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国外医学（遗传学分册） 1994年第4期17卷 178-183页

作者：冀群升刘德培中国医学科学院基础医学研究所

原癌基因在细胞增殖、分化和胚胎发育过程中的正常生理功能正日益受到重视。近年来发展的基因同源重组即基因打靶技术为直接研究原癌基因的功能提供了新的途径，因而引起人们的关注和兴趣。

关键词：基因定位突变原癌基因胚胎发育

采用定位基因缺失突变技术在大肠杆菌中高效表达肿瘤坏死因子

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生物工程学报 1990年第3期6卷 181-187页

作者：张德震吴淑华张智清金奇赵新华赵小侠苏成芝侯云德第四军医大学生物化学教研室病毒基因工程国家重点实验室

肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基... 详细信息

肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG),形成一个限制酶NcoI的识别位点CCATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的NcoI-Pst Ⅰ片段,插入到原核表达载体pBV220中,获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明,肿瘤坏死因子的表达量可达3.42×10~8u/L菌液。SDS-PAGE电泳凝胶扫描结果显示,肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22.8%。抗肿瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。SD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。

关键词：肿瘤坏死因子基因定位突变

人睫状神经营养因子基因及突变体在大肠杆菌中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1995年第6期27卷 675-679页

作者：何成陈江野路长林敖世洲中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室第二军医大学神经生物学教研室

人睫状神经营养因子（ｈｕｍａｎｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ｈＣＮＴＦ）ｃＤＮＡ克隆入具有ＰＬ启动子的表达载体，转化大肠杆菌ＨＢ１０１；构建成表达ｈＣＮＴＦ菌株。热诱导后，ｈＣＮＴＦ的表达量达菌... 详细信息

人睫状神经营养因子（ｈｕｍａｎｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ｈＣＮＴＦ）ｃＤＮＡ克隆入具有ＰＬ启动子的表达载体，转化大肠杆菌ＨＢ１０１；构建成表达ｈＣＮＴＦ菌株。热诱导后，ｈＣＮＴＦ的表达量达菌体总蛋白量的２５％。用离子交换层析、凝胶过滤层析从菌体裂解液中纯化了ｈＣＮＴＦ。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ表明ｈＣＮＴＦ的分子量约为２４ｋｄ，Ｎ端氨基酸序列分析结果与依基因核苷酸推导序列相符。纯化的ｈＣＮＴＦ能够促进体外培养的１０天龄鸡胚背根神经节神经元的存活。用寡核苷酸诱导基因突变法，将ｈＣＮＴＦ第１７位Ｃｙｓ突变为Ｓｅｒ，１７Ｓｅｒ－ｈＣＮＴＦ神经营养活性与原型相当。

关键词：人睫状神经营养因子基因重组基因定位突变

白细胞介素－2第17和20位残基在结构功能中的重要性研究

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1995年第2期27卷 153-157页

作者：徐荻蒋春雷曹蕾孙兰英刘新垣中国科学院上海生物化学研究所

用基因定位突变法，将白细胞介素－２（ＩＬ－２）分子中１７Ｌｅｕ和２０Ａｓｐ进行一系列突变，并测定各突变体生物活性与空间结构的变化。分析结果表明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ时，ＩＬ－２的空间结构无明显变化。生物活性却显著下降... 详细信息

用基因定位突变法，将白细胞介素－２（ＩＬ－２）分子中１７Ｌｅｕ和２０Ａｓｐ进行一系列突变，并测定各突变体生物活性与空间结构的变化。分析结果表明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ时，ＩＬ－２的空间结构无明显变化。生物活性却显著下降；２０Ａｓｐ突变为Ｌｅｕ，以及１７Ｌｅｕ与２０Ａｓｐ对调后，均导致ＩＬ－２的空间结构发生变化，并严重影响其生物活性。上述结果说明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ后对活性的影响并非由空间结构变化所引起，而与残基本身性质有关：１７Ｌｅｕ与２０Ａｓｐ这两个重要的残基，必须位于各自特定的空间位置，才能发挥其生物作用。

关键词：白细胞介素-2 基因定位突变结构-功能关系

定点突变法对人白细胞介素-2C末端α螺旋的结构和功能研究

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生物工程学报 1993年第4期9卷 298-302页

作者：徐荻蒋春雷石颖虞建良孙兰英范佩芳刘新垣中国科学院上海生物化学研究所

用寡核苷酸诱导的基因定位突变法，将人白细胞介素－２Ｃ末端两亲性ａ螺旋中１２５位和１２７位基分别或同时突变为Ｐｒｏ，并测定其生物活性和空间结构。结果发现所得突变体的生物学活性均急下降，同时ａ螺旋含量以及Ｃ端螺旋中残基的... 详细信息

用寡核苷酸诱导的基因定位突变法，将人白细胞介素－２Ｃ末端两亲性ａ螺旋中１２５位和１２７位基分别或同时突变为Ｐｒｏ，并测定其生物活性和空间结构。结果发现所得突变体的生物学活性均急下降，同时ａ螺旋含量以及Ｃ端螺旋中残基的空间位置也发生了不同程度的变化。结果提示，Ｃ端ａ螺旋尤其是其疏水面的完整性对维持白介素－２的生物活性有重要作用。

