检索结果-南通市图书馆

口蹄疫病毒RNA复制酶基因3D的克隆、表达及纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2005年第2期25卷 119-121页

作者：孙涛陆苹上海交通大学农业生物技术学院生物技术研究所上海201101

利用 RT- PCR扩增了口蹄疫病毒 (FMDV )的 RNA复制酶基因 ,并将其克隆到原核表达载体 p ET- 32 a(+)中。重组质粒在大肠杆菌中表达后的目的蛋白为可溶性形式 ,纯化产物用感染 A型 FMDV的豚鼠康复血清进行 Western-blotting检测 ,结果表... 详细信息

利用 RT- PCR扩增了口蹄疫病毒 (FMDV )的 RNA复制酶基因 ,并将其克隆到原核表达载体 p ET- 32 a(+)中。重组质粒在大肠杆菌中表达后的目的蛋白为可溶性形式 ,纯化产物用感染 A型 FMDV的豚鼠康复血清进行 Western-blotting检测 ,结果表明。

关键词：口蹄疫病毒 RNA复制酶基因基因表达基因克隆基因纯化

真鲷肿瘤坏死因子（TNFα）基因的体外重组与纯化研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

高技术通讯 2004年第1期14卷 25-30页

作者：蔡中华宋林生高春萍吴龙涛邱丽华中国科学院海洋研究所青岛266071 天津农学院水产科学系天津300384 中国海洋大学学院生命科学学院青岛266003

将真鲷肿瘤坏死因子(TNFα)基因的成熟肽区域克隆到表达载体pQE30中，并转化到大肠杆菌XL-blue中进行表达。转化子经载体和基因特异性引物进行PCR双向筛选，并将筛选到的阳性克隆经质粒纯化后，进行序列测定。序列测定结果显示，该基因... 详细信息

将真鲷肿瘤坏死因子(TNFα)基因的成熟肽区域克隆到表达载体pQE30中，并转化到大肠杆菌XL-blue中进行表达。转化子经载体和基因特异性引物进行PCR双向筛选，并将筛选到的阳性克隆经质粒纯化后，进行序列测定。序列测定结果显示，该基因结构正确，且准确插入到表达载体启动子的下游，获得了结构和组成正确的重组子。重、组子经IPTG诱导后，以SDS-PAGE电泳鉴定，电泳结果表明，该基因在大肠杆菌XL-blue中实现了表达。通过对诱导条件的调整，在体外获得了高效表达的重组蛋白，高效表达的重组蛋白约占菌体蛋白的25％-30％。不同诱导时间对重组蛋白影响实验显示，随诱导时间的增加，重组蛋白产量逐渐增高，经4h诱导，其表达量可以达到平台期，过长时间的诱导，对表达产量没有影响。重组蛋白经镍金属亲和层析纯化，获得了纯度较高的重组蛋白。采用交换缓冲液的方法，用Sephadex G150，对重组蛋白进行脱盐复性，使重组蛋白得到了进一步纯化。

关键词：真鲷肿瘤坏死因子基因重组基因纯化重组蛋白鱼类养殖业病害体外重组纯化

人融合蛋白基因GST-hPBD的构建、表达与纯化

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

沈阳部队医药 2004年第2期17卷 97-100页

作者：孟子敏韩雅玲康建刘海伟阎承慧王士雯沈阳军区总医院心血管内科 110016 解放军总医院老年心血管研究所

为构建和纯化融合蛋白基因GST-hPBD,采用RT-PCR方法克隆与活化Racl相结合的hPBD基因片段,构建pGEX-2T/hPBD原核表达载体,于大肠杆菌中诱导表达并纯化GST-hPBD融合蛋白。结果表明,经基因测序证实融合蛋白原核表达载体pGEX-2T/hPBD构建正... 详细信息

为构建和纯化融合蛋白基因GST-hPBD,采用RT-PCR方法克隆与活化Racl相结合的hPBD基因片段,构建pGEX-2T/hPBD原核表达载体,于大肠杆菌中诱导表达并纯化GST-hPBD融合蛋白。结果表明,经基因测序证实融合蛋白原核表达载体pGEX-2T/hPBD构建正确,在大肠杆菌中GST-hPBD融合蛋白表达纯度大于70%,其分子量为36 kD;Pull down分析检测到血管内皮ECV304细胞表达活化Racl蛋白。本研究结果为检测血管内皮细胞活化Racl表达奠定了实验基础。

