人睫状神经营养因子基因及突变体在大肠杆菌中的表达

作     者：何成 陈江野 路长林 敖世洲 

作者机构：中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室 第二军医大学神经生物学教研室 

出 版 物：《Acta Biochimica et Biophysica Sinica》 (生物化学与生物物理学报(英文版))

年 卷 期：1995年第27卷第6期

页      面：675-679页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：人睫状神经营养因子 基因重组 基因定位突变 

摘      要：人睫状神经营养因子（ｈｕｍａｎｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ｈＣＮＴＦ）ｃＤＮＡ克隆入具有ＰＬ启动子的表达载体，转化大肠杆菌ＨＢ１０１；构建成表达ｈＣＮＴＦ菌株。热诱导后，ｈＣＮＴＦ的表达量达菌体总蛋白量的２５％。用离子交换层析、凝胶过滤层析从菌体裂解液中纯化了ｈＣＮＴＦ。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ表明ｈＣＮＴＦ的分子量约为２４ｋｄ，Ｎ端氨基酸序列分析结果与依基因核苷酸推导序列相符。纯化的ｈＣＮＴＦ能够促进体外培养的１０天龄鸡胚背根神经节神经元的存活。用寡核苷酸诱导基因突变法，将ｈＣＮＴＦ第１７位Ｃｙｓ突变为Ｓｅｒ，１７Ｓｅｒ－ｈＣＮＴＦ神经营养活性与原型相当。