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C基因型乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子突变与疾病进展的相关性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第8期27卷 701-704页

作者：王佳高志勇庄辉李杰李雅娟王杰杜季梅庞保军董庆鸣北京大学医学部微生物学系 100083 温州医学院山东省聊城人民医院北京地坛医院

目的探讨HBV前C区(PreC)及基本核心启动子(BCP)突变与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者疾病进展的关系。方法收集88例慢性HBV感染者血清标本,包括36例无症状携带者(其中24例为HBV携带者,12例为HBsAg携带者)、36例慢性乙型肝炎(慢性乙肝)和1... 详细信息

目的探讨HBV前C区(PreC)及基本核心启动子(BCP)突变与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者疾病进展的关系。方法收集88例慢性HBV感染者血清标本,包括36例无症状携带者(其中24例为HBV携带者,12例为HBsAg携带者)、36例慢性乙型肝炎(慢性乙肝)和16例肝硬化患者。所有标本均经型特异性引物PCR法鉴定为HBV C基因型,并用巢氏PCR法扩增HBV PreC和BCP基因片段,用PCR产物直接测序法测序,然后用Clustal W1.8软件进行序列分析。结果在50例HBeAg阳性患者中,无症状携带者、慢性乙肝和肝硬化组的T1762/A1764双突变率和T1846突变率分别为12.5%、42.1%、100%和0%、5.3%、28.6%,差异均有统计学意义(P值分别为0.03和0.02)。在38例HBeAg阴性HBV感染者中,无症状携带者、慢性乙肝和肝硬化组的T1762/A1764双突变率分别为16.7%、58.8%和66.7%,差异无统计学意义(P=0.08)。肝硬化组的C/G1753突变率显著高于无症状携带者及慢性乙肝组(分别为55.6%、8.3%、11.8%,P=0.01),其A1896突变率也高于无症状携带者组(分别为55.6%、8.3%,P=0.01)。结论HBV T1762/A1764双突变与C基因型HBV慢性感染者的疾病进展有关。

关键词：乙型肝炎病毒基本核心启动子肝炎e抗原突变

慢性乙型肝炎病毒感染者病毒前C区和基本核心启动子区变异检测及意义

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中华消化杂志 2005年第9期25卷 526-529页

作者：刘悦晖丁静娟张权贵阳医学院附属医院感染科实验室贵阳550004

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区和基本核心启动子(BCP)区变异与基因型及疾病进展间的关系。方法收集HBV携带者(ASC)、慢性乙型肝炎(CHB)、肝炎肝硬化(LC)、肝细胞肝癌(HCC)患者血清148份,用半巢式聚合酶链反应扩增HBV前C/C基因部分片段... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区和基本核心启动子(BCP)区变异与基因型及疾病进展间的关系。方法收集HBV携带者(ASC)、慢性乙型肝炎(CHB)、肝炎肝硬化(LC)、肝细胞肝癌(HCC)患者血清148份,用半巢式聚合酶链反应扩增HBV前C/C基因部分片段,产物纯化后直接测序,检测前C区A1896及BCP区T1762/A1764变异。用S基因聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法确定HBV基因型。结果有128份血清能够成功分型和测序,其中B基因型60份,C基因型68份。在B基因型感染者中前C区A1896变异检出率(48.33%)明显高于C基因型感染者(29.41%,χ2=4.83,P<0.05);而BCP区T1762/A1764变异检出率却明显低于C基因型感染者,差异亦有统计学意义(30.00%∶73.54%,χ2=24.25,P<0.05)。前C区A1896变异在CHB、LC、HCC中的阳性检出率分别为46.88%(15/32)、39.39%(13/33)、51.52%(17/33),与ASC的13.33%(4/30)相比,P分别<0.05,差异有统计学意义。BCP区T1762/A1764变异检出率在HCC、LC组分别为87.88%(29/33)和72.73%(24/33),明显高于CHB组的37.50%(12/32)及ASC组10.00%(3/30)(P<0.05)。结论前C区A1896变异常见于B基因型感染者,而BCP区T1762/A1764变异C基因型感染者多见。除ASC外,前C区A1896变异与疾病进展关系不大,而BCP区T1762/A1764变异与乙型肝炎进展及预后相关。

