6.2个、34.1±6.3个。分别与各自NC组相比，两种细胞si-STIM1组迁移细胞数目显著减少（P＜0.05）。细胞侵袭实验提示，DU145细胞Mock组、NC组和si-STIM1组每视野细胞数目分别为96.6±9.3个、99.1±10.4个、52.6±6.7;PC-3细胞Mock组、NC组和si-STIM1组每视野细胞数目分别为32.4±4.6个、35.1±3.9个、19.3±3.2个。si-STIM1组与各自NC组相比，细胞侵袭数目明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。对DU145细胞株进一步研究，RT-PCR和Western blot结果显示，si-STIM1组上皮标记物E-cadherin的mRNA及蛋白表达增高（分别为NC组的1.81倍、3.81倍）;间质标记物N-cadherin的mRNA及蛋白表达降低（分别为NC组的0.44倍、0.69倍）,Vimentin的mRNA及蛋白表达降低（分别为NC组的0.50倍、0.77倍），α-SMA的mRNA及蛋白表达降低（分别为NC组的0.49倍、0.67倍），各组差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论： 1.前列腺癌DU145、PC-3细胞的细胞运动、细胞迁移及细胞侵袭能力与细胞中STIM1表达水平密切相关;2.抑制DU145细胞中STIM1表达后，上皮标记物E-cadherin表达增高，间质标记物N-cadherin、Vimentin和α-SMA的mRNA及蛋白表达均降低;3.在前列腺癌DU145细胞中抑制STIM1表达可抑制前列腺癌细胞远处转移，其机制可能与逆转EMT相关。

关键词：基质交联分子1 前列腺癌肿瘤转移上皮间质转化

柴胡皂苷d对阻塞性黄疸大鼠肝细胞游离钙及基质交联分子1的调控机制

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中华实验外科杂志 2012年第11期29卷 2122-2124页

作者：戴维陈念平陈赛红包仕廷廖博懿刘刚广东医学院附属医院肝胆外科湛江524001 门诊药房广东医学院2008硕士研究生

目的观察柴胡皂苷d（SSd）对阻塞性黄疸大鼠胆汁酸代谢、肝细胞游离钙及基质交联分子1（STIMl）基因表达的影响。方法将108只SD雄性大鼠随机分为假手术对照组、阻黄组、阳性药物对照组、高、中、低剂量SSd组，同时各组随机分7、14、21d... 详细信息

目的观察柴胡皂苷d（SSd）对阻塞性黄疸大鼠胆汁酸代谢、肝细胞游离钙及基质交联分子1（STIMl）基因表达的影响。方法将108只SD雄性大鼠随机分为假手术对照组、阻黄组、阳性药物对照组、高、中、低剂量SSd组，同时各组随机分7、14、21d3个时段，每时段每组6只，建模成功后，分别连续给药7、14、21d，于各时段末取肝组织和下腔静脉血标本，检测血清总胆汁酸（TBA）；应用流式细胞仪通过荧光指示剂Fluo-3／AM测定肝细胞内钙离子浓度；逆转录一聚合酶链反应（RT-PGR）检测STIMl的mRNA表达。结果阻黄模型建立7、14、21d后，阻黄组血清TBA逐步增加，肝细胞游离钙平均荧光强度（MFI）值逐步上升，STIMlmRNA表达逐步减弱；SSd治疗组7d末，与阻黄组比较，低、中、高剂量组TBA水平逐步下降，差异有统计学意义（P〈0．05）；肝细胞游离钙MFI值逐步下调，差异有统计学意义（P〈0．05）；STIMImRNA表达逐步增强，差异有统计学意义（P〈0．05）；14、21d末各检测指标变化趋势与7d末相同。结论SSd能降低血清TBA浓度，上调STIMlmRNA表达，抑制肝细胞钙超载，从而减轻阻塞性黄疸大鼠肝脏损害。