关键词：人融合蛋白基因 GST-hPBD 基因构建基因表达基因纯化信号转导

HA20-lys10在大肠埃希菌中的融合表达纯化和凝胶阻滞试验

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

复旦学报（医学版） 2004年第1期31卷 32-35页

作者：孙兴会张宇清王霞侯敏谭理李平朱运松复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

目的表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原... 详细信息

目的表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力。方法用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lys10,并克隆于pET32a(+)原核表达载体。将重组表达质粒pET-HA-K转化大肠埃希菌BL21(DE3),当A(Abs)_(600nm)达到0.6时,加入终浓度为1mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。表达产物用亲和层析一步法进行纯化,然后用凝胶阻滞试验观察重组蛋白结合质粒的能力。结果 IPTG诱导后可获得相对分子质量约为27 000的目的蛋白,表达蛋白以可溶形式存在,占菌体蛋白20％以上。表达菌超声后,表达产物经亲和层析一步纯化后可获得纯度达85％以上目的蛋白。凝胶阻滞试验发现,纯化的重组蛋白在一定条件下可以与质粒结合,使质粒的迁移率明显改变。结论融合蛋白HA20—lys10有望用于受体介导基因转移,以提高基因转移的效率。

关键词： HA20-Iys10 大肠埃希菌凝胶阻滞试验融合基因基因表达基因纯化

利用新型表达载体一步获得HIV-1核壳蛋白p24纯品

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第5期23卷 375-379页

作者：王自春滕智平张晓光郭秀婵袁静明曾毅中国预防医学科学院病毒所山西大学

目的　利用新型原核表达载体获得人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)核壳蛋白p2 4纯品。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增出HIV 1HXB2株gag开放阅读框架的内壳蛋白p2 4的基因片段 ,将目的基因片段插入到新型表达载体pTXB中构建成重组表达... 详细信息

目的　利用新型原核表达载体获得人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)核壳蛋白p2 4纯品。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增出HIV 1HXB2株gag开放阅读框架的内壳蛋白p2 4的基因片段 ,将目的基因片段插入到新型表达载体pTXB中构建成重组表达质粒pTXB p2 4。表达产物的纯品通过几丁质珠 (chitinbeads)的亲和与柱上DTT的剪切而得到。用SDS PAGE和HPLC分析所得纯品的大小和纯度 ,用Westernblot和胶体金实验检测其抗原性。结果　构建的重组表达质粒pTXB p2 4经IPTG诱导得到C端融合Intein CBD的p2 4蛋白 ,该蛋白通过几丁质珠 (chitinbeads)的亲和与柱上DTT的剪切得到纯化的非融合的p2 4重组蛋白。HPLC分析表明其纯度可达 96 % ,胶体金结果显示纯化的p2 4可与HIV 1阳性患者的血清反应 ,具良好的抗原性。结论　利用新型原核表达载体可一步获得纯度为 96 %的非融合p2 4抗原纯品 ,为大规模生产该蛋白提供了可靠的保证。

关键词：人免疫缺陷病毒1型核壳蛋白 p24 基因表达基因纯化

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素蛋白的表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立与应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2005年第2期25卷 145-147页

作者：梁望旺何启盖刘正飞陈焕春吴斌徐晓娟李涛华中农业大学畜牧兽医学院湖北武汉430070

将含有猪胸膜肺炎放线杆菌毒素基因的质粒 p ET- Apx 转化到大肠杆菌 BL2 1 (DE3)。挑选出表达量最高的克隆子 ,于 37℃经 IPTG诱导表达。对表达条件进行优化 ,并对包涵体进行了提纯和复性。用复性后的蛋白作抗原 ,建立了检测猪传染... 详细信息

将含有猪胸膜肺炎放线杆菌毒素基因的质粒 p ET- Apx 转化到大肠杆菌 BL2 1 (DE3)。挑选出表达量最高的克隆子 ,于 37℃经 IPTG诱导表达。对表达条件进行优化 ,并对包涵体进行了提纯和复性。用复性后的蛋白作抗原 ,建立了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抗体的间接 EL ISA。试验的最佳反应条件为 :最佳抗原稀释度为 1∶ 1 6 0 ,抗原包被液用 Tris- HCl(p H8.0 ) ,封闭液用含 0 .4 %BSA的 PBST,血清稀释度为 1∶ 4 0 ,二抗稀释度为 1∶ 6 0 0 0 ,稀释液用含0 .4 %BSA的 PBST,血清反应时间为 30 min,二抗反应时间为 4 5 min,底物反应时间为 2 0 m in。与间接血凝 (IHA)检测结果比较 ,建立的 EL ISA诊断方法具有良好的稳定性和可重复性 ,并具有较高的特异性和敏感性。用建立的间接EL ISA对 2 5 0 3份临床送检血清进行了血清流行病学调查 ,结果表明 ,胸膜肺炎放线杆菌抗体的阳性率为 6 3%。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌毒素基因表达基因纯化间接ELISA