关键词：乙型肝炎病毒基本核心启动子前C基因基因型

拉米夫定耐药与HBV基因型及基本核心启动子突变的关系

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第S1期21卷 123-126页

作者：王虹熊梦辉吴志华万成松周东耀王省良曾位森彭华国第一军医大学基础部生物医学诊断研究中心广州510515

目的　了解拉米夫定耐药与HBV基因型及HBV基本核心启动子 (BCP)突变之间的关系。方法　选取HBV前C区保守序列作为通用包被探针 ,HBV不同基因型 (A、B、C、D、E、F)的序列、BCP野生株及突变株的序列、YMDD野生株及突变株序列分别作多条... 详细信息

目的　了解拉米夫定耐药与HBV基因型及HBV基本核心启动子 (BCP)突变之间的关系。方法　选取HBV前C区保守序列作为通用包被探针 ,HBV不同基因型 (A、B、C、D、E、F)的序列、BCP野生株及突变株的序列、YMDD野生株及突变株序列分别作多条显色探针。采用PCR微板核酸杂交ELISA技术分别对服药前及服药后 6个月进行HBV含量、基因型、BCP突变株及YMDD突变株的检测。结果　HBVC基因型占 36 % ,B基因型占 30 % ,D基因型占 2 3%。服药前 13例BCP突变患者仅 1例为B型 ,C型 8例 ,D型 4例 ;13例中有 2例DNA浓度小于 10 0pg ml血清 ,11例DNA浓度均大于 10 0pg ml血清。口服拉米夫定 6个月 ,YMDD突变株发生率为 9.4% ,在 5例YMDD突变中 ,C基因型 3例 ,D基因型 2例。并且 4例伴有BCP双突变。结论　HBVBCP的突变株HBV基因型及DNA含量有一定的相关性。口服拉米夫定可以明显降低HBV水平 ,HBVYMDD突变株的发生也与基因型有关 ,且 80 % (4 5 )

关键词： YMDD突变基本核心启动子微板核酸杂交

慢性乙型肝炎乙肝病毒基本核心启动子变异的实验与临床研究

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江苏医药 2007年第6期33卷 563-564页

作者：臧志栋吴引伟赵伟南京市第二医院肝病科 210003

目的研究乙型肝炎基本核心启动子(BCP)变异与慢性乙型肝炎病情的关系。方法通过PCR及其产物直接检测128例慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV,同时检测患者HBV定量及血清生化指标。结果128例标本中nt1762、1764变异(双变异)共检出56例,nt1753、1... 详细信息

目的研究乙型肝炎基本核心启动子(BCP)变异与慢性乙型肝炎病情的关系。方法通过PCR及其产物直接检测128例慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV,同时检测患者HBV定量及血清生化指标。结果128例标本中nt1762、1764变异(双变异)共检出56例,nt1753、1762、1764变异(三变异)共检出10例,肝炎肝硬化(LC)组中双变异明显高于其他CHB组(P<0.05);双变异组的HBeAg、ALB明显低于无变异组(P<0.05),三变异组HBeAg明显低于双变异组(P<0.05)。结论BCP区双变异可减少HBeAg的表达,引起肝功能受损严重并导致肝硬化的发生,BCP区尚有新发现的变异如三变异也可影响HBeAg的表达。

关键词：乙型肝炎病毒基本核心启动子变异

乙型肝炎病毒基本核心启动子区热点突变与广西肝癌家族聚集性的相关性

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实用医学杂志 2014年第23期30卷 3762-3765页

作者：石仁芳吴继周万裴琦吴健林宁秋悦广西医科大学第一附属医院感染性疾病科南宁市530021 广西医科大学

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)区突变与广西肝癌家族聚集的相关性。方法:从广西肝癌高发及无癌家族中配对选取HBs Ag阳性成员各103例。采用聚合酶链反应(PCR)扩增BCP区并测序分析。结果:BCP区突变发生在前5位的热点位... 详细信息

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)区突变与广西肝癌家族聚集的相关性。方法:从广西肝癌高发及无癌家族中配对选取HBs Ag阳性成员各103例。采用聚合酶链反应(PCR)扩增BCP区并测序分析。结果:BCP区突变发生在前5位的热点位点为T1762、A1764、G1775、V1753、G1803。单因素分析:HBV DNA≥105copies/m L、T1762、A1764和V1753突变均与肝癌高发有关(P<0.05)。多因素Logistic分析显示:HBV DNA≥105copies/m L和A1764突变是肝癌高发的独立危险因素。结论:HBV DNA水平、BCP区突变与广西肝癌家族聚集存在相关性。