关键词：柴胡皂苷d 阻塞性黄疸基质交联分子1 钙库操纵性钙通道

基质交联分子1表达下调对人胰腺癌SW1990细胞周期及细胞凋亡的影响

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中华细胞与干细胞杂志（电子版） 2017年第5期7卷 265-270页

作者：黎美琳顾鹏无锡市第五人民医院(无锡市传染病医院)肝病科 214000 无锡市锡山人民医院泌尿外科 214000

目的探讨基质交联分子1(STIM1)表达下调对人胰腺癌细胞株SW1990细胞周期和细胞凋亡的影响,并研究其分子作用机制。方法构建携带STIM1基因si RNA的慢病毒载体转染SW1990细胞,分为对照组、空载体组和STIM1组。采用半定量逆转录聚合酶链反... 详细信息

目的探讨基质交联分子1(STIM1)表达下调对人胰腺癌细胞株SW1990细胞周期和细胞凋亡的影响,并研究其分子作用机制。方法构建携带STIM1基因si RNA的慢病毒载体转染SW1990细胞,分为对照组、空载体组和STIM1组。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot验证STIM1组SW1990细胞STIM1表达下调。通过MTT增殖实验和流式细胞术检测STIM1表达下调对细胞增殖、周期和细胞凋亡的影响,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞周期和细胞凋亡相关分子表达的变化。两组间比较采用t检验。结果STIM1组SW1990细胞中STIM1表达mRNA(0.261±0.029)、蛋白(0.120±0.032)低于空载体组mRNA(1.002±0.091)、蛋白(0.996±0.053),t=20.74、26.89,P均分子靶点。

关键词：胰腺癌基质交联分子1 细胞周期细胞凋亡

TRPC1/STIM1复合体调节人脐静脉内皮细胞钙池操纵性钙通道和受体操纵性钙通道介导的钙内流和NO生成

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中国动脉硬化杂志 2017年第8期25卷 764-772页

作者：王腊梅胡清华钟华唐娜孙志萍何芳新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室石河子大学医学院病理生理学教研室新疆石河子市832002

目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/基质交联分子1(STIM1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙池操纵性钙通道(SOCC)和受体操纵性钙通道(ROCC)介导的钙内流和NO生成中的作用。方法取2~3代HUVEC,将构建的TRPC1和STIM1干扰质粒分别转染HUV... 详细信息

目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/基质交联分子1(STIM1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙池操纵性钙通道(SOCC)和受体操纵性钙通道(ROCC)介导的钙内流和NO生成中的作用。方法取2~3代HUVEC,将构建的TRPC1和STIM1干扰质粒分别转染HUVEC,观察细胞转染效果的同时采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白的表达。将细胞分别与钙敏感受体(CaR)激动剂精胺、ROCC模拟剂(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化;随后用TRPC1和STIM1干扰质粒同时转染HUVEC,与精胺孵育后检测[Ca2+]i和NO生成,免疫共沉淀法检测TRPC1和STIM1的相互作用。结果与Control组相比,TRPC1转染组和STIM1转染组TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P1转染组和STIM1转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P1转染组及STIM1转染组相比,TRPC1和STIM1共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P1与STIM1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下作用增强。结论 TRPC1/STIM1复合体共同调节CaR经SOCC和ROCC激活介导的钙内流和NO生成。

关键词：瞬时受体电位通道1 基质交联分子1 钙池操纵性钙通道受体操纵性钙通道一氧化氮人脐静脉内皮细胞

STIM1/TRPC1复合体在川崎病患儿冠状动脉损伤后修复中的调控作用

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中国预防医学杂志 2020年第2期21卷 168-171页

作者：俞秀英王玲玲林苗苗温州医科大学附属新昌医院儿科浙江新昌312500 温州医科大学附属第二医院儿童急诊科

目的探讨基质交联分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)/瞬时受体电位通道1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)复合体在川崎病免疫性冠状动脉损伤后修复中的调控作用。方法回顾性分析2015年1月至2018年6月温州医... 详细信息