天蚕素A-蜂毒素杂合肽用pBV220载体的表达、纯化和活性测定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物工程杂志 2005年第10期25卷 29-33页

作者：王云起刘飞鹏李月琴张欣蔡继业暨南大学化学系暨南大学生物工程系暨南大学化学系广州510632

为提高抗菌肽的表达,在抗菌肽的N端融合了1段酸性小肽以中和表达产物对宿主的毒性;并将融合肽基因同向串连成多拷贝,在大肠杆菌中获得了较高的表达。用化学合成法分别合成了编码天蚕素A(1-8)-蜂毒素(1-10)杂合肽和酸性小肽的DNA片段,首... 详细信息

为提高抗菌肽的表达,在抗菌肽的N端融合了1段酸性小肽以中和表达产物对宿主的毒性;并将融合肽基因同向串连成多拷贝,在大肠杆菌中获得了较高的表达。用化学合成法分别合成了编码天蚕素A(1-8)-蜂毒素(1-10)杂合肽和酸性小肽的DNA片段,首先将其拼接成融合肽的完整基因,然后通过前后接头将融合肽基因连接成两侧具有EcoRI和SalI酶切位点的同向串连的多拷贝基因。将5份拷贝的基因克隆至pBV220表达载体,转化***5α,温度诱导得到表达量为35%的融合蛋白。表达产物主要以包涵体形式存在,将包涵体溶解,经Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析获得纯化的融合蛋白。融合蛋白再经CNBr切割和阳离子交换层析,得到纯化的抗菌肽,经蛋白质N端测序确认序列正确。琼脂糖扩散法和液相测定法证明了纯化的抗菌肽具有抗菌活性。

关键词：天蚕素A-蜂毒素杂合肽 pBV220载体基因表达基因纯化基因活性抗菌肽免疫系统

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

克隆的意义与价值标准

自然辩证法通讯 1998年第1期20卷 65-71页

作者：徐兰中国社会科学哲学研究所

克隆技术作为生物工程的关键性手段，在科技和社会发展中，具有不可忽视的重要作用。一方面，世界面临着日益严峻的人口问题、人类的生存和健康问题、粮食问题、资源问题、环境保护问题，在特定的条件下，粮食的增长和资源的利用都是有... 详细信息

克隆技术作为生物工程的关键性手段，在科技和社会发展中，具有不可忽视的重要作用。一方面，世界面临着日益严峻的人口问题、人类的生存和健康问题、粮食问题、资源问题、环境保护问题，在特定的条件下，粮食的增长和资源的利用都是有极限的，克隆等生物工程技术的应用为解决这些日益尖锐的问题和矛盾提供了无限多种可能的途径和方法；另一方面，克隆技术的应用又会引起一系列伦理问题，尤其是人的克隆。我们究竟应以什么样的价值标准作为行动的准则呢？有利于人类生存质量的提高和可持续性发展应该作为指导我们评介能否应用该技术的价值标准。

关键词：克隆技术克隆人基因纯化价值标准

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

王辉古稀之年追梦不止

新西部 2016年第5期 27-29页

作者：杜尚儒

有人说,他是陕西的袁隆平。他主持创制的＂常规优化育种法＂是选育综合性状优良的突破性小麦新品种的高效育种技术新体系,对陕西及全国小麦育种科研起到显著的推动作用。＂培育一个良种,从第一代杂交到基因纯化、性状稳定,最后通过审定... 详细信息

有人说,他是陕西的袁隆平。他主持创制的＂常规优化育种法＂是选育综合性状优良的突破性小麦新品种的高效育种技术新体系,对陕西及全国小麦育种科研起到显著的推动作用。＂培育一个良种,从第一代杂交到基因纯化、性状稳定,最后通过审定,至少需要经过八代,每一代就是一年。有的甚至还需要十几年时间。＂就是这种寂寞枯燥的工作,他一干就是一辈子。

关键词：王辉一代杂交基因纯化育种法西农八代品种审定省科技进步性状稳定品种选育