关键词：肝炎病毒乙型基本核心启动子突变肝细胞癌家族聚集性

儿童乙型肝炎病毒基本核心启动子变异的检测及其意义

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中国实用儿科杂志 2004年第1期19卷 36-38页

作者：陈宝昌戴兰芬李彦敏王炳辉田朝霞韩小梅董红红高静刘亚平河北医科大学第一医院石家庄050031 河北省儿童医院石家庄050031

目的　探讨儿童慢性乙肝病毒基本核心启动子 (BCP)基因双变异 (nt176 2A→T和nt176 4G→A)的临床特征和意义。方法　采集空腹肘静脉血 ,分离血清备检 ;以金标层析方法检测乙肝病毒 (HBV)免疫标志物 ,以微板核酸探针杂交技术检测HBVBCP... 详细信息

目的　探讨儿童慢性乙肝病毒基本核心启动子 (BCP)基因双变异 (nt176 2A→T和nt176 4G→A)的临床特征和意义。方法　采集空腹肘静脉血 ,分离血清备检 ;以金标层析方法检测乙肝病毒 (HBV)免疫标志物 ,以微板核酸探针杂交技术检测HBVBCP区双位点变异及其DNA定性 ;将研究对象分为轻、中、重 3组 ,分别统计各组BCP双变异阳性率 ,分析BCP区双变异与血清HBeAg的相关性。结果　慢性乙肝患儿HBVDNA检测阳性率82 98% (78/ 94 ) ,HBeAg阳性组显著高于阴性组 (P <0 0 0 1) ;BCP区双变异阳性率为 15 96 % (15 / 94 ) ,HBeAg阳性组明显低于阴性组 (χ2 =5 36 ,P <0 0 5 ) ;轻、中、重 3组HBVBCP变异率分别为 4 4 4 %、13 79%和 4 5 0 0 % ,中、重两组比较差异有显著性 (χ2 =5 91,P <0 0 5 )。结论　儿童慢性乙肝病毒BCP双变异检出率血清HBeAg阴性组明显高于HBeAg阳性组 ,此处双变异减少了但未完全终止HBeAg的产生 ;儿童慢性乙肝HBVBCP双变异发生率与病变程度呈正相关 ,检测BCP区双变异对病情预后的判断有一定参考价值。

关键词：儿童乙型肝炎病毒基本核心启动子基因变异检测金标层析方法

焦磷酸测序技术检测HBV基本核心启动子变异的研究

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山东医药 2007年第26期47卷 14-16页

作者：谈国蕾吴引伟文剑赵磊宋玉华张亮东南大学医学院附属南京市第二医院江苏南京210003

目的建立HBV基本核心启动子(BCP)区变异的快速检测方法。方法采用焦磷酸测序(pyrose-quencing)技术,设计一对引物,其中一条经生物素标记,PCR扩增产物含HBVBCP A1762T/G1764A双突变的区域,借用生物素包被葡聚珠纯化单链PCR产物,设计一条... 详细信息

目的建立HBV基本核心启动子(BCP)区变异的快速检测方法。方法采用焦磷酸测序(pyrose-quencing)技术,设计一对引物,其中一条经生物素标记,PCR扩增产物含HBVBCP A1762T/G1764A双突变的区域,借用生物素包被葡聚珠纯化单链PCR产物,设计一条测序引物,运用焦磷酸测序技术对A1762T/G1764A两个变异点进行变异分析。通过对已知变异类型的HBV分离株进行测定分析,评价所建立方法的检测敏感性和特异性。结果PCR扩增后,可在2 h内得到A1762T/G1764A两个变异点的突变情况。所建立方法的检测灵敏度达到HBV-DNA血清中的含量为103copies/ml;在所分析的HBV BCP区均可检测出变异株、非变异株及混合株,且所检测的结果与直接测序方法结果符合率为95%。结论Pyrosequencing技术用于检测病毒基因突变有高通量、自动化程度高和结果准确等特点,适用于对HBV BCP区突变进行快速高通量检测。