目的探讨基质交联分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)/瞬时受体电位通道1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)复合体在川崎病免疫性冠状动脉损伤后修复中的调控作用。方法回顾性分析2015年1月至2018年6月温州医科大学附属新昌医院和温州医科大学附属第二医院收治的川崎病患儿73例,合并冠状动脉损伤(观察组)34例与未合并冠状动脉损伤(对照组)39例。采用Real-time PCR检测STIM1、TRPC1表达;采用免疫印迹法(WB法)检测STIM1、TRPC1表达;采用免疫共沉淀检测STIM1、TRPC1相互作用。结果观察组STIM1 Real-time PCR表达(0.54±0.12),低于对照组(0.87±0.19),差异有统计学意义(t=8.720,P1 Real-time PCR表达(0.37±0.10),低于对照组(0.76±0.15),差异有统计学意义(t=12.866,P1表达相对灰度值(0.43±0.09),低于对照组(0.81±0.21),差异有统计学意义(t=9.790,P1表达相对灰度值(0.30±0.08),低于对照组(0.67±0.14),差异有统计学意义(t=13.590,P1/TRPC1复合体在川崎病冠状动脉损伤后修复中具有重要调控作用,呈低表达。

关键词：基质交联分子1 瞬时受体电位通道1 川崎病免疫性冠状动脉损伤修复调控作用

钙库操纵性钙通道蛋白在环磷酰胺诱导的膀胱过度活动症大鼠模型膀胱组织中的表达

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中华实用诊断与治疗杂志 2021年第3期35卷 226-229页

作者：熊志郝晓杰高宏飞山西医科大学第一临床医学院山西太原030001 山西医科大学第一医院泌尿外科山西太原030001

目的制备膀胱过度活动症(overactive bladder,OAB)大鼠模型,探讨钙库操纵性钙通道蛋白在OAB大鼠膀胱组织中的表达。方法30只健康雌性SD大鼠,随机分为模型组和对照组各15只。模型组单次腹腔注射环磷酰胺200mg/kg制备OAB模型,对照组腹腔... 详细信息

目的制备膀胱过度活动症(overactive bladder,OAB)大鼠模型,探讨钙库操纵性钙通道蛋白在OAB大鼠膀胱组织中的表达。方法30只健康雌性SD大鼠,随机分为模型组和对照组各15只。模型组单次腹腔注射环磷酰胺200mg/kg制备OAB模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。2组腹腔注射后24h行尿流动力学检查,观察排尿间期、排尿阈值、基础膀胱压力和平均逼尿肌压力。尿流动力学检查后立即处死大鼠,取膀胱组织,采用Western blot法检测膀胱组织钙释放激活钙通道蛋白1(calcium release-activated calcium channel protein 1,Oria1)、基质交联分子1(stromal interacting molecule 1,STIM1)蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR法检测Oria1mRNA、STIM1mRNA相对表达量。结果对照组储尿期及排尿期逼尿肌收缩平稳、未见明显不稳定收缩,模型组在储尿期出现明显不稳定收缩;模型组排尿间期[(217.8±176.7)s]短于对照组[(412.8±276.4)s](P10.0±2.6)cm H_(2)O]低于对照组[(14.3±2.7)cm H_(2)O](P11.4±3.7)cm H_(2)O]高于对照组[(7.5±2.6)cm H_(2)O](P0.05)。模型组膀胱组织Orai1蛋白(0.36±0.21)及STIM1蛋白(0.63±0.46)相对表达量、Orai1mRNA(1.92±0.80)及STIM1mRNA(0.42±0.22)相对表达量均高于对照组(0.21±0.13、0.44±0.31、0.59±0.06、0.16±0.02)(P1及STIM1表达升高。

关键词：膀胱过度活动症大鼠环磷酰胺钙库操纵性钙通道蛋白钙释放激活钙通道蛋白1 基质交联分子1