关键词：白细胞介素2 基因定位突变结构

人白细胞介素－2第20位残基局部空间结构稳定位对活性的影响

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生物化学与生物物理学报 1994年第1期26卷 1-6页

作者：徐荻蒋春雷石颖孙兰英徐静芬曹蕾刘新垣中国科学院上海生物化学研究所第二军医大学神经生物学教研室

用寡核苷酸诱导的基因定位突变法，将人白细胞介素－２（ＩＬ－２）第２０位Ａｓｐ分别突变为Ａｒｇ、Ｌｙｓ．和Ａｓｎ，比较第２０位残基碱性基因对ＩＬ－２活力的影响，结果２０Ａｓｐ突变为碱性残基时，ＩＬ－２活性急剧下降，但突... 详细信息

用寡核苷酸诱导的基因定位突变法，将人白细胞介素－２（ＩＬ－２）第２０位Ａｓｐ分别突变为Ａｒｇ、Ｌｙｓ．和Ａｓｎ，比较第２０位残基碱性基因对ＩＬ－２活力的影响，结果２０Ａｓｐ突变为碱性残基时，ＩＬ－２活性急剧下降，但突变为Ａｒｇ时所导致的活性下降较突变为Ｌｙｓ严重３０００倍以上，从空间结构变化上对这２个碱性残基造成的如此大的活性差异进行了分析，发现２０Ａｒｇ突变后对。１２１Ｔｒｐ的微环境有极为显著的影响。结果提示２０Ａｓｐ在与β亚基作用的同时，其局部空间结构的稳定对维持ＩＬ－２的生物学活性也有重要作用。

关键词：白细胞介素-2 基因定位突变结构-功能关系

肿瘤坏死因子第59位酪氨酸对其细胞毒活性的意义

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生物化学杂志 1992年第2期8卷 138-143页

作者：张德震陈南春智刚吴淑华苏成芝第四军医大学生物化学教研室西安710032 预防医学科学院病毒学研究所

肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)的基因克隆表达成功后,已进行了广泛的实验室研究,并进入Ⅰ期及Ⅱ期临床试验。但关于肿瘤坏死因子结构与功能关系人们尚所知甚少,阻碍了对肿瘤坏死因子各种生物活性的机制研究,也影响了肿瘤坏... 详细信息

肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)的基因克隆表达成功后,已进行了广泛的实验室研究,并进入Ⅰ期及Ⅱ期临床试验。但关于肿瘤坏死因子结构与功能关系人们尚所知甚少,阻碍了对肿瘤坏死因子各种生物活性的机制研究,也影响了肿瘤坏死因子的临床应用。本研究为肿瘤坏死因子结构与功能关系研究的一部分。肿瘤坏死因子不仅有广泛的生物学活性,也可引起严重的毒副作用。本文用寡核苷酸诱导的体外基因定点突变法,选择位于肿瘤坏死因子分子中央保守区第59位酪氨酸,将其改变为门冬氨酸。所选用的琥珀突变选择性突变系统,造成肿瘤坏死因子基因突变,获得较高的突变效率(约80％)。DNA序列分析证实第59位酪氨酸密码子TAC突变为门冬氨酸密码子GAT。将突变体肿瘤坏死因子基因于同一原核表达载体进行表达,结果表明,突变后不影响表达量及表达产物分子量,但其细胞毒比活性下降724倍,表明Tyr59对于维持肿瘤坏死因子细胞毒活性非常重要。

关键词：肿瘤坏死因子基因定位突变

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α-干扰素镇痛功能位点研究

中国神经免疫学和神经病学杂志 2003年第1期10卷 41-43页

作者：王云霞崔瑞耀宋连霞蒋春雷青岛大学医学院病理生理学教研室山东青岛266021 第二军医大学航海医学教研室上海200433

目的　探讨 α-干扰素 (IFN-α)阿片样镇痛作用的结构基础。方法　采用基因定位突变技术和蛋白质工程方法 ,改变人 IFN-α的基因和分子结构 ,并测定获得的 IFN-α突变体的抗病毒活性和阿片样镇痛活性。结果人 IFN-α分子第 1 2 2位 Tyr... 详细信息

目的　探讨 α-干扰素 (IFN-α)阿片样镇痛作用的结构基础。方法　采用基因定位突变技术和蛋白质工程方法 ,改变人 IFN-α的基因和分子结构 ,并测定获得的 IFN-α突变体的抗病毒活性和阿片样镇痛活性。结果人 IFN-α分子第 1 2 2位 Tyr残基突变为 Ser后 ,仍保留了 3 4.1 %抗病毒活性 ,但镇痛能力基本消失。结论　人IFN-α的镇痛功能位点可能位于 IFN-α分子空间结构上第 1 2 2位 Tyr残基附近区域。提示 IFN-α分子存在着相互独立的免疫和镇痛两个功能位点。

关键词： α-干扰素基因定位突变功能位点阿片受体镇痛