关键词：焦磷酸测序肝炎病毒乙型基本核心启动子变异

HBeAg阴性血清中乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C区变异研究

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检验医学 2008年第4期23卷 333-337页

作者：郭龙华董长垣黄宪章庄俊华林莉周强广东省中医院二沙岛分院检验科广东广州510105 武汉大学医学院湖北武汉430071

目的了解本地区乙型肝炎病毒(HBV)流行株基本核心启动子(BCP)和前C(PreC)基因的变异热点,为临床提供诊疗信息。方法通过设计3条特异性引物进行半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增患者血清中HBV BCP和PreC基因序列,回收和纯化PCR产物,用引物P1... 详细信息

目的了解本地区乙型肝炎病毒(HBV)流行株基本核心启动子(BCP)和前C(PreC)基因的变异热点,为临床提供诊疗信息。方法通过设计3条特异性引物进行半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增患者血清中HBV BCP和PreC基因序列,回收和纯化PCR产物,用引物P1、P2直接进行正反测序,然后进行比对分析。结果BCP变异主要集中在TATA样盒(TATA-like box)中的TA1、TA2、TA3区,而TA4极为保守,TA1-TA4未见插入或缺失突变,PreC变异主要集中在nt1896位G→A。另外,发现1例新奇的插入突变。结论BCP和PreC变异可使HBeAg阴转。

关键词：乙型肝炎病毒变异基本核心启动子前C基因半巢式PCR

乙型肝炎病毒基本核心启动子变异对启动子活性及病毒复制力影响的研究

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乙型肝炎病毒基本核心启动子变异对启动子活性及病毒复制力影响的...

作者：王耀内蒙古农业大学

学位级别：硕士

乙型病毒性肝炎是一种世界性的传染病,由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染所引起,是肝衰竭、肝硬化和肝癌发生的高危因素。HBV由于其多聚酶/反转录酶(RT)缺乏校对功能,极易发生变异,是高变异病毒,其内部基本核心启动子(basal c... 详细信息

乙型病毒性肝炎是一种世界性的传染病,由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染所引起,是肝衰竭、肝硬化和肝癌发生的高危因素。HBV由于其多聚酶/反转录酶(RT)缺乏校对功能,极易发生变异,是高变异病毒,其内部基本核心启动子(basal core promoter, BCP)基因序列的保守性对于维持病毒的活跃复制非常关键,该区变异可以影响HBV的复制力,降低病毒e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)的合成,从而导致不同的临床结局。目前,BCP区的热点突变有T1753A/C、A1762T、G1764A、C1766T等,其中最为常见的是A1762T/G1764A双联突变,此外,C1766T/T1768A双联突变,以及A1762T/G1764A/C1766T和T1753C/A1762T/G1764A/C1766T等多联突变也较为常见。本实验通过对解放军第302医院近年收治的40例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者及40例慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure, ACLF)患者HBV全基因组的克隆及热点突变的统计分析,并进一步挑选BCP区G1764A/C1766T/T1768A三联突变样品,研究该突变对启动子活性和HBV全基因组复制力的影响。本研究的主要结果如下: 1.患者临床资料经统计分析后发现,CHB患者的HBeAg阳性率和HBV DNA载量高于ACLF患者(P启动子活性为相应野生株的1.67倍,而G1764A/C1766T/T1768A三联突变病毒株的启动子活性为相应野生株的1.43～1.80倍,提示该三联突变对启动子活性具有上调作用。 ***全基因组经过定点突变及细胞转染技术,荧光定量检测结果显示:典型BCP双联突变A1762T/G1764A病毒株的全基因组复制力为相应野生株的1.56倍,而G1764A/C1766T/T1768A三联突变病毒株的全基因组复制力为相应野生株的1.54～2.49倍,提示该突变可以增加HBV DNA的复制水平。总之,通过对CHB患者和ACLF患者HBV全基因组的克隆及序列分析,以及BCP区G1764A/C1766T/T1768A三联突变对启动子活性以及病毒全基因组复制水平影响的研究,明确了该三联突变的生理功能,有助于理解HBV DNA BCP突变特征及在乙型肝炎的重症化进程中的分子病毒学机制。

关键词：乙型肝炎病毒基本核心启动子变异复制力